細(xì)胞生物學(xué)翟中和第三版2

第二章細(xì)胞生物學(xué)實驗技術(shù)第一節(jié)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法一、光學(xué)顯微鏡二、電子顯微鏡三、掃描隧道顯微鏡第二節(jié)細(xì)胞組分的分析方法一、用超速離心技術(shù)別離細(xì)胞器與生物大分子及其復(fù)合物二、細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、糖與脂質(zhì)等成分的顯示方法三、特異蛋白抗原的定位與定性四、細(xì)胞內(nèi)特異核酸序列的定位與定性五、應(yīng)用放射自顯影技術(shù)研究生物大分子在細(xì)胞內(nèi)的合成動態(tài)六、定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)第三節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)一、細(xì)胞培養(yǎng)二、細(xì)胞工程第四節(jié)用于細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物第一節(jié)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法光學(xué)顯微鏡：以可見光〔或紫外線〕為光源。電子顯微鏡：以電子束為光源。一、光學(xué)顯微鏡〔一〕普通光學(xué)顯微鏡1、構(gòu)成：①照明系統(tǒng)②光學(xué)放大系統(tǒng)③機(jī)械裝置2、原理：經(jīng)物鏡形成倒立實像，經(jīng)目鏡進(jìn)一步放大成像。3.分辨力：指分辨物體最小間隔的能力。R=0.61λ/N．A．其中λ為入射光線波長；N．A：為鏡口率＝ｎsinα/2，n=介質(zhì)折射率；α=鏡口角〔樣品對物鏡鏡口的張角〕。思考：如何提高顯微鏡的分辨能力？表一、幾種介質(zhì)的折射率顯微鏡的幾個光學(xué)特點(diǎn)：制作光學(xué)鏡頭所用的玻璃折射率為1.65~1.78，所用介質(zhì)的折射率越接近玻璃的越好。sinα/2的最大值必然小于1；介質(zhì)為空氣，鏡口率一般為0.05~0.95；油鏡頭用香柏油為介質(zhì)，鏡口率可接近1.5。普通光線的波長為400~700nm，分辨力數(shù)值不會小于.2μm，人眼的分辨力為0.2mm,因此顯微鏡的最大設(shè)計倍數(shù)為1000X。〔二〕相差和微分干預(yù)顯微技術(shù)干預(yù):兩列頻率相同的光波在空中相遇時發(fā)生疊加，在某些區(qū)域總加強(qiáng)，在另外一些區(qū)域總減弱，出現(xiàn)明暗相間的條紋或者是彩色條紋的現(xiàn)象叫做光的干預(yù)。相差顯微鏡把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的比照度，使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。在構(gòu)造上，相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處。1、環(huán)形光闌〔annulardiaphragm〕：位于光源與聚光器之間。2、相位板〔annularphaseplate〕：物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板，可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。用途：觀察未經(jīng)染色的玻片標(biāo)本微分干預(yù)顯微鏡1952年，Nomarski創(chuàng)造，微分干預(yù)顯微鏡是以平面偏振光為光源，光線經(jīng)棱鏡折射后分成兩束，在不同時間經(jīng)過樣品的相鄰部位，然后經(jīng)過另一棱鏡將這兩束光集合，從而樣品中厚度上的微小差異就會轉(zhuǎn)化成明暗區(qū)別，增加了樣品反差，造成了標(biāo)本的人為三維立體感，類似大理石上的浮雕。微分干預(yù)顯微鏡適于研究活細(xì)胞中較大的細(xì)胞器，如果接上錄像裝置可以記錄活細(xì)胞中的顆粒以及細(xì)胞器的運(yùn)動?！踩碂晒怙@微鏡特點(diǎn)：光源為紫外線，波長較短，分辨力高于普通顯微鏡；有兩個特殊的濾光片；照明方式通常為落射式。用于觀察能激發(fā)出熒光的結(jié)構(gòu)。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診斷。Fluorescenceimageofepithelialcell,DNAinblueandMicrotubulesingreen〔四〕激光共聚焦掃描顯微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM用激光作光源，逐點(diǎn)、逐行、逐面快速掃描。能顯示細(xì)胞樣品的立體結(jié)構(gòu)。分辨力是普通光學(xué)顯微鏡的3倍。用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不同層次，形成立體圖像。laserconfocalscanningmicroscope,LCSMLCSMImageofaXenopusMelanophore

microtubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)(五)熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)CFP的發(fā)射光譜與YFP的吸收光譜有相當(dāng)?shù)闹丿B，當(dāng)它們足夠接近時，用CFP的吸收波長激發(fā)，CFP的發(fā)色基團(tuán)將會把能量高效率地共振轉(zhuǎn)移至YFP的發(fā)色基團(tuán)上，所以CFP的發(fā)射熒光將減弱或消失，主要發(fā)射將是YFP的熒光。

應(yīng)用:1、檢測酶活性變化2、關(guān)于膜蛋白的研究3、細(xì)胞膜受體之間相互作用4、細(xì)胞內(nèi)分子之間相互作用

(六)熒光漂白恢復(fù)技術(shù)FRAP(光漂白后熒光恢復(fù))就是在光漂白后對樣本確定區(qū)中的熒光恢復(fù)。FRAP是由沒有漂白的熒光團(tuán)由周圍進(jìn)入漂白區(qū)FRAP的運(yùn)動引起的。FRAP用于測量2-維或3-維分子運(yùn)動的力度。分子運(yùn)動包括膜或活細(xì)胞內(nèi)用熒光標(biāo)明的分子的擴(kuò)散、轉(zhuǎn)移或其他類型的運(yùn)動。

二、電子顯微鏡〔一〕電子顯微鏡的根本知識1、電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡的根本區(qū)別不同光線的波長２、電子顯微鏡的分辨本領(lǐng)和有效放大倍數(shù)分辨本領(lǐng)：是指電鏡處于最正確狀態(tài)下的分辨率電鏡分辨率受制樣技術(shù)的影響。３、電子顯微鏡的根本構(gòu)造１〕電子束照明系統(tǒng)２〕成像系統(tǒng)３〕真空系統(tǒng)４〕記錄系統(tǒng)〔二〕、主要電鏡制樣技術(shù)介紹1、超薄切片技術(shù)電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察的標(biāo)本須制成厚度僅40-50nm的超薄切片，(1)固定：通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐級脫水(2)包埋：環(huán)氧樹脂包埋(3)切片：以熱膨脹或螺旋推進(jìn)的方式切片(4)染色：重金屬〔鈾、鉛〕鹽染色形成明暗的黑白圖象2、負(fù)染技術(shù)用重金屬鹽(如磷鎢酸)對鋪展在載網(wǎng)上的樣品染色；吸去染料，枯燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸的出地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負(fù)染效果，分辨力可達(dá)1.5nm左右。NegativeStainedActin3、冰凍蝕刻freeze-etching亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中冰凍。然后斷開，升溫后，冰升華，暴露出了斷面結(jié)構(gòu)。向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑。然后將組織溶掉，把碳和鉑的膜剝下來，此膜即為復(fù)膜〔replica〕。４、電鏡三維重構(gòu)技術(shù)對樣品在不同的傾角拍照，得到圖片經(jīng)處理后而展現(xiàn)的電子密度圖。電鏡三維重構(gòu)技術(shù)與X-射線晶體衍射技術(shù)及核磁共振分析技術(shù)相結(jié)合，是當(dāng)前結(jié)構(gòu)生物學(xué)〔StructuralBiology〕〔主要研究生物大分子空間結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系〕的主要實驗手段。５、掃描電鏡技術(shù)20世紀(jì)60年代問世，用來觀察標(biāo)本外表結(jié)構(gòu)。分辨力為6~10nm，由于人眼的分辨力〔區(qū)別熒光屏上距離最近兩個光點(diǎn)的能力〕為0.2mm，掃描電鏡的有效放大倍率為0.2mm/10nm=20000X。Scanningelectronmicroscope〔SEM〕工作原理：是用一束極細(xì)的電子束掃描樣品，在樣品外表激發(fā)出次級電子，次級電子的多少與樣品外表結(jié)構(gòu)有關(guān)，次級電子由探測器收集，信號經(jīng)放大用來調(diào)制熒光屏上電子束的強(qiáng)度，顯示出與電子束同步的掃描圖像。為了使標(biāo)本外表發(fā)射出次級電子，標(biāo)本在固定、脫水后，要噴涂上一層重金屬膜，重金屬在電子束的轟擊下發(fā)出次級電子信號。掃描電子顯微鏡原理人類精子三、掃描隧道顯微鏡

scanningtunnelingmicroscope，原理：根據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計，當(dāng)原子尺度的針尖在不到一個納米的高度上掃描樣品時，此處電子云重疊，外加一電壓〔2mV~2V〕，針尖與樣品之間形成隧道電流。電流強(qiáng)度與針尖和樣品間的距離有函數(shù)關(guān)系，將掃描過程中電流的變化轉(zhuǎn)換為圖像，即可顯示出原子水平的凹凸形態(tài)。分辨率：橫向為0.1~0.2nm，縱向可達(dá)0.001nm。用途：三態(tài)〔固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)〕物質(zhì)均可進(jìn)行觀察。掃描隧道顯微鏡原理第二節(jié)細(xì)胞組分的分析方法一、用超速離心技術(shù)別離細(xì)胞器與生物大分子及其復(fù)合物轉(zhuǎn)速為10~25kr/min的離心機(jī)稱為高速離心機(jī)。轉(zhuǎn)速>25kr/min，離心力>89Kｇ者稱為超速離心機(jī)。目前超速離心機(jī)的最高轉(zhuǎn)速可達(dá)100000r/min，離心力超過500Kg。超速離心技術(shù)：用途：別離大小相差懸殊的細(xì)胞和細(xì)胞器。沉降順序：核——線粒體——溶酶體與過氧化物酶體——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體——核蛋白體?？蓪⒓?xì)胞器初步別離，常需進(jìn)一步通過密度梯離心再行別離純化。密度梯度離心用介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過離心力場的作用使細(xì)胞分層、別離。類型：速度沉降、等密度沉降。常用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。別離活細(xì)胞的介質(zhì)要求：1〕能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時，粘度不高；2〕PH中性或易調(diào)為中性；3〕濃度大時滲透壓不大；4〕對細(xì)胞無毒。Velocity(A)andEquilibrium(B)sedimentation二、細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、糖與脂質(zhì)等成分的顯示方法１、DNA經(jīng)1N鹽酸水解，其上的嘌呤堿和脫氧核糖之間的鍵翻開，使脫氧核糖的第一碳原子上形成游離的醛基，這些醛基與Schiff試劑反響。Schiff試劑是由堿性品紅和偏重亞硫酸鈉相作用，形成無色的品紅液，當(dāng)無色品紅與醛基結(jié)合形成紫紅色的化合物。因此凡有DNA的地方，都能顯示紫紅色。２、四氧化鋨與不飽和的脂肪酸反響呈黑色，證明脂肪滴的存在，蘇丹Ⅲ使脂滴呈深紅３、蛋白質(zhì)定性：米倫反響，重氮反響三、特異蛋白抗原的定位與定性(一)免疫熒光技術(shù)將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，試劑與標(biāo)本中相應(yīng)的抗體或抗原反響后，測定復(fù)合物中的熒光素，這種免疫技術(shù)，稱為免疫熒光素技術(shù)。常用的標(biāo)記物有熒光素和酶。免疫熒光法〔immunofluorescenttechnique〕：常用的螢光素有異硫氰酸熒光素、羅丹明等。酶標(biāo)免疫法〔enzyme-labeledantibodymethod〕：常用的酶有辣根過氧化物酶，酶與底物發(fā)生反響后形成不透明的沉積物，從而顯示出抗原存在的部位。間接法原理示意圖補(bǔ)體結(jié)合法原理示意圖(二)免疫電鏡技術(shù)又稱為免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)是在免疫組織化學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)上開展起來的，它是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，在超微結(jié)構(gòu)水平上定位、定性及半定量抗原的技術(shù)方法。該方法為精確定位各種抗原的存在部位、研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系及其在病理情況下所發(fā)生的變化提供了有效的手段。免疫電鏡技術(shù)主要經(jīng)歷了鐵蛋白標(biāo)記技術(shù)、酶標(biāo)記技術(shù)以及膠體金標(biāo)記技術(shù)三個主要開展階段。鐵蛋白標(biāo)記技術(shù)適用于細(xì)胞膜外表抗原的定位，由于其分子量較大，不易穿透細(xì)胞膜，定位細(xì)胞內(nèi)抗原較為困難。鐵蛋白對電鏡包埋劑的非特異性吸附很強(qiáng)，不適用于包埋后免疫標(biāo)記，使其應(yīng)用受到一定限制。酶標(biāo)記免疫電鏡技術(shù)是將酶〔主要是過氧化物酶〕與抗體相交聯(lián)，抗原抗體反響后，加底物顯示酶的活性部位，酶反響產(chǎn)物經(jīng)OsO4處理變?yōu)榫哂幸欢娮用芏鹊匿~黑，可在電鏡下觀察。過氧化物酶的相對分子量較小，與其交聯(lián)的抗體較易穿透經(jīng)處理的細(xì)胞膜，可用于細(xì)胞內(nèi)抗原的定位。但是酶反響產(chǎn)物比較彌散，因此分辨率不如顆粒性標(biāo)記物高。膠體金標(biāo)記免疫電鏡技術(shù)是目前應(yīng)用最廣的免疫電鏡標(biāo)記物，該技術(shù)是將膠體金作為抗體的標(biāo)記物，用于細(xì)胞外表和細(xì)胞內(nèi)多種抗原的精確定位。膠體金主要具有以下幾個優(yōu)點(diǎn)：〔1〕膠體金能穩(wěn)定并迅速地吸附蛋白，而且蛋白的生物活性不發(fā)生明顯改變，可制備抗體-膠體金、蛋白A-膠體金、卵白素-膠體金、植物凝集素-膠體金等用于免疫電鏡；〔2〕在電鏡下金顆粒電子密度高、圓形且界線清晰，易于識別，定位比酶反響物更精確；〔3〕膠體金標(biāo)記物易于制備，并可以根據(jù)需要制備大小不同〔1～150nm〕的膠體金，因此可進(jìn)行免疫電鏡的雙重或多重標(biāo)記；〔4〕金顆粒能發(fā)射強(qiáng)烈的二次電子，是掃描電鏡的理想標(biāo)記物；〔5〕膠體金經(jīng)過銀顯影增強(qiáng)后，金顆粒外周吸附大量銀顆粒而呈現(xiàn)黑色或黑褐色，因此也能用于光學(xué)顯微鏡觀察。此外，膠體金還能用于冷凍蝕刻標(biāo)本的免疫標(biāo)記。四、細(xì)胞內(nèi)特異核酸序列的定位與定性具有互補(bǔ)核苷酸序列的兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)條件下，通過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA雜交的雙鏈分子。這種技術(shù)可用來測定單鏈分子核苷酸序列間是否具有互補(bǔ)關(guān)系?！惨弧吃浑s交〔insituhybridization〕用于檢測染色體上的特殊DNA序列。最初是使用帶放射性的DNA探針，后來又創(chuàng)造了免疫探針法?！捕砈outhern雜交是體外分析特異DNA序列的方法，操作時先用限制性內(nèi)切酶將核DNA或線粒體DNA切成DNA片段，經(jīng)凝膠電泳別離后，轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上，再用探針雜交，通過放射自顯影，即可識別出與探針互補(bǔ)的特殊核苷序列。將RNA轉(zhuǎn)移到薄膜上，用探針雜交，那么稱為Northern雜交。五、應(yīng)用放射自顯影技術(shù)研究生物大分子在細(xì)胞內(nèi)的合成動態(tài)用于研究標(biāo)記化合物在機(jī)體、組織和細(xì)胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用機(jī)理、作用部位等等。原理：將放射性同位素標(biāo)記的化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一段時間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。一般用14C和3H標(biāo)記。常用3H-TDR來顯示DNA，用3H-UDR顯示RNA；用3H氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3H甘露糖、3H巖藻糖研究多糖。14C半衰期為5730年，3H為12.5年。六、定量細(xì)胞化學(xué)分析技術(shù)〔一〕流式細(xì)胞術(shù)用途：對單個細(xì)胞進(jìn)行快速定量分析與分選的一門技術(shù)。原理：包在鞘液中的細(xì)胞通過高頻振蕩控制的噴嘴，形成包含單個細(xì)胞的液滴，在激光束的照射下，這些細(xì)胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測器檢測，轉(zhuǎn)換為電信號，送入計算機(jī)處理，輸出統(tǒng)計結(jié)果，并可根據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度的細(xì)胞亞群，別離純度可達(dá)99%。包被細(xì)胞的液流稱為鞘液，所用儀器稱為流式細(xì)胞計〔flowcytometer〕。〔二〕顯微分光光度測定技術(shù)細(xì)胞中有一些成分具有特定的吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)胞色素、維生素等都有自己特征性的吸收曲線。可利用顯微分光光度計對某些成分進(jìn)行定位、定性和定量測定。七、PCR技術(shù)PCR即：polymerasechainreaction。反響體系：①樣品DNA；②引物〔primer〕，約15-20個核苷酸；③4種dNTP；④TagDNA聚合酶，來自于嗜熱水生菌Thermusaquaticus，最適作用溫度75~80℃，短時間在95℃下不失活。⑤緩沖體系和Mg2+。反響過程：①變性：約90-95℃；②復(fù)性：約60℃左右；③延伸：70-75℃；④重復(fù)“變性——復(fù)性——延伸〞過程20-30次循環(huán)。PCR原理第三節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)一、細(xì)胞培養(yǎng)〔一〕動物細(xì)胞培養(yǎng)群體培養(yǎng)〔massculture〕：將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細(xì)胞貼壁生長，集合〔confluence〕后形成均勻的單細(xì)胞層；克隆培養(yǎng)〔clonalculture〕：培養(yǎng)高度稀釋的細(xì)胞懸液，細(xì)胞貼壁生長，每一個細(xì)胞形成一個細(xì)胞集落，稱為克隆。轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)法：為制取細(xì)胞產(chǎn)品而設(shè)計，大容量旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，使培養(yǎng)的細(xì)胞始終處于懸浮狀態(tài)之中。原代培養(yǎng)〔primaryculture〕：即：培養(yǎng)直接來自動物機(jī)體的細(xì)胞群，將細(xì)胞從一個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個培養(yǎng)瓶稱為傳代或傳代培養(yǎng)〔Passage〕。細(xì)胞株〔cellstrain〕：從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細(xì)胞群。細(xì)胞系〔cellline〕：從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細(xì)胞群或培養(yǎng)過程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，可無限繁殖?？寺　瞔lone〕：亦稱無性系。指由同一個祖先細(xì)胞通過有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群。細(xì)胞系名稱細(xì)胞類型來源3T3成纖維細(xì)胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細(xì)胞HenriettaLacksBHK21成纖維細(xì)胞敘利亞倉鼠PtKl上皮細(xì)胞袋鼠L6成肌細(xì)胞大鼠PCI2嗜鉻細(xì)胞大鼠SP2漿細(xì)胞小鼠SP2／0骨髓瘤漿細(xì)胞小鼠CHO卵巢細(xì)胞中國地鼠實驗室中常用的幾種細(xì)胞系〔二〕植物細(xì)胞培養(yǎng)外植體培養(yǎng)：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物的生長發(fā)育、分化和變異；進(jìn)行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)：適合于進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后的細(xì)胞，特點(diǎn)：①比較容易攝取外來的遺傳物質(zhì)，如DNA；②便于進(jìn)行細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞；③適宜條件下可產(chǎn)生細(xì)胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。單倍體培養(yǎng)：通過花藥或花粉培養(yǎng)可獲得單倍體植株。AnimalCellCulture二、細(xì)胞工程〔一〕細(xì)胞融合通過培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個或多個細(xì)胞合并成一個雙核或多核細(xì)胞的過程稱為細(xì)胞融合〔cellfusion〕或細(xì)胞雜交。同核體：相同基因型的細(xì)胞融合而成。異核體：不同基因型的細(xì)胞融合而成。自發(fā)融合：同種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中自發(fā)合并的現(xiàn)象。誘發(fā)融合：異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合。誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法：生物方法〔仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒〕、化學(xué)方法〔聚乙二醇PEG〕、物理方法〔電擊和激光〕。單克隆抗體技術(shù)正常淋巴細(xì)胞〔如小鼠脾細(xì)胞〕具有分泌抗體的能力，但不能長期培養(yǎng)，瘤細(xì)胞〔如骨髓瘤〕可以在體外長期培養(yǎng)，但不分泌抗體。于是英國人Kohler和Milstein1975將兩種細(xì)胞雜交而創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù)，獲1984年諾貝爾獎?！踩臣?xì)胞拆合與顯微操作技術(shù)１、物理法：用機(jī)械方法或短光波把細(xì)胞核去掉或使之失活，然后用微吸管吸取其他細(xì)胞的核，注入去核的細(xì)胞質(zhì)中，組成新的雜交細(xì)胞。２、化學(xué)法：用細(xì)胞松弛素B處理細(xì)胞，細(xì)胞出現(xiàn)排核現(xiàn)象，再結(jié)合離心技術(shù)，將細(xì)胞拆分為核體和胞質(zhì)體兩局部，由于核體外表包有一層細(xì)胞質(zhì)膜和少量的胞漿，因而在PEG或仙臺病毒的介導(dǎo)下，核體可與另一胞質(zhì)體融合，形成重組細(xì)胞。第四節(jié)用于細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物生物學(xué)家通過對選定的生物物種進(jìn)行科學(xué)研究，用于揭示某種具有普遍規(guī)律的生命現(xiàn)象，此時，這種被選定的生物物種就是模式生物。比方，孟德爾在揭示生物界遺傳規(guī)律時選用豌豆作為實驗材料，而摩根選用果蠅作為實驗材料，在他們的研究中，豌豆和果蠅就是研究生物體遺傳規(guī)律的模式生物。模式生物的特點(diǎn)有:1)生理特征能夠代表生物界的某一大類群。2)容易獲得并易于在實驗室內(nèi)飼養(yǎng)繁殖。3)容易進(jìn)行實驗操作,特別是遺傳學(xué)分析。4)個體較小,生長繁殖快。生命科學(xué)研究中常用的模式生物有：病毒，細(xì)菌，酵母，原生動物，黏菌，蛙，海膽，線蟲，果蠅，斑馬魚，小鼠１、病毒：１〕特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡單〔殼體和核酸〕進(jìn)入細(xì)胞才能進(jìn)行復(fù)制２〕應(yīng)用：適合遺傳操作，進(jìn)行有關(guān)生物大分子之間的相互作用，基因表達(dá)調(diào)空腫瘤的發(fā)生和防治等研究。作為外源基因的載體，用于蛋白質(zhì)功能的研究以及腫瘤的基因治療２、細(xì)菌１〕特點(diǎn)：細(xì)菌培養(yǎng)方便，生長快，基因結(jié)構(gòu)簡單，突變株的誘變和別離、鑒定容易轉(zhuǎn)基因技術(shù)成熟，進(jìn)行基因定位簡便易行。２〕應(yīng)用：轉(zhuǎn)基因技術(shù)。基因的表達(dá)調(diào)控３、酵母１〕特點(diǎn)是單細(xì)胞生物,可在根本培養(yǎng)基上生長,可通過改變物理或化學(xué)環(huán)境完全控制其生長在單倍體和二倍體的狀態(tài)下均可生長,并可在實驗條件下控制單倍體和二倍體之間的相互轉(zhuǎn)換,這對其基因功能的研究十分有利有將近31%編碼蛋白質(zhì)的基因或ORF與哺乳動物編碼蛋白質(zhì)的基因有高度的同源性２〕應(yīng)用：細(xì)胞周期調(diào)控，P34cdc28突變，細(xì)胞停留在G1/SP34cdc2突變，細(xì)胞停留在G２/S利用酵母基因突變?yōu)榛虮磉_(dá)調(diào)控，膜泡運(yùn)輸，細(xì)胞分化，衰老等研究領(lǐng)域提供研究材料４、線蟲１〕特點(diǎn):通身透明,