鼠單B細(xì)胞單抗制備服務(wù)技術(shù)問(wèn)答-20240109

鼠單抗制備過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題及解決措施提供單B細(xì)胞篩選技術(shù)制備鼠單抗過(guò)程中遇到的問(wèn)題及如何解決？B細(xì)胞培養(yǎng)在多大的孔板中培養(yǎng)？在96孔板進(jìn)行培養(yǎng)[1]?？装逯忻總€(gè)孔有多少個(gè)B細(xì)胞？根據(jù)每個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況不同，細(xì)胞個(gè)數(shù)在幾百到上千個(gè)不等。動(dòng)物如果對(duì)抗原產(chǎn)生過(guò)度免疫反應(yīng)怎么辦？調(diào)整抗原的劑量和免疫頻率，使用合適的免疫佐劑，并監(jiān)測(cè)動(dòng)物的免疫反應(yīng)以確保其健康。雜交瘤細(xì)胞融合效率低。優(yōu)化融合條件，考慮使用不同的雜交瘤細(xì)胞系，或嘗試其他融合方法。單個(gè)B細(xì)胞篩選后，抗體是如何組裝的，如何設(shè)計(jì)它的重鏈和輕鏈引物？分別從單個(gè)B細(xì)胞中擴(kuò)出抗體的重輕鏈基因，共表達(dá)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。引物可以通過(guò)germline基因序列來(lái)設(shè)計(jì)[2]。單克隆細(xì)胞穩(wěn)定性差怎么辦？定期檢測(cè)單克隆細(xì)胞的穩(wěn)定性，選擇穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和抗體生產(chǎn)?？贵w樣品可能受到污染或包含雜質(zhì)。使用適當(dāng)?shù)募兓夹g(shù)，例如親和層析或凝膠過(guò)濾，以提高抗體樣品的純度。B細(xì)胞大概培養(yǎng)多久可以用于ELISA檢測(cè)，抗體量會(huì)達(dá)到多少？B細(xì)胞培養(yǎng)10-12天可用于ELISA檢測(cè)，抗體量在0.2μg/mL~>10μg/mL。單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)會(huì)成為治療性抗體開(kāi)發(fā)的金標(biāo)準(zhǔn)嗎？雖然單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)逐漸成為抗體開(kāi)發(fā)的主流技術(shù)之一，但是抗體開(kāi)發(fā)的技術(shù)路線(xiàn)仍然有很多種，如雜交瘤和噬菌體展示等，這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，相互之間是互補(bǔ)關(guān)系[3]。單個(gè)B細(xì)胞直接裂解后與培養(yǎng)后的PCR成功率哪個(gè)更高？單個(gè)B細(xì)胞培養(yǎng)后的PCR成功率更高。培養(yǎng)后的B細(xì)胞經(jīng)過(guò)擴(kuò)增，細(xì)胞數(shù)增加，模板量更高?？返律飺碛胸S富的經(jīng)驗(yàn)積累、嚴(yán)格的質(zhì)控體系，提供的單B細(xì)胞單抗制備服務(wù)的周期短、不限種屬、可獲得抗體序列，得到的抗體具有更高的特異性和親和力。為了滿(mǎn)足客戶(hù)的不同需求，卡梅德生物能夠提供從抗原設(shè)計(jì)，合成與修飾，到動(dòng)物免疫，噬菌體文庫(kù)構(gòu)建與篩選，下游抗體修飾與應(yīng)用鑒定等一站式技術(shù)服務(wù)。參考文獻(xiàn)[1]TanSH,YoungD,ElsamanoudiS,etal.Abstract2565:DetectionofETV1expressioninhumanprostatetissuespecimensusinganovelandhighlyspecificrabbitmonoclonalantibody[C]//Proceedings:AACRAnnualMeeting2021;April10-15,2021andMay17-21,2021;Philadelphia,PA.2021.DOI:10.1158/1538-7445.AM2021-2565.[2]WallaceJL,ArforsKE,McknightGW.AmonoclonalantibodyagainsttheCD18leukocyteadhesionmoleculepreventsindomethacin-inducedgastricdamageintherabbit[J].Gastroenterology,1991,100(4):878-883.DOI:10.1016/0016-5085(91)90259-N.[3]Powell,WilliamC,Hicks,etal.Anewrabbitmonoclonalantibody(4B5)fortheimmunohistochemical(IHC)determinationoftheHER2statusinbreastcancer:comparisonwithCB11,fluorescenceinsituhybridization(FISH),andinterlaboratoryreproducibility.[J].