生化自動(dòng)化與標(biāo)準(zhǔn)化

2024/1/171自動(dòng)生化分析檢測(cè)方法的現(xiàn)狀及進(jìn)展蚌醫(yī)一附院檢驗(yàn)科李興武2024/1/172一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測(cè)定方法三、校準(zhǔn)與質(zhì)控四、測(cè)定工程間的順序安排2024/1/173一、生化分析儀的現(xiàn)狀自動(dòng)化釋義：自動(dòng)化即由機(jī)械化的儀器設(shè)備取代人的手工操作過程。2024/1/174主要組成：計(jì)算機(jī)前處置反響模塊監(jiān)測(cè)計(jì)算模塊機(jī)械手模塊2024/1/1752024/1/176分類：延續(xù)流動(dòng)式或管道式分立式——常用離心式干片式——急診常用2024/1/177功能：隨計(jì)算機(jī)與電子技術(shù)的開展：向通用化、全自動(dòng)、微量化、組合式〔模塊〕方向開展。即：測(cè)定技術(shù)與反響類型增多、測(cè)試速度快、通道多、軟件功能強(qiáng)、自動(dòng)化程度高、樣品與試劑用量少、人工干涉少。2024/1/178功能：采用生物技術(shù)與機(jī)電控制技術(shù)有機(jī)交融，集生物技術(shù)、機(jī)械設(shè)計(jì)、精細(xì)儀器、工業(yè)控制、電機(jī)技術(shù)、傳感技術(shù)、通訊技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)于一體自動(dòng)化分析儀任務(wù)站2024/1/179任務(wù)站：采用模塊化設(shè)計(jì)的思緒，實(shí)現(xiàn)良好的可擴(kuò)展性。結(jié)合條碼技術(shù)，再經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)與醫(yī)院信息系統(tǒng)相連，可到達(dá)整個(gè)數(shù)據(jù)共享，乃至遠(yuǎn)程共享(如獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室)。2024/1/1710全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化(TotalLaboratoryAutomation,TLA)是指將臨床實(shí)驗(yàn)室相互有關(guān)或互不相關(guān)的自動(dòng)化儀器串聯(lián)起來,構(gòu)成流水線作業(yè)的組合,構(gòu)成大規(guī)模的全檢測(cè)過程的自動(dòng)化.上世紀(jì)80年代末，日本Dr.Sasaki建立了世界上第一個(gè)組合式自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室2024/1/1711全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化表達(dá)以下幾個(gè)方面：1.提升快速報(bào)答結(jié)果的才干2.將檢驗(yàn)報(bào)告的誤差減少到最?。簛碓从跇颖镜?0%，來源于分析的不到30%。3.全面提升臨床檢驗(yàn)的管理2024/1/1712生化分析儀在國(guó)內(nèi)的運(yùn)用1.1980-1984：半自動(dòng)及小型全自動(dòng)為主，以美國(guó)儀器為主，國(guó)內(nèi)開場(chǎng)研制試劑2.1984-1990：型號(hào)多樣，日本儀器增多，與自動(dòng)化儀器配套的試劑盒投入消費(fèi)3.1990-今：高速高質(zhì)量的儀器，一些方法學(xué)淘汰，從大醫(yī)院開場(chǎng)逐漸建立Lis系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)共享，逐漸實(shí)現(xiàn)全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化2024/1/1713未來實(shí)驗(yàn)室組織及檢驗(yàn)手段將向兩極化開展：★一方面是實(shí)驗(yàn)室全自動(dòng)化或全程自動(dòng)化，自動(dòng)化儀器將生化、免疫、血液、尿液及藥物檢測(cè)等合為一體?！锪硪环矫媸菍?shí)驗(yàn)室儀器的小型化，快速、即時(shí)、簡(jiǎn)易的檢驗(yàn)手段，用于現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn)、床邊檢驗(yàn)、醫(yī)師診所和家庭。2024/1/1714一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測(cè)定方法三、校準(zhǔn)與質(zhì)控四、測(cè)定工程間的順序安排2024/1/1715二、生化分析儀的測(cè)定方法終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法二點(diǎn)終點(diǎn)法免疫比濁法雙波長(zhǎng)法2024/1/1716一點(diǎn)終點(diǎn)法的設(shè)置：以R和S混合之前的空氣空白、水空白或試劑空白的吸光度值為測(cè)定計(jì)算基點(diǎn)，以反響到達(dá)平衡的吸光度讀數(shù)減去空白讀數(shù)，校準(zhǔn)曲線經(jīng)過零點(diǎn)且成直線，對(duì)于反響速度快的多用：如TP、ALB等二、測(cè)定方法2024/1/1717二、測(cè)定方法一點(diǎn)終點(diǎn)法反響曲線AlT〔時(shí)間〕AS+R(吸光度〕2024/1/1718二點(diǎn)終點(diǎn)法的設(shè)置：常用單試劑分析：當(dāng)測(cè)定波長(zhǎng)與干擾物的吸收光譜有重疊時(shí)(如脂血、溶血、黃疸)，消除樣本空白的干擾。如GLU500nm,Hb500nm(整個(gè)過程OD不變),經(jīng)過雙波長(zhǎng)可消除其干擾。二、測(cè)定方法2024/1/1719二點(diǎn)終點(diǎn)法的設(shè)置：常用雙試劑法：除可消除樣本空白的干擾外，還可消除內(nèi)源性物質(zhì)的干擾。二、測(cè)定方法2024/1/1720AmTAR2AlS+R1(吸光度〕〔時(shí)間〕兩點(diǎn)終點(diǎn)Ax=樣本空白A2-kAl〔液量校正系數(shù)〕k=S+VlS+Vm二、測(cè)定方法2024/1/1721免疫比濁法經(jīng)過物質(zhì)對(duì)光的散射來測(cè)定物質(zhì)含量的方法。散射比濁：特定蛋白分析儀透射比濁：自動(dòng)生化分析儀通常作兩點(diǎn)終點(diǎn)法分析，多采用多點(diǎn)校準(zhǔn)。運(yùn)用：用Ab測(cè)定Ag〔主要為微量蛋白：IG、C、APOA/B、ASO、RF、CRP等〕，要求Ab過量，此時(shí)Ag-Ab復(fù)合物的生成量隨Ag的添加而遞增，光散射強(qiáng)度與抗原量成正比。二、測(cè)定方法2024/1/1722雙波長(zhǎng)法消除樣品中對(duì)測(cè)定有干擾的物質(zhì)的影響；1.脂血：吸收光譜300～600nm呈下降趨勢(shì)2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm吸收峰3.膽紅素：300～500nm有吸收峰可見它們的吸收峰都較寬，且同測(cè)定波長(zhǎng)有重疊景象。二、測(cè)定方法2024/1/1723輔助波長(zhǎng)的選擇：根據(jù)測(cè)定波長(zhǎng)選擇輔助波長(zhǎng)，要求干擾物質(zhì)在測(cè)定波長(zhǎng)同輔助波長(zhǎng)有一樣的吸光度。如鉬酸銨法測(cè)P3＋用340nm，而Hb在340及380nm均有較高吸收峰，選380nm作為輔助波長(zhǎng)。二、測(cè)定方法2024/1/1724延續(xù)監(jiān)測(cè)法屬于動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)法，或叫速率法，適用酶活性和代謝產(chǎn)物檢測(cè)，測(cè)定產(chǎn)物生成或底物耗費(fèi)速度，多有酶參與，此法測(cè)酶的活力而不是酶的濃度〔質(zhì)量〕。在零級(jí)反響期單位時(shí)間內(nèi)的吸光度變化(反響速率△A/min)才與酶活力呈正比。二、測(cè)定方法2024/1/1725測(cè)定時(shí)間的選擇：監(jiān)測(cè)時(shí)間應(yīng)根據(jù)所用儀器不影響檢測(cè)速度和結(jié)果的準(zhǔn)確性選在時(shí)間反響進(jìn)程曲線的線性期。通常：延遲時(shí)間：30-60秒監(jiān)測(cè)時(shí)間：>120秒二、測(cè)定方法2024/1/1726酶活力計(jì)算有兩種方法1、絕對(duì)法：酶活力(U/L)=△A×(反響液體積/樣品體積)×(1000/消光系數(shù))2、相對(duì)法：(U/L或mmol/L)=[△A(測(cè)定)/△A(規(guī)范)］×規(guī)范物的活力或濃度二、測(cè)定方法2024/1/17271.延續(xù)監(jiān)測(cè)法即零級(jí)反響速率法,亦稱斜率法在較長(zhǎng)反響時(shí)間區(qū)段內(nèi)(90-180秒)，每隔一定時(shí)間(5~30秒)讀取一次吸光度值，至少讀取4點(diǎn)，得到3個(gè)以上△A，最后算出反響速率△A/min。二、測(cè)定方法2024/1/17282.兩點(diǎn)速率法主要用于其反響過程不成線性，這樣只留意其反響的起始點(diǎn)和終止點(diǎn)，而忽視其中間過程的線性變化。如：測(cè)定苦味酸法測(cè)Cr，反響過程中VitC、丙酮酸、蛋白質(zhì)等均可與苦味酸生成紅色化合物而干擾反響，通常選擇1min內(nèi)的兩點(diǎn)進(jìn)展測(cè)定。二、測(cè)定方法2024/1/1729AlTAS+R1R2A2(吸光度〕〔時(shí)間〕速率法A/min=[(A2-A1)-(空白)]/(t2-t1)二、測(cè)定方法A2TAS+R1A1R2(吸光度〕〔時(shí)間〕兩點(diǎn)速率Ax=A2-A1tt2024/1/1731速率B法1.一個(gè)通道內(nèi)一次進(jìn)展兩項(xiàng)反響相關(guān)的速率法測(cè)定2.用于干擾或／及樣品空白自動(dòng)補(bǔ)償：在第一反響(干擾反響)不斷維持線性的前提下，可以從第二反響(主反響)速率中扣除第一反響速率的延續(xù)影響。如用于消除膽紅素轉(zhuǎn)化為膽綠素吸光度下降、對(duì)肌酐苦味酸法測(cè)定的負(fù)干擾等二、測(cè)定方法2024/1/1732雙項(xiàng)同測(cè)法：指在不同時(shí)間向同一個(gè)比色杯參與幾種試劑，(一個(gè)通道內(nèi)一次進(jìn)展兩項(xiàng)反響相關(guān)的終點(diǎn)法)。比好像測(cè)游離脂肪酸和甘油三酯。二、測(cè)定方法3.空白校正：

a.Ax=某點(diǎn)吸光度-比色杯水空白

b.Ax=(終點(diǎn)測(cè)定吸光度-終點(diǎn)空白吸光度)一(始點(diǎn)測(cè)定吸光度-始點(diǎn)空白吸光度)

c.終點(diǎn)法(帶試劑空白)=終點(diǎn)吸光度-R1點(diǎn)吸光度(試劑空白)

d.終點(diǎn)法(不帶試劑空白)=終點(diǎn)吸光度-比色杯水空白

e.兩點(diǎn)法(本身空白)=(加R2后測(cè)定點(diǎn)讀數(shù)-R1點(diǎn)讀數(shù))-(加R2前測(cè)定點(diǎn)讀數(shù)-R1點(diǎn)讀數(shù))2024/1/1733二、測(cè)定方法2024/1/1734一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測(cè)定方法三、校準(zhǔn)與質(zhì)控四、測(cè)定工程間的順序安排2024/1/1735三、校準(zhǔn)與質(zhì)控校準(zhǔn)：1.包括設(shè)備本身的校準(zhǔn)〔如波長(zhǎng)、溫度、加樣量、空白吸光度等〕2.測(cè)定工程的校準(zhǔn)：是常規(guī)的任務(wù)內(nèi)容工程的校準(zhǔn)：多數(shù)工程的測(cè)定,其濃度同吸光度變化根本上成線性關(guān)系,選擇低、中、高三個(gè)校正點(diǎn)可獲得稱心的準(zhǔn)確度。假設(shè)只設(shè)置一個(gè)校正點(diǎn),盡量選擇一個(gè)中值校正點(diǎn)。校準(zhǔn)2024/1/1737校準(zhǔn)品的問題：測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)包括測(cè)定原理、試劑、儀器、校準(zhǔn)品四要素1.校準(zhǔn)品與方法、試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的，作用是減少系統(tǒng)誤差，用人血清基質(zhì)，最好采用配套運(yùn)用，或進(jìn)展區(qū)域性的一致，有調(diào)查顯示運(yùn)用一樣校準(zhǔn)液后其不同類型儀器測(cè)定結(jié)果更接近靶值2.選擇適宜的校準(zhǔn)品，包括數(shù)目、類型和濃度校準(zhǔn)3.有能夠校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)4.校準(zhǔn)頻度：通常至少6個(gè)月進(jìn)展一次5.當(dāng)改換試劑或不同的批號(hào)時(shí)；質(zhì)控反映出異常的趨勢(shì)或偏移；儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)展一次大的預(yù)防性維護(hù)或者改換了重要部件6.必需有校準(zhǔn)方案：有記錄和分析7.不同廠家消費(fèi)的定值質(zhì)控血清靶值之間有的相差較大，提示不能用定值質(zhì)控血清替代校準(zhǔn)品作校準(zhǔn)用2024/1/1739線性校準(zhǔn)方法K因數(shù)法兩點(diǎn)線性多點(diǎn)線性校準(zhǔn)2024/1/1740K因數(shù)法主要用于酶活性的測(cè)定a)實(shí)際K值b)實(shí)測(cè)K值c)廠家給的K值d)校準(zhǔn)K值校準(zhǔn)2024/1/1741校準(zhǔn)K因數(shù)法(一點(diǎn)法)t2C=K*(A2-A1)/(t2-t1)A2t1A1(S1)2024/1/1742校準(zhǔn)C2CnAxCxAsS1ABSC1As多點(diǎn)線性

〔3～6個(gè)校準(zhǔn)品經(jīng)線性一次回歸制成任務(wù)曲線〕2024/1/1743校準(zhǔn)非線性校準(zhǔn)方法用于免疫比濁等測(cè)定常用Logit-logxpExponrenalSplineLinearGraph2024/1/1744校準(zhǔn)Logit-logxp(對(duì)數(shù)方法〕C1C2CxC3CnBA2A3AnAx2024/1/1745校準(zhǔn)Exp(指數(shù)涵數(shù))C1BC2A2A3C3CxCnAxAn2024/1/1746校準(zhǔn)Spline(樣條涵數(shù)〕C1C2CxCN-1CNBC3A2A3AxAN-1AN質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控：對(duì)儀器的反復(fù)性進(jìn)展監(jiān)控，采用定值或非定值，做標(biāo)本前或中間做，繪圖，對(duì)失控進(jìn)展分析記錄，查找緣由?？芍苯觽魅隠IS系統(tǒng)，還可經(jīng)過網(wǎng)絡(luò)進(jìn)展遠(yuǎn)程質(zhì)控及數(shù)據(jù)圖形的上傳。2024/1/1748室間質(zhì)評(píng)采用PT方案同一質(zhì)評(píng)工程延續(xù)三次中有兩次PT<80%，那么該工程為不稱心現(xiàn)場(chǎng)質(zhì)評(píng)2024/1/1749一、生化分析儀的現(xiàn)狀二、生化分析儀的測(cè)定方法三、校準(zhǔn)與質(zhì)控四、測(cè)定工程間的順序安排四、測(cè)定工程間的順序安排生化分析儀多采用一根針汲取試劑,在汲取不同檢測(cè)工程的試劑之間僅有一個(gè)短暫的水沖洗的過程,假設(shè)此過程無法到達(dá)徹底沖洗的目的,那么能夠會(huì)呵斥前后檢測(cè)工程之間的交叉污染。2024/1/1751四、測(cè)定工程間的順序安排ALT〔IFCC〕，AST〔IFCC〕試劑中含有高活力LDH成分，有能夠會(huì)對(duì)LDH的測(cè)定帶來干擾。ALP〔IFCC〕，CK〔NAC〕，CK-MB〔NAC〕，CO2〔PEPC〕，AMY〔EPS〕等試劑中含Mg2+有，能夠會(huì)對(duì)其后Mg的測(cè)定帶來干擾。2024/1/1752CHE〔BUTYRYLTHIOCHOLINE〕，CHO〔CHODPAP〕，GLU〔GODPAP〕，UA〔URICASE〕，HBDH〔DGKC〕等試劑運(yùn)用磷酸緩沖液，也能夠會(huì)對(duì)P的測(cè)定帶來干擾。CK，CK-MB試劑中含有GLU成分，其分析方法的原理中包含GLU的HK反響過程，因此能夠?qū)LU的測(cè)定帶來干擾。四、測(cè)定工程間的順序安排2024/1/1753四、測(cè)定工程間的順序安排2024/1/1754四、測(cè)定工程間的順序安排2024/1/1755四、測(cè)定工程間的順序安排2024/1