一種檢測魚肉中四環(huán)素類抗生素的高效方法

摘要/Abstract[目的]

建立超高效液相色譜-串聯質譜同時測定魚肉中4種四環(huán)素類抗生素（四環(huán)素、金霉素、土霉素、強力霉素）的方法。[方法]

樣品經Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取，正己烷除油脂，經OasisHLB固相萃取小柱凈化，采用ACQUITYUPLC?BEHC18色譜柱(2.1mm×50mm,1.7μm)分離。[結果]

四環(huán)素、金霉素、土霉素、強力霉素4種四環(huán)素類抗生素在0～100ng/mL范圍內線性關系良好，相關系數(R)均大于0.999；在5.0～50.0μg/kg添加水平下，回收率均在70%～120%；相對偏差(RSD)均小于10%；檢出限為5.0μg/kg，定量限為10.0μg/kg。[結論]

超高效液相色譜-串聯質譜法可用于魚肉中四環(huán)素類抗生素的測定。研究背景/

Introduction四環(huán)素類(tetracyclines,TCs)藥物是由放線菌產生的一類基本骨架為并四苯環(huán)的廣譜抗生素。四環(huán)素類藥物在水產養(yǎng)殖領域具有廣泛的應用，它對病原菌有抑制作用，也能促進水產動物快速生長。由于缺乏科學指導，導致濫用現象十分嚴重，在水產養(yǎng)殖過程中會有20%～30%的四環(huán)素類藥物被魚類吸收，從而誘導體內致病微生物產生抗性基因(antibioticresistancegenes,ARG)，當抗性基因通過食物鏈方式進入人體后會對健康構成威脅。四環(huán)素類抗生素是保障動物和人類健康的重要武器，如果長期食用含四環(huán)素類抗生素殘留的水產品，可能會產生致癌致畸致突變、過敏反應和降低人體免疫能力的危害等。因此，世界各國對水產品中的獸藥殘留限量做了嚴格規(guī)定，我國規(guī)定魚組織（皮和肉）中土霉素、金霉素和四環(huán)素的最大殘留量為200μg/kg。四環(huán)素類抗生素的檢測方法有：微生物法、免疫分析法、分光光度法、高效液相色譜法和液質聯用法等。微生物法只能測定四環(huán)素類抗生素總量，酶聯免疫法只能測定個別四環(huán)素類抗生素，高效液相色譜-串聯質譜法靈敏度高、準確度高，且儀器分析時間短，適用于多種抗生素藥物殘留的同時分析。本研究使用Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取，OasisHLB固相萃取小柱凈化，結合UPLCMS/MS測定魚中4種四環(huán)素類（四環(huán)素、金霉素、土霉素、強力霉素）抗生素的方法，為魚肉中四環(huán)素類抗生素的測定提供一種準確、可靠的方法。研究結果/

Result1.線性方程和檢出限本試驗采用添加空白基質溶液對4種混標溶液進行定量測定，4種四環(huán)素類（四環(huán)素、金霉素、土霉素、強力霉素）抗生素在0～100ng/mL范圍內線性關系良好，相關系數均大于0.999.圖1

四環(huán)素類抗生素混合標準溶液的MRM色譜表1四環(huán)素類抗生素線性方程和相關系數2.

方法回收率和精密度選取陰性的魚肉樣品，分別加入3個水平（5.0、10.0、50.0μg/kg）的四環(huán)素類抗生素標準溶液，進行加標回收試驗，結果見表4。由表4可知：多西環(huán)素、土霉素、四環(huán)素、金霉素的回收率范圍分別為85.6%～97.7%、89.3%～93.0%、84.2%～97.1%、87.6%～94.2%，精密度RSD范圍分別為0.9%～1.3%、0.2%～1.7%、0.4%～7.5%、1.0%～1.2%。研究表明，4種四環(huán)素類抗生素回收率均在70%～120%，相對標準偏差RSD≤10%，滿足GB/T27404-2008《實驗室質量控制規(guī)范食品理化檢測》對回收率60%～120%、精密度＜15%的要求，說明該方法具有較好的準確性和穩(wěn)定性，可以用于魚肉中四環(huán)素類抗生素的測定。表4四環(huán)素類抗生素的回收率和精密度3.方法檢出限方法的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)為產生3倍和10倍信噪比(S/N)時磺胺類化合物的質量濃度。四環(huán)素類抗生素檢出限為5.0μg/kg，定量限為10.0μg/kg，而國標GB31656.11—2021《食品安全國家標準水產品中土霉素、四環(huán)素、金霉素和多西環(huán)素殘留量的測定》中多西環(huán)素、土霉素、四環(huán)素、金霉素的檢測限分別為20.0、10.0、10.0、20.0μg/kg，定量限分別為40.0、20.0、20.0、40.0μg/kg，表明該方法的4種四環(huán)素類抗生素的檢出限和定量限均低于國標給定值，可以測定出更低濃度的含四環(huán)素類抗生素樣品。4.

樣品測定2022年采用該方法對45批次魚肉樣品進行測定，檢出四環(huán)素3批次和金霉素4批次，含量范圍分別為10.20～30.34、15.60～41.87μg/kg，GB31650—2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》規(guī)定四環(huán)素和金霉素限量值為100μg/kg，所有樣品均在限量值范圍內，說明這45批次魚肉樣品不會對消費者身體健康帶來危害。結論/

Conclusion魚肉中四環(huán)素類藥物的檢測對人類的健康非常重要，本研究建立了魚肉中4種四環(huán)素類抗生素（四環(huán)素、金霉素、土霉素、強力霉素）的超高效液相色譜-串聯質譜測定方法。以Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液提取、OasisHLB固相萃取小柱凈化，通過加標回收率試驗表明：回收率均在70%～120%、相對標準偏差RSD≤10%，4種四環(huán)