高中生物高考復(fù)習(xí)：選修一生物技術(shù)實(shí)踐（教師用書）

選修1,

生物技術(shù)實(shí)踐

SHENGWUJISHUSHIJIAN

第1講傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用

1.舉例說明日常生活中的某些食品是運(yùn)用傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)的

課

標(biāo)2.闡明發(fā)酵工程利用現(xiàn)代工程技術(shù)及微生物的特定功能，工業(yè)化生

要

求產(chǎn)人類所需產(chǎn)品

3.舉例說明發(fā)酵工程在醫(yī)藥、食品及其他工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上有重要的應(yīng)

用價(jià)值

1.發(fā)酵菌種的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系（生命觀念）

核2.比較制作果酒、果醋、腐乳、泡菜的制作原理、流程、發(fā)酵條件等

心

素的異同（科學(xué)思維）

養(yǎng)

3.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究理想的發(fā)酵條件（科學(xué)探究）

4.關(guān)注食品安全，倡導(dǎo)健康的生活方式（社會責(zé)任）

考點(diǎn)一果酒和果醋的制作

［知識-能力?素養(yǎng)】

留EJ型里?

i.制作原理與發(fā)酵條件

比較

果酒制作果醋制作

項(xiàng)［|

菌種酵母菌醋酸菌

菌種

附著在葡萄皮上的野生型酵母菌變酸酒表面的菌膜

來源

發(fā)酵有氧條件下，酵母菌通過有氧呼氧氣、糖源充足時(shí):C6Hl2。6+

過程吸大里繁殖:C6Hl2。6+6。2----202—-^2CH3coOH+2cO2+

6co2+6H2O；無氧條件下，酵母2H2O；缺少糖源、氧氣充足時(shí)：

菌通過無氧呼吸產(chǎn)生酒精:

C2H5OH+O2一一CH3coOH+

C6Hl2。6---2C2H5OH+2c。2H2O

一般酒精發(fā)酵為18?25℃,最適

溫度最適為30?35℃

繁殖為22c左右

氣體前期：需氧，后期：不需氧需要充足的氧氣

時(shí)間10?12d7?8d

2.實(shí)驗(yàn)流程

'①榨汁機(jī)要清洗干凈，并晾干

(1)實(shí)驗(yàn)用具消毒(②發(fā)酵瓶要用溫水沖洗，再用體積

、分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒

[①先沖洗,后除去枝梗

(2)挑選、沖洗葡萄《②不能反復(fù)沖洗，防止洗去野生

I酵母菌

(3)榨汁一用榨汁機(jī)榨取葡萄汁，裝入發(fā)酵瓶中

,、./①放在18?25℃的溫度下發(fā)酵

(4)果酒發(fā)叫②發(fā)酵過程要注意適時(shí)排氣

[①10?12d取樣檢測酒精含量：在酸性條

(5)取樣檢測|件下，重銘酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)在綠色

[②酵母菌數(shù)量鏡檢

[①加入醋酸菌后溫度控制在30?35℃

(6)果醋發(fā)酵彳…、羊2洋、工一,工―人尸、

[②適時(shí)通入氧氣(無限空氣)

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

(1)若酵母菌數(shù)量少，產(chǎn)生的酒精少。原因可能是發(fā)酵近期，酵母菌有氧呼吸

不足。

(2)若酵母菌數(shù)量充足，但是產(chǎn)生的酒精較少或不能產(chǎn)生酒精。原因可能是發(fā)

酵后期密封不嚴(yán)。

a豌-提?升1

〃科學(xué)思維一門納號概括加

i.果酒、果醋及泡菜的菌種、呼吸類型、原理與發(fā)酵溫度如何？請加以比較。

食品菌種呼吸類型原理溫度

果酒酵母菌兼性厭氧無氧呼吸產(chǎn)生酒精18?25C

果醋醋酸菌需氧糖(酒精)f醋酸30?35℃

泡菜乳酸菌無氧無氧呼吸產(chǎn)生乳酸——

科學(xué)探究——觀痛與提問，加

2.甲、乙、丙三個(gè)制作果酒的發(fā)酵瓶中，在溫度等適宜的條件下進(jìn)行發(fā)酵,

如圖所示。發(fā)酵過程中，每隔一段時(shí)間均需排氣一次。據(jù)圖分析:

注：各發(fā)酵瓶的左側(cè)管為充氣管，右側(cè)管為排氣管。

(1)指出圖中發(fā)酵瓶甲、丙的錯誤分別是什么？分別會導(dǎo)致發(fā)酵中出現(xiàn)的主要

異常現(xiàn)象是什么？

(2)在上述制作葡萄酒的過程中，假設(shè)乙同學(xué)的某一步驟操作錯誤導(dǎo)致發(fā)酵瓶

塞被沖開，該操作錯誤是什么？

提示：(1)甲同學(xué)未夾住發(fā)酵瓶的充氣管，酵母菌呼吸產(chǎn)生的乙醇被氧化成醋

酸，發(fā)酵液變酸；丙同學(xué)錯在瓶中發(fā)酵液過多，淹沒了排氣管在瓶內(nèi)的管口，這

樣發(fā)酵液會從排氣管流出。

(2)未及時(shí)排氣。

［考法?考技，考能】

考法果酒、果醋制作原理、流程等

1.下圖是利用山楂制作果酒、果醋的流程:

lilialJ加I'1砂糖酒精過濾f稀釋果酒

I處理廠》I和醛母菌分離「1加醋酸菌

發(fā)醉

果醋廣|發(fā)醉「

回答下列問題:

⑴酒精發(fā)酵主要利用的是酵母菌的呼吸，其細(xì)胞內(nèi)將葡萄糖分解為

酒精的酶存在于o酵母菌與醋酸菌在結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是o

(2)酒精發(fā)酵前加入白砂糖主要是為酵母菌提供。如圖表示白砂糖的

添加量對酒精生成量的影響，白砂糖的添加量為________左右最為合理。

白砂糖添加量/%

⑶醋酸發(fā)酵前，需要加入純凈水對山楂果酒進(jìn)行稀釋，原因是

(4)將發(fā)酵好的山楂果醋在80C左右的溫度下熱處理8-10min,目的是

，以及防止雜菌污染。

(5)為研究發(fā)酵罐中釀酒酵母菌的生長情況，常要取樣統(tǒng)計(jì)分析，并測定pH

值。若某研究人員將樣品的次序弄亂了，那么判斷取樣順序的主要依據(jù)是

(填“酵母菌的數(shù)量”或“發(fā)酵液的pH"),理由是o

［解析］(1)酒精發(fā)酵主要利用的是酵母菌的無氧呼吸，其將葡萄糖分解為酒

精的酶存在于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)。酵母菌屬于真核生物，醋酸菌屬于原核生物，兩者在

結(jié)構(gòu)上的主要區(qū)別是酵母菌有以核膜為界限的細(xì)胞核。

(2)酒精發(fā)酵前加入的白砂糖主要是為酵母菌提供碳源，有利于提高酒精的生

成量。據(jù)曲線圖可知，當(dāng)白砂糖的含量為15%時(shí)，酵母菌通過酒精發(fā)酵產(chǎn)生的酒

精的量最多，故白砂糖的添加量為15%左右最為合理。

(3)由于醋酸發(fā)酵前，酵母菌通過酒精發(fā)酵產(chǎn)生大量的酒精，酒精濃度過高會

抑制醋酸菌的發(fā)酵，因此醋酸發(fā)酵前，需要加入純凈水對山楂果酒進(jìn)行稀釋。

(4)醋酸發(fā)酵完成，即生成山楂果醋后，山楂果醋內(nèi)存在活的醋酸菌，為了防

止醋酸菌繼續(xù)發(fā)酵，將發(fā)酵好的山楂果醋在80℃左右的溫度下熱處理8?10min,

這樣做還可以防止雜菌污染。

(5)為研究發(fā)酵罐中釀酒酵母菌的生長情況，常要取樣統(tǒng)計(jì)分析并測定pH值。

若某研究人員將樣品的次序弄亂了，那么判斷取樣順序的主要依據(jù)是發(fā)酵液的

pH,原因是酵母菌發(fā)酵過程中產(chǎn)生CO2,可形成碳酸，此外還會產(chǎn)生一些其他酸

性代謝產(chǎn)物，可造成發(fā)酵液pH降低，故可以依據(jù)不同樣本的pH確定取樣的先后

順序。

［答案］(1)無氧細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)有無以核膜為界限的細(xì)胞核(或酵母菌具有

核膜)(2)碳源15%(3)酒精濃度過高會抑制醋酸菌的發(fā)酵(4)防止醋酸菌繼

續(xù)發(fā)酵(或殺死醋酸菌)(5)發(fā)酵液的pH酵母菌發(fā)酵過程中產(chǎn)生CO2,可形成碳

酸，此外還會產(chǎn)生一些其他酸性代謝產(chǎn)物，可造成發(fā)酵液pH降低，故可以依據(jù)

不同樣本的pH確定取樣的先后順序

2.梭相是自貢地區(qū)主產(chǎn)水果之一，某生物興趣小組嘗試用柳柑作原料制作果

酒、果醋，探索農(nóng)產(chǎn)品轉(zhuǎn)化的可行性。請分析并回答下列問題：

(1)在實(shí)驗(yàn)選用的兩種微生物中，醋酸菌與酵母菌在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上最大的區(qū)別是

，整個(gè)發(fā)酵過程需要有氧氣參與的微生物是o

(2)果酒發(fā)酵過程是否產(chǎn)生了酒精，可通過溶液來檢測，若發(fā)酵

液出現(xiàn)________色，說明發(fā)酵基本成功。

(3)純化酵母菌菌種常用的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，而統(tǒng)計(jì)發(fā)酵

液中活菌的數(shù)目時(shí)不能用平板劃線法，原因是

____________________________________________________________(答出兩點(diǎn)即可)。

［解析］(1)醋酸菌屬于原核生物，酵母菌屬于真核生物，原核生物和真核生

物在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上最大的區(qū)別是醋酸菌沒有以核膜為界限的細(xì)胞核；果酒發(fā)酵過程

應(yīng)該是先通氣后密封，參與果醋制作的醋酸菌是好氧菌，因此醋酸發(fā)酵的整個(gè)過

程都需要有氧氣參與。

(2)酒精可用酸性重椿酸鉀溶液來檢測，顏色由橙色變成灰綠色。

(3)統(tǒng)計(jì)發(fā)酵液中活菌的數(shù)目時(shí)不能用平板劃線法，原因是平板劃線法不能確

定取樣的多少、最初畫線處生長出來的菌落聚集在一起無法計(jì)數(shù)、灼燒接種環(huán)時(shí)

死亡的菌體數(shù)無法估算等。

［答案］(1)醋酸菌沒有以核膜為界限的細(xì)胞核醋酸菌(2)酸性重銘酸鉀

灰綠(3)平板劃線法不能確定取樣的多少、最初畫線處生長出來的菌落聚集在一

起無法計(jì)數(shù)、灼燒接種環(huán)時(shí)死亡的菌體數(shù)無法估算(答出2點(diǎn)即可)

考法2,發(fā)酵條件的控制

3.楊梅是特色水果之一，某工廠對其進(jìn)行了楊梅酒和楊梅醋的研制。請根據(jù)

所學(xué)知識回答下列問題：

(1)在制備楊梅酒過程中，一般需要將發(fā)酵溫度控制在________。發(fā)酵罐頂上

彎管中常需要加水，其主要目的是o發(fā)

酵一定時(shí)間后，觀察到，說明發(fā)酵基本完畢。

(2)在制備楊梅醋的過程中，發(fā)酵罐內(nèi)需要先填充經(jīng)________處理的木材刨

花，然后加入含________菌的培養(yǎng)液，加木材刨花的目的是;

再讓發(fā)酵完畢的楊梅酒流入發(fā)酵罐進(jìn)行楊梅醋發(fā)酵，楊梅醋的pH可通過________

來調(diào)節(jié)。

(3)若發(fā)酵好的楊梅酒全部制成楊梅醋，則發(fā)酵制醋過程中C02的產(chǎn)生量

()

A.是釀酒過程的兩倍B.與釀酒過程的相等

C.是釀酒過程的一半D.幾乎為零

［解析］(1)酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18?25℃o發(fā)酵罐頂上彎管中常需

要加水的目的是防止空氣進(jìn)入(或創(chuàng)造無氧環(huán)境)。發(fā)酵時(shí)會產(chǎn)生二氧化碳和酒精，

當(dāng)發(fā)酵罐內(nèi)液面不再有氣泡冒出時(shí)，說明發(fā)酵基本完畢。

(2)為防止雜菌感染，在制備楊梅醋中用到的刨花事先要進(jìn)行滅菌處理。加木

材刨花的目的是使該菌附著在刨花上，充分接觸反應(yīng)物。楊梅醋的pH可通過控

制楊梅酒的流速進(jìn)行調(diào)節(jié)。

(3)由果醋制作的原理可知，酒精被利用后，產(chǎn)物中無二氧化碳。

［答案］(1)18?25c防止空氣進(jìn)入(或創(chuàng)造無氧環(huán)境)發(fā)酵罐內(nèi)液面不再

有氣泡冒出(2)滅菌醋酸使該菌附著在刨花上(或使該菌充分接觸反應(yīng)物)

控制楊梅酒的流速(3)D

考點(diǎn)二腐乳和泡菜的制作

［知識?能力?素養(yǎng)］

一研,讀1

1.腐乳的制作

(1)發(fā)酵菌種

①主要菌種

a.名稱：毛霉。

b.菌體特點(diǎn)：白色絲狀真菌。

c.代謝類型：異養(yǎng)需氧型。

②其他菌種：根霉、酵母菌、曲霉等。

(2)制作原理。

現(xiàn)等微生物

合成、分泌

iI

蛋白質(zhì)啦￡型M+脂肪蛔-油+脂肪酸

小分子的肽------

(3)腐乳制作流程。

‘讓豆.上)一選擇含水量為獨(dú)現(xiàn)的豆腐，接種或利用空

(長出J一氣中的毛霉胞子，將溫度控制在工工

為宜

(加鹽腌制)~?逐層加鹽，隨層數(shù)的加高而典鹽量

(加鹵湯裝瓶1加人12%左右的酒和香辛料

2.泡菜的制作

(1)制作原理。

①發(fā)酵實(shí)質(zhì)：在無氧條件下,乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸。

酉每

②反應(yīng)式：C6Hl2。6工-2c3H6。3(乳酸)+能量。

(2)制作流程。

測定亞硝酸鹽含量

選擇

原料

稱取

食鹽

（3）關(guān)鍵操作。

①泡菜壇的選擇：火候好、無裂紋、無砂眼、壇沿深、蓋子吻合好的泡菜壇。

②腌制的條件：控制腌制的時(shí)間、溫度和食鹽的用量。防止雜菌感染,嚴(yán)格

密封。

（4）檢測亞硝酸鹽含量。

①原理。

a.亞硝酸鹽+對氨基苯磺酸f反應(yīng)產(chǎn)物:

反應(yīng)產(chǎn)物+N-1-蔡基乙二胺鹽酸鹽一玫瑰紅色染料。

b.亞硝酸鹽溶液的濃度越高，顏色越深;濃度越低，顏色越淺。

②流程。

配制溶液|制備標(biāo)準(zhǔn)顯甌If制備樣品處理液施

③判斷方法：觀察樣品顏色變化，并與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液比較,然后估

算亞硝酸鹽含量。

④結(jié)果分析。

如圖表示泡菜制作過程中乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽含量變化曲線，據(jù)圖分析

回答：

a.圖中乳酸菌含量的變化規(guī)律如曲線』_（填序號）所示。

b.圖中乳酸含量的變化規(guī)律如曲線上（填序號）所示。

c.圖中亞硝酸鹽含量的變化規(guī)律如曲線￡（填序號）所示。

d.由圖可知，泡菜的最佳取食時(shí)間為發(fā)酵卮期。

一突破

1.影響腐乳品質(zhì)的“五大”因素

(1)豆腐含水量的控制：豆腐含水量以70%為宜。

①若含水量過高，豆腐塊不易成形。

②若含水量過低，則不利于毛霉的生長。

(2)鹽的用量：制作時(shí)，應(yīng)逐層加鹽，近瓶口處鹽鋪厚一些，以防止雜菌從瓶

口進(jìn)入。

①鹽的濃度過高，會影響口味。

②鹽的濃度過低，不足以抑制微生物生長，腐乳易腐敗變質(zhì)。

(3)酒的用量：鹵湯中酒的含量控制在12%左右為宜。酒精含量的高低與腐乳

后期發(fā)酵時(shí)間的長短有很大關(guān)系。

①酒精含量越高，對蛋白酶的抑制作用也越大，會使腐乳成熟時(shí)間延長。

②酒精含量過低，蛋白酶的活性高，蛋白質(zhì)的水解加快，但雜菌繁殖快，豆

腐易腐敗變質(zhì)。

(4)發(fā)酵的溫度：前期發(fā)酵溫度應(yīng)保持在15?18℃,利于毛霉生長。

(5)香辛料：具有防腐、殺菌的作用，也會影響腐乳的風(fēng)味和質(zhì)量。

2.腐乳制作中抑制雜菌的措施

(1)前期發(fā)酵條件的控制：提供利于毛霉生長的溫度、水分，形成毛霉的生長

優(yōu)勢，抑制雜菌的生長。

(2)后期發(fā)酵條件的控制

①加鹽腌制：利用食鹽抑制雜菌生長。

②加鹵湯裝瓶：利用鹵湯中的酒和香辛料抑制雜菌的生長。

③密封腌制：控制無氧環(huán)境，抑制好氧菌的生長。

3.泡菜制作成功的關(guān)鍵點(diǎn)

(1)材料的選擇及用量

①蔬菜應(yīng)新鮮，若放置時(shí)間過長，蔬菜中的硝酸鹽易被還原成亞硝酸鹽。

②清水和鹽的質(zhì)量比為4：1,鹽水要煮沸后冷卻待用。鹽水煮沸有兩大作用，

一是除去水中的氧氣，二是殺滅鹽水中的其他細(xì)菌。

(2)防止雜菌污染：每次取樣用具要洗凈，取樣后要迅速封口。

(3)氧氣需求

①泡菜壇要選擇透氣性差的容器，以創(chuàng)造無氧環(huán)境，有利于乳酸菌發(fā)酵，防

止蔬菜腐爛。

②壇蓋邊沿的水槽中要注滿水，以保證乳酸菌發(fā)酵所需要的無氧環(huán)境，并注

意在發(fā)酵過程中要經(jīng)常補(bǔ)充壇蓋邊沿水槽中的水。

?國■提?升1

以科學(xué)思維—分析與綜介/〃

1.市售的腐乳有時(shí)口感不好，腐乳較硬，試分析其原因。（至少答出四點(diǎn)）

提示：豆腐塊的含水量少，會使腐乳較硬；發(fā)酵時(shí)間短，蛋白質(zhì)未完全水解;

菌種不純、菌種變異、菌種老化都會影響腐乳的口感；各種調(diào)味品的配比不當(dāng)?shù)?/p>

也會影響腐乳的口感。

儂科學(xué)思維—模型與建?！?/p>

2.請嘗試?yán)L制出泡菜制作過程中乳酸菌、亞硝酸鹽及乳酸隨發(fā)酵時(shí)間的變化

曲線。

提示：如圖

3.要探究泡菜制作的最佳溫度，應(yīng)考慮的無關(guān)變量有哪些？（答出三點(diǎn)即可）

提示：腌制時(shí)間、食鹽的用量、蔬菜的種類和用量等。

［考法?考技?考能】

考法1，腐乳的制作原理及過程分析等

1.丫一氨基丁酸（GABA）是具有降血壓、抗焦慮等功能的水溶性氨基酸?？蒲?/p>

人員通過實(shí)驗(yàn)研究了白方腐乳在前發(fā)酵、鹽腌和后發(fā)酵過程中GABA的含量變

化，為尋找生產(chǎn)富含GABA腐乳的工藝奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)步驟如下：

①豆腐白坯表面接種毛霉抱子后，在適宜的溫度和濕度下培養(yǎng)48h,獲得毛

坯。

②將毛坯分層整齊地?cái)[放在瓶中，鹽腌5d。

③腌制后加入鹵湯，置于28C恒溫箱中后發(fā)酵90do

④分別采集各時(shí)段的腐乳坯樣品，測定GABA含量，結(jié)果如下。

(

解

卜

0he

0

M

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V

8

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氣

V

8

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O

3045607590后發(fā)醉時(shí)間/d

請分析并回答下列問題：

(1)影響腐乳風(fēng)味和質(zhì)量的主要因素有o

(2)步驟②中，加鹽腌制的正確方法是o此

過程腐乳干重中的GABA含量下降，一方面，與食鹽抑制毛霉生長，酶活性降低

有關(guān)；另一方面，部分GABA會_________________________而導(dǎo)致測定值減小。

(3)后發(fā)酵過程中，GABA含量再次增加的主要原因是,

后發(fā)酵d后的白方腐乳比較適宜出廠銷售。

［解析］(1)影響腐乳風(fēng)味和質(zhì)量的主要因素有鹽的用量、發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵溫

度等。

(2)步驟②為加鹽腌制，其正確方法是逐層加鹽，隨層數(shù)的加高增加鹽量，接

近瓶口處的鹽要鋪厚一些。已知丫一氨基丁酸(GABA)是具有降血壓、抗焦慮等功

能的水溶性氨基酸。加鹽腌制過程，胚體會適當(dāng)脫水，腐乳干重中的GABA含量

下降，一方面，與食鹽抑制毛霉生長，酶活性降低有關(guān)；另一方面，部分GABA

會溶解于水中(或不存在于腐乳中)而導(dǎo)■致測定值減小。

(3)后發(fā)酵過程中，GABA含量再次增加的主要原因是毛霉產(chǎn)生的蛋白酶可以

繼續(xù)發(fā)揮作用。后發(fā)酵過程中，GABA的含量變化曲線圖顯示，在60d后，GABA

的含量達(dá)到最大值且保持相對穩(wěn)定，所以此時(shí)的白方腐乳比較適宜出廠銷售。

［答案］(1)鹽的用量、發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵溫度等(2)逐層加鹽，隨層數(shù)的加高

增加鹽量，接近瓶口處的鹽要鋪厚一些溶解于水中(或不存在于腐乳中)(3)毛

霉產(chǎn)生的蛋白酶可以繼續(xù)發(fā)揮作用60

考法2,泡菜的制作原理及過程分析等

2.利用卷心菜、黃瓜發(fā)酵制作泡菜過程中，乳酸菌、酵母菌細(xì)胞數(shù)量和pH

的變化如圖所示。回答下列問題：

906.0

(1乳酸菌

8.0|

5.5

5.0

bo

IO

=4.5=

源

S4.0

導(dǎo)

在3.5

3.0

3610141822263246

發(fā)酵時(shí)間/d

(1)自然界中，常見的乳酸菌有0在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上，乳酸菌不同

于酵母菌的顯著區(qū)別是,在代謝過程中，酵母菌區(qū)別于乳酸菌

的代謝類型是o

(2)發(fā)酵初期，pH迅速下降的主要原因是0發(fā)酵中

期，酵母菌通過_____________(填“有氧呼吸”或“無氧呼吸”)進(jìn)行增殖。在發(fā)

酵過程中，酵母菌與乳酸菌間存在競爭關(guān)系，其強(qiáng)度的變化是o

(3)卷心菜發(fā)酵制作泡菜過程中，需要注意控制,否則容易造成

細(xì)菌大量繁殖，使的含量增加，影響泡菜的品質(zhì)。

［解析］(1)自然界中，常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸菌為由

原核細(xì)胞構(gòu)成的原核生物，酵母菌為由真核細(xì)胞構(gòu)成的真核生物，所以在細(xì)胞結(jié)

構(gòu)上，乳酸菌不同于酵母菌的顯著區(qū)別是無核膜包被的細(xì)胞核。乳酸菌只能進(jìn)行

無氧呼吸，酵母菌既能進(jìn)行有氧呼吸也能進(jìn)行無氧呼吸，因此在代謝過程中，酵

母菌區(qū)別于乳酸菌的代謝類型是兼性厭氧型。

(2)發(fā)酵初期，乳酸菌的數(shù)量遠(yuǎn)多于酵母菌，而且乳酸菌的增長速度也比酵母

菌的快，說明發(fā)酵過程是在無氧條件下進(jìn)行的，因此pH迅速下降的主要原因是

乳酸菌快速增殖，代謝產(chǎn)生了大量乳酸。因發(fā)酵過程是在無氧條件下進(jìn)行的，所

以發(fā)酵中期，酵母菌通過無氧呼吸進(jìn)行增殖。根據(jù)在發(fā)酵過程中乳酸菌與酵母菌

種群數(shù)量的變化可推知，酵母菌與乳酸菌間的競爭強(qiáng)度的變化是由小變大，再變

小。

(3)在泡菜的腌制過程中，要注意控制腌制的時(shí)間、溫度和食鹽的用量，溫度

過高、食鹽用量過低、腌制時(shí)間過短，容易造成細(xì)菌大量繁殖，使亞硝酸鹽含量

增加。

［答案］(1)乳酸鏈球菌和乳酸桿菌無核膜包被的細(xì)胞核兼性厭氧型(2)

乳酸菌快速增殖，代謝產(chǎn)生了大量乳酸無氧呼吸由小變大，再變小(3)腌制

時(shí)間、溫度、食鹽的用量亞硝酸鹽

真題體驗(yàn)I感悟高考淬煉考能

1.(20201月浙江選考節(jié)選)回答與泡菜制作有關(guān)的問題：

(1)用蘿卜等根菜類蔬菜制作泡菜，用熱水短時(shí)處理，可抑制某些微生物產(chǎn)生

，從而使成品泡菜口感較脆。同時(shí)，該處理也會使泡菜發(fā)酵時(shí)間縮短，

其原因是o

(2)泡菜發(fā)酵初期，由于泡菜罐加蓋并水封，會使________菌被逐漸抑制。發(fā)

酵中期，乳酸菌大量繁殖，會使菌受到抑制。發(fā)酵后期，乳酸生產(chǎn)過多，

會使乳酸菌受到抑制。

(3)從泡菜汁中可分離制作酸奶的乳酸菌，首先對經(jīng)多次發(fā)酵的泡菜汁進(jìn)行過

濾，然后取濾液進(jìn)行，再用的方法在某種含牛乳的專用的培養(yǎng)

基中進(jìn)行初步篩選。該培養(yǎng)基必須含有，以便于觀察是否產(chǎn)酸。

(4)自然界中醋桿菌常與乳酸菌共同生長。若要篩選出醋桿菌，則其專用的培

養(yǎng)基中應(yīng)添加。

［解析］(1)果膠具有將植物細(xì)胞粘合在一起的作用，去掉果膠后，植物組織

會變得松散，植物組織松散后就會使泡菜口感變得不脆，抑制果膠酶的作用就可

避免植物組織變得松散。高溫使植物細(xì)胞破裂，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)外流，有

利于乳酸菌更快地獲得營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行乳酸發(fā)酵。(2)加蓋并加水密封后泡菜罐內(nèi)為

無氧環(huán)境，因此可抑制好氧菌的繁殖。在發(fā)酵中期，乳酸菌大量繁殖，通過乳酸

發(fā)酵產(chǎn)生了較多乳酸，此時(shí)泡菜罐內(nèi)pH較低，不耐酸的菌會受到抑制。(3)經(jīng)多

次發(fā)酵的泡菜汁中含有的乳酸菌數(shù)量較多，在涂布分離前需先對菌液進(jìn)行稀釋。

鑒定培養(yǎng)基中接種的乳酸菌是否產(chǎn)酸，較為簡便的方法為加入酸堿指示劑，通過

觀察其變色情況，即可判斷是否產(chǎn)酸。(4)醋桿菌能在有氧條件下將乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)榇?/p>

酸，因此需要在培養(yǎng)基中添加乙醇以篩選出醋桿菌。

［答案］(1)果膠酶細(xì)胞破裂，細(xì)胞內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)外流使乳酸菌快速地獲得營

養(yǎng)物質(zhì)（2）好氧不耐酸的（3）稀釋涂布分離酸堿指示劑（4）乙醇

2.（2017.全國卷H）豆豉是大豆經(jīng)過發(fā)酵制成的一種食品。為了研究影響豆豉

發(fā)酵效果的因素，某小組將等量的甲、乙兩菌種分別接入等量的A、B兩桶煮熟

大豆中并混勻，再將兩者置于適宜條件下進(jìn)行發(fā)酵，并在32h內(nèi)定期取樣觀測發(fā)

酵效果?；卮鹣铝袉栴}：

（1）該實(shí)驗(yàn)的自變量是、o

（2）如果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵容器內(nèi)上層大豆的發(fā)酵效果比底層的好，說明該發(fā)酵菌是

（3）如果在實(shí)驗(yàn)后，發(fā)現(xiàn)32h內(nèi)的發(fā)酵效果越來越好，且隨發(fā)酵時(shí)間呈直線上

升關(guān)系，則無法確定發(fā)酵的最佳時(shí)間；若要確定最佳發(fā)酵時(shí)間，還需要做的事情

是_______________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________O

（4）從大豆到豆豉，大豆中的成分會發(fā)生一定的變化，其中，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)?/p>

，脂肪轉(zhuǎn)變?yōu)閛

［解析］（1）由“甲、乙兩菌種”和“32h內(nèi)定期取樣觀測”可知，該實(shí)驗(yàn)的

自變量是菌種和發(fā)酵時(shí)間。（2）由“發(fā)酵容器內(nèi)上層大豆的發(fā)酵效果比底層的好”

可知，該發(fā)酵菌是好氧菌。（3）因“32h內(nèi)的發(fā)酵效果越來越好，且隨發(fā)酵時(shí)間呈

直線上升關(guān)系”，說明發(fā)酵的最佳時(shí)間可能超過32h,故可繼續(xù)延長發(fā)酵時(shí)間，

定期取樣觀測發(fā)酵效果，以確定最好的發(fā)酵效果所對應(yīng)的時(shí)間，此時(shí)間即為最佳

發(fā)酵時(shí)間。（4）發(fā)酵菌種能產(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶，蛋白酶能催化蛋白質(zhì)分解為小分

子的肽和氨基酸，脂肪酶能催化脂肪分解為甘油和脂肪酸。

［答案］⑴菌種發(fā)酵時(shí)間（2）好氧菌（3）延長發(fā)酵時(shí)間，觀測發(fā)酵效果，

最好的發(fā)酵效果所對應(yīng)的時(shí)間即為最佳發(fā)酵時(shí)間（4）氨基酸和肽脂肪酸和甘

油

3.（2016?全國卷II）蘋果醋是以蘋果汁為原料經(jīng)發(fā)酵而成的?；卮鹣铝袉栴}：

|HQ+COzI

③I

I葡萄糖|或1丙］酸用丁醇+COJ

（1）酵母菌的呼吸代謝途徑如上圖所示。圖中過程①和②是蘋果醋生產(chǎn)的第一

階段，在酵母菌細(xì)胞的中進(jìn)行，其產(chǎn)物乙醇與試劑反應(yīng)呈

現(xiàn)灰綠色，這一反應(yīng)可用于乙醇的檢驗(yàn)；過程③在酵母菌細(xì)胞的中進(jìn)行。

與無氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌的增殖速度。

（2）第二階段是在醋酸桿菌的作用下將第一階段產(chǎn)生的乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬倪^

程，根據(jù)醋酸桿菌的呼吸作用類型，該過程需要在________條件下才能完成。

（3）在生產(chǎn)過程中，第一階段和第二階段的發(fā)酵溫度不同，第一階段的溫度

（填“低于”或“高于”）第二階段的。

（4）醋酸桿菌屬于核生物，其細(xì)胞結(jié)構(gòu)中（填“含有”或

“不含有”）線粒體。

［解析］（1）圖中過程①和②是酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生乙醇的過程，無氧呼吸的

場所是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)。乙醇可用酸性重格酸鉀試劑檢測，顏色由橙色變?yōu)榛揖G色。

過程③為有氧呼吸的第二和第三階段，場所為線粒體。在有氧條件下酵母菌進(jìn)行

有氧呼吸，產(chǎn)生更多的能量供酵母菌繁殖利用，故有氧條件下酵母菌的繁殖速度

更快。（2）醋酸桿菌是好氧型細(xì)菌，因此，在醋酸桿菌作用下，將乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿?/p>

的過程需要在有氧條件下才能完成。（3）在生產(chǎn)過程中，第一階段酵母菌產(chǎn)生乙醇

的適宜溫度為18—25℃,第二階段醋酸桿菌產(chǎn)生醋酸的適宜溫度為30?35°C,

第一階段的溫度低于第二階段的。（4）醋酸桿菌屬于原核生物，原核生物的細(xì)胞中

只有核糖體一種細(xì)胞器，不含有線粒體。

「答案］⑴細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)酸性重格酸鉀線粒體快（2）有氧⑶低于（4）

原不含有

第2講微生物的培養(yǎng)和應(yīng)用

1.闡明在發(fā)酵工程中滅菌是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的前提

2.闡明無菌技術(shù)是在操作過程中，保持無菌物品與無菌區(qū)域不被微生

課

標(biāo)物污染的技術(shù)

要

求

3.舉例說明通過調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物

4.概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和

純化的常用方法

5.概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測定微生物數(shù)量的常用方法

1.分析培養(yǎng)基的成分及其作用；平板劃線法和稀釋涂布平板法的異

同；選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別（科學(xué)思維）

,2.設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究微生物培養(yǎng)的條件及如何分離某種微生物等（科學(xué)

探究）

3.關(guān)注有害微生物的控制及宣傳健康生活方式等（社會責(zé)任）

■考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

［知識'能力'素養(yǎng)】

/E）■研慎1

1.培養(yǎng)基

（1）概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長繁殖的營

養(yǎng)基質(zhì)。

（2）種類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基,二者的區(qū)別是是否添加凝顏1。

（3）營養(yǎng)成分：

①主要營養(yǎng)物質(zhì)：碳遮、氮遮、水和無機(jī)鹽。

②其他條件：pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣。

2.無菌技術(shù)

（1）關(guān)鍵：防止外來雜菌的入侵。

（2）不同對象的無菌操作方法（連線）。

攤頻

①灼燒滅菌I接種針(環(huán))

②干熱滅菌包消毒

③巴氏消毒n培養(yǎng)皿

④紫夕垓h滅菌

⑤化學(xué)藥物m操作者雙手

⑥高壓蒸汽

滅菌IV水源地

［答案］②一b—II③④一a⑤一a—III、IVb

3.制備牛肉膏蛋白月東固體培養(yǎng)基

⑴計(jì)算：依據(jù)配方比例，計(jì)算配制100mL的培養(yǎng)基時(shí)，各種成分的用量。

(2)稱量：準(zhǔn)確地稱取各種成分。

〃①牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯

②加入少量水，加熱

隊(duì)I③牛肉膏溶化后用玻璃棒取出稱量紙

(3)溶化、④加入稱量好的蛋白由和氯化鈉,攪拌

⑤加入瓊脂,加熱使其溶化，并不斷攪拌

、⑥補(bǔ)加蒸僧水定容

'①滅菌前，調(diào)節(jié)也

(4)滅菌＜②方法：高壓蒸汽滅菌法。壓力為100kPa,

、溫度為121℃,滅菌時(shí)間為15?30min

(5)倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至1TC左右時(shí)，在酒精燈火焰旁倒平板。

4.純化大腸桿菌

(1)菌落：由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。

(2)純化大腸桿菌的方法

①純化培養(yǎng)原理：在培養(yǎng)基上得到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的菌落,

即可獲得較純的菌種。

②純化大腸桿菌的關(guān)鍵步驟：接種。

③常用的微生物接種方法有兩種。

a.平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集

的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。

b.稀釋涂布平板法:將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌

液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。

5.菌種的保存方法

(1)對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法。

(2)對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。

一突.破

1.選擇無菌技術(shù)的原則

(1)考慮無菌技術(shù)的效果：滅菌的效果比消毒的要好。

(2)考慮操作對象的承受能力：活體生物材料、操作者的手等只能采用消毒,

而不能用滅菌。

2.平板劃線法與稀釋涂布平板法的比較

比較項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法

將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀

通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)

釋，然后將不同稀釋度的菌液

基表面連續(xù)劃線的操作，將聚

分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的

集的菌種逐步稀釋分散到培

表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足

原理養(yǎng)基上。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，

夠高的菌液里，聚集在一起的

可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖

微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，

而來的肉眼可見的子細(xì)胞群

從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)

體，即菌落

的菌落

在具有顯著的菌落特征的菌從適宜稀釋度的平板上的菌落

菌體獲取

落中挑取菌體中挑取菌體

可以根據(jù)菌落的特點(diǎn)獲得某既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能

優(yōu)點(diǎn)

種微生物的單細(xì)胞菌落對微生物計(jì)數(shù)

缺點(diǎn)不能對微生物計(jì)數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板

a豌-提?升1

〃科學(xué)思維—比較與分類必

1.大腸桿菌純化方法的比較

主要方法平板劃線法稀釋涂布平板法

通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀

基的表面連續(xù)劃線操作，將聚ft,稀釋度足夠高時(shí)，聚集在

純化原理

集的菌種逐步稀釋分散到培一起的微生物將分散成單個(gè)細(xì)

養(yǎng)基表面胞

主要步驟平板劃線操作系列稀釋操作和涂布平板操作

接種工具接種環(huán)涂布器

科學(xué)探究——結(jié)果交流'『討論"

2.某同學(xué)在利用稀釋涂布平板法純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落

連成一片，最可能的原因是什么？為了防止雜菌污染，有同學(xué)建議加入抗生素，

你覺得可以嗎？并說明理由。

提示：最可能的原因是菌液濃度過高(土壤溶液稀釋不夠)。不可以，因?yàn)榭?/p>

生素不但能殺滅雜菌，而且也可以殺滅大腸桿菌，因此在培養(yǎng)基上不可以加入抗

生素。

［考法?考技，考能】

考法1b無菌技術(shù)

1.在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。

回答下列問題：

(1)在實(shí)驗(yàn)室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具(填“可以”或“不可以”)

放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。

(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法，與煮沸消毒法相比，這

兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是o

(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能

，在照射前，適量噴灑，可

強(qiáng)化消毒效果。

(4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過(填“氯氣”“乙醇”或“高鎰酸

鉀”)消毒的。

(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)

到相應(yīng)溫度，最可能的原因是o

［解析］(1)在實(shí)驗(yàn)室中，能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和

金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具等可以放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。

(2)巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法與煮沸消毒法相比，其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)為在達(dá)到消

毒目的的同時(shí)，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。

(3)紫外線照射能消毒的原因是其能夠破壞微生物細(xì)胞中的DNA分子。在利

用紫外線照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可強(qiáng)化消毒效果。

(4)自來水通常采用氯氣消毒。

(5)采用高壓蒸汽滅菌時(shí)，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而溫度未達(dá)到相應(yīng)要求，最

可能的原因是沒有排盡高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的冷空氣。

［答案］(1)可以(2)在達(dá)到消毒目的的同時(shí)，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少(3)破壞

DNA結(jié)構(gòu)消毒液(4)氯氣(5)未將鍋內(nèi)冷空氣排盡

強(qiáng)后提升“消毒和滅菌

項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍

煮沸消毒法日常用品

僅殺死物體

不耐高溫的液

較為溫和表面或內(nèi)部巴氏消毒法

體

消毒的物理或的部分對人

用酒精擦拭

化學(xué)方法體有害的微化學(xué)藥劑

雙手，用氯

生物消毒法

氣消毒水源

灼燒滅菌法接種工具

殺死物體內(nèi)

玻璃器皿、

強(qiáng)烈的理外所有的微干熱滅菌法

滅菌金屬工具

化因素生物，包括

高壓蒸汽培養(yǎng)基及容

芽抱和抱子

滅菌法器的滅菌

考法2＞微生物的純化技術(shù)

2.土壤有“微生物的天然培養(yǎng)基”之稱。如圖是某同學(xué)分離和培養(yǎng)土壤中微

生物的部分操作步驟和實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖?；卮鹣铝袉栴}:

(1)利用固體培養(yǎng)基培養(yǎng)土壤中的微生物時(shí)，除考慮各種營養(yǎng)條件外，還需要

控制的培養(yǎng)條件有(至少寫兩點(diǎn))等。接種前應(yīng)該先檢測固

體培養(yǎng)基是否被污染，檢測的具體方法是O

(2)圖示中用平板劃線法接種的操作順序是A-B-；以上操作步

驟中存在明顯錯誤的是(用字母表示)，該操作的正確方法是

(3)實(shí)驗(yàn)室利用平板劃線法來分離樣品中的目的菌時(shí)，每次劃線之前都要對接

種環(huán)進(jìn)行滅菌，目的是0在第二次及以

后劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣做的目的是o

［解析］(1)若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)土壤中的微生物，除考慮各種營養(yǎng)條件外，還

要考慮溫度、pH、氧氣、無菌和滲透壓等條件。檢測固體培養(yǎng)基是否被污染的方

法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的環(huán)境中放置一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落

產(chǎn)生。

(2)圖示是平板劃線法接種操作示意圖，由以上分析可知，其操作順序是

A-B-E-D-C-F;為了防止雜菌污染，接種應(yīng)該在酒精燈的火焰旁進(jìn)行，因

此以上操作中存在錯誤的步驟是Co

(3)平板劃線法操作時(shí)，每次劃線之前都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌，目的是殺滅上

次劃線接種環(huán)上殘留的菌種。在第二次及以后劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端

開始劃線，能夠使菌種的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終能夠得到單

菌落。

［答案］(1)溫度、pH、氧氣、無菌將未接種的培養(yǎng)基在適宜的環(huán)境中放置

一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(2)E-*D-*C-FC在酒精燈的火焰

旁劃線(3)殺滅上次劃線接種環(huán)上殘留的菌種使菌種的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的

增加而逐漸減少，最終能夠得到單菌落

3.土壤中的苯酚(C6H50H)對環(huán)境有極大的污染，研究人員希望能從土壤中

分離出能專一性降解苯酚的微生物，如圖是部分實(shí)驗(yàn)過程?；卮鹣铝袉栴}：

土壤樣品

①

(1)為了分離純化目的菌種，①?④步驟的培養(yǎng)基中都加入了一定濃度的苯

酚，該物質(zhì)能為微生物提供，除此而外，培養(yǎng)基中一般還需要水、

________________________等營養(yǎng)物質(zhì)0

(2)制備步驟④所需要的固體培養(yǎng)基的操作順序：計(jì)算一稱量

---倒平板。為了在步驟⑤的平板上形成單個(gè)的菌落，涂布

平板前，需要對培養(yǎng)液進(jìn)行多次稀釋，原因是。

(3)研究人員想通過比較試管甲和乙中微生物的生長情況，來證明分離出來的

微生物只能以苯酚作為碳源，若甲試管中的液體培養(yǎng)基中的唯一碳源是苯酚，那

么，乙試管中培養(yǎng)基成分與甲相比，區(qū)別是O

研究人員對甲、乙兩支試管進(jìn)行接種時(shí)，所選菌種都來自步驟⑤平板上的同一個(gè)

單菌落，這樣做的目的是o

［解析］(1)為了分離能專一性降解苯酚的微生物，①?④步驟的培養(yǎng)基中需

要加入苯酚作為唯一碳源，另外培養(yǎng)基中一般還需栗水、氮源、無機(jī)鹽等營養(yǎng)物

質(zhì)。

(2)制備培養(yǎng)基的操作順序是計(jì)算f稱量-*溶化f滅菌-倒平板。在稀釋度足

夠高的菌液里，聚集在一起的微生物易于分散成單個(gè)細(xì)胞，故涂布平板前，需要

對培養(yǎng)液進(jìn)行多次稀釋。

(3)研究人員想通過比較試管甲和乙中微生物的生長情況，來證明分離出來的

微生物只能以苯酚作為碳源，若甲試管中的液體培養(yǎng)基中的唯一碳源是苯酚，那

么，乙試管中應(yīng)該加入其他碳源，比較甲、乙試管中微生物的生長情況，若甲試

管中微生物可以生長，乙試管中微生物不能生長，說明分離出來的微生物只能以

苯酚作為碳源。為了保證甲、乙兩支試管中的微生物種類是相同的，對甲、乙兩

支試管進(jìn)行接種時(shí)，所選菌種都來自步驟⑤平板上的同一個(gè)單菌落。

［答案］(1)碳源氮源和無機(jī)鹽(2)溶化滅菌在稀釋度足夠高的菌液

里，聚集在一起的微生物易于分散成單個(gè)細(xì)胞(3)用其他碳源替代苯酚保證

甲、乙兩支試管中的微生物種類是相同的

考點(diǎn)二微生物的分離和計(jì)數(shù)

［知識?能力?素養(yǎng)】

一國■研,讀1

1.篩選菌株

(1)尋找目的菌株的方法：根據(jù)它對生存環(huán)境的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。

(2)實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選：

①方法：人為提供有利于目的菌株生長的條件,同時(shí)抑制或阻止其他微生物

生長。

②實(shí)例：篩選尿素分解菌時(shí)使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

(3)選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長,同時(shí)抑制或

阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基。

2.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法

(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。

①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的

樣品中微生物的數(shù)量。

②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。

(2)間接計(jì)數(shù)法(適菌計(jì)數(shù)法)。

①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣

品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有

多少活菌。

②計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)=(C+V)XM,其中，。代表某一稀釋度下

平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL),M代表

稀釋倍數(shù)。

③操作：設(shè)置重復(fù)組和對照組,增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。同時(shí)為了保證

結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30?300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

(1)方法：在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑培養(yǎng)分解尿素的細(xì)

菌。

(2)原理。

分解尿素的細(xì)菌