DBT151-2023大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術規(guī)程

ICS65.020.20CCSB15

2301黑龍江省哈爾濱市地方標準DB2301/T151—2023大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術規(guī)程20232023122520240122哈爾濱市市場監(jiān)督管理局?發(fā)布DB2301/T151—2023前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些部分可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由哈爾濱市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。本文件起草單位：哈爾濱市農(nóng)業(yè)科學院。IIDB2301/T151DB2301/T151—2023DB2301/T151DB2301/T151—2023大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術規(guī)程范圍本文件規(guī)定了大豆疫霉根腐病菌生理小種鑒定技術規(guī)程的術語和定義、接種前準備、接種體制備、鑒別寄主的培育、接種、病情調查、生理小種鑒定、滅活、建立鑒定檔案。本文件適用于大豆疫霉根腐病菌生理小種的室內鑒定與評價。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB5084農(nóng)田灌溉水質標準NY/T496肥料合理使用準則通則NY/T2114大豆疫霉病菌檢疫檢測與鑒定方法術語和定義下列術語和定義適用于本文件。下列術語和定義適用于本文件。3.1下胚軸傷口接種1（寬度不超過莖粗1/3、長度1cm），將接種體貼于傷口處。4接種前準備蛭石的滅菌新蛭石經(jīng)121℃濕熱滅菌2h。鑒別寄主準備8Harops1Harosoy13Xps1b，Williams（Rps6）和Harosoy（Rps7），以Sloan（rps）為感病對照。5接種體制備5.1病樣的采集1AA.1）。培養(yǎng)基V8mlV8900ml0.215g～2020min。病原菌分離純化30s～40s33刀切取0.5c2V8培養(yǎng)日期。253d～5d后，取菌落邊緣菌絲10×10倍顯微鏡下觀察，若菌絲無隔，直角分支，平均寬3.5μm，產(chǎn)生球形菌絲膨大體（平均直徑23μm）和同宗配合卵孢子（直徑30μm～35（35μm～58μm×34μm～45μNY/T2114的規(guī)定進行PCRV84次～6病原菌保存V87d，10～17（3個月～4個月傳代一次或-80℃冰箱長期保存。5.5接種體的制備5.5接種體的制備將供試菌株置于V8培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，25℃恒溫下黑暗培養(yǎng)8d，用滅菌解剖刀將含有大豆疫霉根腐病菌菌絲的培養(yǎng)基切成小方塊（3mm×3mm）。接種體在接種當天制備。6鑒別寄主的培育89cm×12.5cm×12.5底徑×高×口徑的盆缽中，以滅菌蛭石做為基質，播種量為15粒/盆，出苗后間苗至10株/盆，3次重復/處理，播種后置于18～26NY/T496GB50847接種接種時間大豆真葉期。接種方法下胚軸傷口接種法。接種后管理2將人工接種后的大豆苗置于相對濕度90%以上、溫度為20℃～25℃環(huán)境48h后，轉入20℃～30℃溫室正常管理，保持土壤含水量達到70%～80%。病情調查調查時間接種后5d～7d進行病情調查。調查方法按照附錄B中規(guī)定的鑒別寄主對大豆疫霉根腐病菌生理小種反應類型進行調查記載。無效數(shù)據(jù)重復測定若某菌株對某鑒別寄主出現(xiàn)“中間類型（IRT）”反應，或某菌株對所有鑒別寄主無致病力，則不能定類群，需重復實驗或不計結果。生理小種鑒定8Rps55（C）確定生理小種。10滅活10滅活將接種鑒定的接種體、基質等在121℃經(jīng)20min滅活處理，將生理小種鑒定后的病株集中焚燒處理，用于栽培應用的盆缽80℃水浴處理2h以上。11建立鑒定檔案建立鑒定檔案，內容包括大豆疫霉根腐病樣品采集、接種前準備、鑒別寄主培育、接種、調查、生理小種鑒定、滅活及建立鑒定檔案。檔案保存3年以上，建檔備查。3附錄 A（資料性）大豆疫霉根腐病田間病樣采集信息表A.1大豆疫霉根腐病田間病樣采集信息表見表A.1。表A.1大豆疫霉根腐病田間病樣采集信息表地塊采樣時間詳細地點種植品種生育期記錄人123444附錄 B（規(guī)范性）鑒別寄主對大豆疫霉根腐病菌生理小種反應類型B.1鑒別寄主對大豆疫霉根腐病菌生理小種反應類型見表B.1。表B.1鑒別寄主對大豆疫霉根腐病菌生理小種反應類型序號反應類型植株死亡率1感病(S)100%≥P≥70%2抗病(R)0≤P≤30%3中間類型(IRT)30%＜P＜70%55附錄 C（資料性）大豆疫霉根腐病菌55個國際通用生理小種表C.1大豆疫霉根腐病菌55個國際通用生理小種表見表C.1。表C.1大豆疫霉根腐病菌55個國際通用生理小種表生理小種毒力公式生理小種毒力公式17291a,1b,1k,6,721b,7301a,1b,1k,3a,6,731a,7311b,1c,1d,1k,6,741a,1c,7321b,1k,6,751a,1c,6,7331a,1b,1c,1d,1k61a,1d,3a,6,7341a,1k,771a,3a,6,7351a,1b,1c,1d,1k81a,1d,6,7363a,691a,6,7371a,1c,3a,6,7101b,3a,6,7381a,1b,1c,1d,1k,3a,6,7111b,6,7391a,1b,1c,1k,3a,6,7121a,1c,1d,1k,3a401a,1c,1d,1k,7136,7411a,1b,1d,1k,7141c,7421a,1d,3a,7153a,7431a,1c,1d,7161b,1c,1k441a,1d,7171d,3a,6,7451a,1b,1c,1k,6,7181c461a,1c,3a,5,6191a,1b,1c,1d,1k,3a471a,1b,1c,7201a,1b,1c,3a,7485,7211a,3a,7491a,1c,4,6,7221a,1c,3a,6,7504,6,7231a,