DB33-T 2465-2022 藍(lán)莓組培苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS

CCS

B

3133 DB33/T

2465—2022藍(lán)莓組培苗生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程Technical

tissue

culture

plantlets

blueberry 浙江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)

布DB33/T

— 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T

—《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本標(biāo)準(zhǔn)的某些內(nèi)容可能涉及專利。本標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并組織實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由浙江省種植業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、諸暨市經(jīng)濟(jì)特產(chǎn)站。DB33/T

—1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了藍(lán)莓組培苗生產(chǎn)的設(shè)施設(shè)備、外植體選取、培養(yǎng)基配制、外植體接種、組培苗培養(yǎng)、包裝、標(biāo)志、運(yùn)輸?shù)葍?nèi)容。本標(biāo)準(zhǔn)適用于兔眼類、高叢類藍(lán)莓的組培苗生產(chǎn)。2 規(guī)范性引用文件(包括所有的修改單)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T

農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則(十)GB

15569 農(nóng)業(yè)植物調(diào)運(yùn)檢疫規(guī)程DB33/T

179.2 林業(yè)育苗技術(shù)規(guī)程 第2部分：林業(yè)容器育苗DB33/T

752 植物種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3 術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1外植體 用于無(wú)菌培養(yǎng)的植物活體，包括完整植株、胚胎或從植物上切取的器官、組織等一切材料。3.2初代培養(yǎng) primary

將滅菌后的外植體接種在無(wú)菌培養(yǎng)基中進(jìn)行的第一代培養(yǎng)。3.3繼代培養(yǎng) subculture初代培養(yǎng)獲得的材料在繼代培養(yǎng)基中不斷長(zhǎng)出新的芽或新的組培苗的培養(yǎng)過(guò)程。3.4組培穴盤(pán)苗 tissue

hole

dish

plantlets移栽在穴盤(pán)中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間培育后的組培生根苗。3.5組培容器苗 tissue

container

plantlets從穴盤(pán)移栽至容器進(jìn)一步培育的苗。4 設(shè)施設(shè)備要求DB33/T

—培養(yǎng)室等；生產(chǎn)所需的生產(chǎn)設(shè)備，主要包括高壓蒸汽滅菌器、超凈工作臺(tái)、電子天平、解剖鏡、空調(diào)、栽大棚。組培苗生產(chǎn)所需基本設(shè)施設(shè)備要求見(jiàn)附錄A。5外植體的選取5.1時(shí)間取材宜選擇藍(lán)莓兩次生長(zhǎng)高峰時(shí)期，在溫暖、晴朗的天氣取材，避免在冬季低溫陰雨天氣取材。5.2 取材從具有品種典型性狀的健康植株上選擇長(zhǎng)勢(shì)旺盛、健壯的半木質(zhì)化枝條，取帶芽莖段作為外植體，未能及時(shí)接種的莖段可保濕貯藏在4

℃冰箱中，所取的莖段應(yīng)在3天內(nèi)完成接種。6 培養(yǎng)基的配制6.1 母液的配制6.1.1 基本培養(yǎng)基

WPM

的母液配制采用木本植物用培養(yǎng)基（woody

plant

medium，）作為基本培養(yǎng)基，將其中所含的化學(xué)成份按1∶、1∶10、1∶1

、1∶、1∶的母液，裝入廣口瓶后置于4

℃冰箱保存。6.1.2 生長(zhǎng)激素的配制將生產(chǎn)所需的玉米素(zeatin，、萘乙酸(1-naphtahaleneacetin

acid，NAA)、吲哚丁酸(indole-3-butyric，IBA)用1摩爾/升鹽酸或95

%酒精溶解，再用蒸餾水稀釋后分別配制成毫克/升的母液，裝入廣口瓶中，置于4

℃冰箱保存。以上所用藥品均為分析純級(jí)別。6.2 培養(yǎng)基的配制6.2.1 瓊脂融化按所需容量的70

%加去離子水，再加入

%的瓊脂，加熱攪拌融化瓊脂。6.2.2 糖溶解瓊脂融化后，加入3

%蔗糖或食用蔗糖，稍加熱使其溶解。6.2.3 加母液糖溶解后，按培養(yǎng)基的配方及所需數(shù)量，依次加入基本培養(yǎng)基的大量元素、鈣鹽、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物及生長(zhǎng)激素母液，并充分?jǐn)嚢琛?.2.4 定容攪拌均勻后，加去離子水至所需體積。6.2.5 pH

值測(cè)定DB33/T

—充分?jǐn)嚢韬?，用pH計(jì)或pH試紙測(cè)值，用0.1摩爾/升的鹽酸或摩爾/升的氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至±0.1。6.2.6 分裝根據(jù)不同需要定量分裝，如250毫升的培養(yǎng)瓶，每升分裝25瓶～30瓶，每瓶分裝33毫升～40毫升。分裝時(shí)勿將培養(yǎng)基沾到瓶口。6.2.7 封口蓋好瓶蓋，或用封口膜封口，扎繩需緊。6.2.8 滅菌滅菌操作按DB33/T

規(guī)定執(zhí)行。6.2.9 貯存滅菌后培養(yǎng)基貯存按

752規(guī)定執(zhí)行。7 外植體的接種7.1 預(yù)處理將外植體去除所有葉片，自來(lái)水沖洗干凈，切取第3～10節(jié)莖段，在流水下沖洗30分鐘～60分鐘。7.2 滅菌在超凈工作臺(tái)上將外植體置于70

%乙醇中秒，再用

%新潔爾滅消毒分鐘，后放于0.1

%升汞中處理6分鐘～8分鐘，輕搖，滅菌結(jié)束后倒出滅菌液，用無(wú)菌水沖洗3次～5次后備用。7.3 接種厘米～1.0厘米帶腋芽莖段，接種于準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中?；壳锌诓迦肱囵B(yǎng)基內(nèi)。8 培養(yǎng)8.1 初代培養(yǎng)8.1.1 培養(yǎng)基配方WPM＋/升～/升玉米素＋克/升蔗糖＋7克/升瓊脂，pH值為±。8.1.2培養(yǎng)方法培養(yǎng)溫度25

2

℃，光照時(shí)間小時(shí)/天～16小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1

500勒克斯～2

勒克斯，培養(yǎng)2030天，誘導(dǎo)出幼芽。8.2 繼代培養(yǎng)8.2.1 培養(yǎng)基配方DB33/T

—WPM＋1.0毫克/升～1.5毫克/升玉米素＋0.01毫克/升～0.03毫克/升萘乙酸＋30克/升蔗糖＋7克/升瓊脂，pH值為5.2±0.1。8.2.2 培養(yǎng)方法培養(yǎng)溫度25

2

℃，光照時(shí)間小時(shí)/天～16小時(shí)/天，光照強(qiáng)度3

000勒克斯～4

勒克斯。剪取叢生苗，剪成1.0厘米～1.5厘米莖段，插入繼代培養(yǎng)基內(nèi)。每20天～天繼代增殖1次。繼代次數(shù)宜控制在10代以內(nèi)，不超過(guò)代。8.2.3 無(wú)根瓶苗培養(yǎng)WPM＋0.01/升萘乙酸＋30克/升蔗糖＋7克/升瓊脂，pH值為±。剪取叢生苗，插入培養(yǎng)基內(nèi)。在相同條件下培養(yǎng)天～天，培養(yǎng)成株高3厘米～5厘米的無(wú)根壯苗，其質(zhì)量指標(biāo)見(jiàn)表B.1。8.3穴盤(pán)苗培育8.3.1 生根培養(yǎng)將無(wú)根壯苗蘸取0.5毫克/升吲哚丁酸＋毫克/升萘乙酸的生根劑后插入穴盤(pán)基質(zhì)中，基質(zhì)為苔蘚，或泥炭土、珍珠巖和蛭石等體積混合基質(zhì)。30天～40天長(zhǎng)出完整根系。培養(yǎng)溫度為15

℃～28

前10天相對(duì)濕度控制在80%～90%3勒克斯～500060%～80%、光照強(qiáng)度5

000勒克斯～

000勒克斯。8.3.2 管理3021015天葉面噴施1次%經(jīng)常檢查新葉的生長(zhǎng)情況，保持通風(fēng)。農(nóng)藥品種、使用次數(shù)和安全間隔期應(yīng)按GB/T

8321.108.3.3 質(zhì)量指標(biāo)見(jiàn)表。8.4 容器苗培育8.4.1 栽培管理將生長(zhǎng)健壯的穴盤(pán)苗移入到直徑為10厘米～12為5∶3∶2的混合基質(zhì)。其他管理參照DB33/T

179.2。8.4.2 出圃符合出圃規(guī)格的苗于9月至次年3月期間均可出圃，出圃規(guī)格見(jiàn)表B.3。9 包裝、標(biāo)志、檢疫、運(yùn)輸9.1 包裝9.1.1 瓶苗包裝瓶苗放入泡沫箱或周轉(zhuǎn)箱，箱外再用紙箱包裝。9.1.2 穴盤(pán)苗包裝DB33/T

—穴盆裝在相應(yīng)規(guī)格的紙板箱內(nèi)。9.1.3 容器苗包裝將容器苗按數(shù)量裝入相應(yīng)規(guī)格的紙板箱內(nèi)。9.2 標(biāo)志每箱應(yīng)貼上標(biāo)簽，注明品種、等級(jí)、數(shù)量、產(chǎn)地、出苗日期等。9.3 檢疫參照GB

15569要求執(zhí)行。9.4 運(yùn)輸選擇冷藏車(chē)，運(yùn)輸途中溫度保持20

℃～

60

%～80

%的相對(duì)濕度，5天內(nèi)到達(dá)目的地。10 生產(chǎn)檔案2年。11 模式圖藍(lán)莓組培苗標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)技術(shù)模式圖參見(jiàn)附錄C。1.11.21.3清潔、干燥、通風(fēng)，能終年保持相對(duì)較低的溫度，避免陽(yáng)光直照；放置天平的實(shí)1.4通風(fēng)、干燥，配備大容量用電專用線路，上下水道暢通。1.5地面與墻壁應(yīng)能夠忍受高濕狀態(tài)，地面防滑、白瓷磚墻面，配備大容量用電線路1.61.71.8

25

75

1.9

25

70

75

%)置、日光設(shè)備1.10控溫、干凈、通風(fēng)、光線好，內(nèi)墻白色光滑，上下水道暢通。1.115.1辦公桌、電話、傳真機(jī)、電腦、打印機(jī)等辦公設(shè)備。5.25.3DB33/T

—附

錄 A（資料性）藍(lán)莓組培苗生產(chǎn)所需設(shè)施及儀器設(shè)備表A.1～表給出了藍(lán)莓組培苗生產(chǎn)所需設(shè)施及儀器設(shè)備。表A.1給出了藍(lán)莓組培苗生產(chǎn)所需基本配套設(shè)施。表

A.1 基本配套設(shè)施101112131415161718192021DB33/T

—表A.2給出了組培苗生產(chǎn)所需儀器設(shè)備。表

A.2 所需的儀器設(shè)備具有完整而發(fā)達(dá)的根系，形成根團(tuán)。苗健壯、挺拔和新鮮，形態(tài)完整、葉片大小協(xié)調(diào)，葉色具原品種特苗壯實(shí)，高度

90

以上的苗達(dá)到上述要求。

≥40

≥30

a)b)生長(zhǎng)健壯，芽飽滿；c)d)

個(gè)～

苗有活力、粗壯、挺直，葉大小協(xié)調(diào)、色澤正常，具原品種特性，無(wú)?；?；培養(yǎng)基無(wú)污具有適宜和正常的葉片數(shù)，≥5

90

以上的苗達(dá)到上述要求。DB33/T

—附

錄 B（資料性）育苗質(zhì)量指標(biāo)B.1 無(wú)根瓶苗質(zhì)量指標(biāo)無(wú)根瓶苗質(zhì)量指標(biāo)見(jiàn)表。表

B.1 無(wú)根瓶苗質(zhì)量指標(biāo)B.2 穴盤(pán)苗質(zhì)量指標(biāo)穴盤(pán)苗質(zhì)量指標(biāo)見(jiàn)表B.2。表

B.2 穴盤(pán)苗質(zhì)量指標(biāo)B.3 容器苗出圃規(guī)格容器苗出圃規(guī)格見(jiàn)表B.3。表

B.3 容器苗出圃規(guī)格生根后穴盤(pán)苗相對(duì)濕度控制在

80

、光照強(qiáng)度

勒克斯～

勒克斯。天后可用噴淋澆水。抽生1015-15-15GB/T

WPM30pH

25

12

天，光

MgSO429.25

KH2PO44.25

(NH42SO410

2422.5

苗健壯、挺拔和新鮮，形態(tài)完整、葉片大小協(xié)調(diào)，葉色具原品種特性、有光澤。具有完整而發(fā)達(dá)的根系，形成

WPM0.0130

25

12

天，光

(100

MnSO422.25

ZnSO420.86

330.62

Na242

WPM

毫克升萘乙酸＋

25

12

天，光

CuSO42

10

DB33/T

CaCl224.84

Ca(NO32227.8

(1

FeSO422.78

15

28

8090Na23.73

30

(100

10

從具有品種典型性狀的健康植株上選擇長(zhǎng)勢(shì)旺盛、健壯的半木質(zhì)化枝條，取帶芽莖基本培養(yǎng)基

WPM、生長(zhǎng)激素按配方配制成母液，置于

℃冰存；方配外植體經(jīng)流水沖洗后在超凈工作臺(tái)上經(jīng)乙醇，升汞滅菌處理，切成帶腋芽莖段，接在無(wú)菌條件下將外植