化妝品中非納雄胺等10種組分的測定（BJH 202401）

————BJH化妝品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法BJH202401化妝品中非那雄胺等10種組分的測定2024-1-9發(fā)布國家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布化妝品中非那雄胺等10種組分的測定（BJH202401）1范圍本方法規(guī)定了化妝品中羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺、環(huán)丙孕酮、醋酸環(huán)丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺的測定方法。本方法適用于膏霜乳類、液體類（水、油）、凝膠類、蠟基類、粉劑類化妝品中非那雄胺等10種組分的定性和定量測定。2原理樣品經(jīng)50%乙腈超聲提取后，采用高效液相色譜儀分離，質(zhì)譜檢測器檢測。根據(jù)保留時(shí)間和特征離子對的相對豐度比定性，定量離子對峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。3試劑材料除另有規(guī)定外，本方法中所用試劑均為分析純及以上規(guī)格，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1甲醇，色譜純。3.2乙腈，色譜純。3.350%乙腈溶液：取500mL乙腈（3.2），用水稀釋至1000mL，混勻。3.4甲酸，色譜純。3.50.01%甲酸溶液：取0.1mL甲酸（3.4），用水稀釋至1000mL，混勻。3.6標(biāo)準(zhǔn)品：羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟他胺、環(huán)丙孕酮、醋酸環(huán)丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺的標(biāo)準(zhǔn)品，純度均≥98%，氟羅地爾的標(biāo)準(zhǔn)品，純度＞95%。標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式詳見附錄A中的表A.1。3.7標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取羥基氟他胺、非那雄胺、尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺、環(huán)丙孕酮、醋酸環(huán)丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺標(biāo)準(zhǔn)品（3.6）各10mg（精確到0.00001g），分別置于10mL棕色容量瓶中，用甲醇（3.1）溶解并定容至刻度，搖勻。作為羥基氟他胺等10種組分單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液均置于-18℃冰箱中避光保存。各組分儲(chǔ)備溶液濃度見表1。3.8混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確移取羥基氟他胺、非那雄胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.7）各0.5mL，尼魯米特、比卡魯胺、氟羅地爾、氟他胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.7）各1.0mL，環(huán)丙孕酮、醋酸環(huán)丙孕酮、度他雄胺、依立雄胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.7）各2.0mL置于同一200mL棕色容量瓶中，用50%乙腈溶液（3.3）定容至刻度，搖勻，制成混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。置于-18℃冰箱中避光保存。各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度見表1。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀。4.2分析天平：感量0.0001g和0.00001g。4.3超聲波清洗器。4.4渦旋混合儀。4.5高速離心機(jī)。4.6微孔濾膜：孔徑為0.22μm有機(jī)相微孔濾膜。5試樣制備與保存樣品應(yīng)按照標(biāo)簽標(biāo)示的貯存條件進(jìn)行保存。取樣前，應(yīng)檢查封口的完整性，觀察樣品的性狀和特征，并使樣品混勻。打開包裝后，應(yīng)盡可能快地取出所要測定部分進(jìn)行分析，取樣后，應(yīng)將樣品進(jìn)行密封保存。6分析步驟6.1篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.8）適量，用50%乙腈溶液（3.3）進(jìn)行稀釋，配制成篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。各組分篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度見表1。6.2空白基質(zhì)提取液稱取空白試樣0.2g（精確到0.0001g），置于20mL具塞比色管中，自“加入50%乙腈溶液（3.3）15mL”起與樣品同法處理（6.5），作為空白基質(zhì)提取液。6.3基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.8）2mL，置于10mL棕色容量瓶中，用空白基質(zhì)提取液（6.2）稀釋至刻度，搖勻，制成基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。各組分基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液濃度見表1。表1非那雄胺等10種組分各溶液濃度序號(hào)組分名稱標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（mg/L）混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（mg/L）篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（mg/L）基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（mg/L）1羥基氟他胺10002.50.0050.52非那雄胺10002.50.0050.53尼魯米特100050.0114比卡魯胺100050.0115氟羅地爾100050.0116氟他胺100050.0117環(huán)丙孕酮1000100.0228醋酸環(huán)丙孕酮1000100.0229度他雄胺1000100.02210依立雄胺1000100.0226.4基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別精密量取基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（6.3）0.1mL、0.25mL、0.5mL、0.75mL、1.0mL至10mL容量瓶中，用空白基質(zhì)提取液（6.2）配制得基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，各組分基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度見表2?；|(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。表2非那雄胺等10種組分的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度序號(hào)組分名稱基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（mg/L）1羥基氟他胺0.0050.01250.0250.03750.052非那雄胺0.0050.01250.0250.03750.053尼魯米特0.010.0250.050.0750.14比卡魯胺0.010.0250.050.0750.15氟羅地爾0.010.0250.050.0750.16氟他胺0.010.0250.050.0750.17環(huán)丙孕酮0.020.050.10.150.28醋酸環(huán)丙孕酮0.020.050.10.150.29度他雄胺0.020.050.10.150.210依立雄胺0.020.050.10.150.26.5樣品處理稱取樣品0.2g（精確至0.0001g），置于20mL具塞比色管中，加入50%乙腈溶液（3.3）15mL，渦旋30s，使分散均勻，超聲20min，靜置至室溫，用50%乙腈溶液（3.3）定容至刻度，搖勻，以10000r/min轉(zhuǎn)速離心5min，吸取上清液，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，濾液作為供試品溶液備用（供試品溶液可根據(jù)實(shí)際濃度進(jìn)行適當(dāng)稀釋）。6.6儀器參考條件6.6.1色譜條件色譜柱：C18柱（100mm×2.1mm，3.5μm），或等效色譜柱；流動(dòng)相：A為0.01%甲酸溶液（3.5），B為甲醇（3.1）。梯度洗脫程序見表3；流速：0.3mL/min；柱溫：25℃；進(jìn)樣量：1μL。表3梯度洗脫程序時(shí)間（min）流動(dòng)相A（%）流動(dòng)相B（%）0.009558.0095512.00455530.00208035.00109035.1095540.009556.6.2質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI源）；監(jiān)測模式：正離子、負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定見表4。表4非那雄胺等10種組分監(jiān)測離子對及相關(guān)參數(shù)設(shè)定序號(hào)組分名稱母離子（m/z）子離子（m/z）CE（eV）監(jiān)測模式1羥基氟他胺291.0205.0*-24負(fù)離子175.0-402非那雄胺373.2317.2*26正離子305.1363尼魯米特316.0273.0*-24負(fù)離子205.0-204比卡魯胺429.0255.0*-16負(fù)離子185.0-525氟羅地爾402.0205.0*-28負(fù)離子196.0-206氟他胺275.0201.9*-26負(fù)離子204.9-247環(huán)丙孕酮375.2321.1*20正離子218.9268醋酸環(huán)丙孕酮417.2357.1*14正離子147.0349度他雄胺529.2461.1*40正離子95.05610依立雄胺400.2344.1*24正離子72.146*為推薦的定量離子。注：當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。6.7定性判定取供試品溶液（6.5）與篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）在相同分析條件下測定，樣品中如呈現(xiàn)定量離子對和定性離子對的色譜峰，被測組分的特征離子峰保留時(shí)間與篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）對應(yīng)的保留時(shí)間一致，且選擇的監(jiān)測離子對的相對豐度比與相當(dāng)濃度的篩查用混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（6.1）的監(jiān)測離子對的相對豐度比的最大偏差不超過表5的規(guī)定，則可以判定樣品中存在對應(yīng)的組分。表5定性確證時(shí)相對離子豐度比的最大允許偏差相對離子豐度（k）k＞50%50%≥k＞20%20%≥k＞10%k≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%6.8定量測定取基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（6.4）依次測定，以待測組分的系列濃度為橫坐標(biāo)，待測組分的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，繪制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，其線性相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.99。取供試品溶液（6.5）測定，將對應(yīng)的定量離子對色譜峰面積代入基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線。按“7”項(xiàng)下公式，計(jì)算樣品中待測組分的含量。6.9平行試驗(yàn)按以上步驟，對同一樣品進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)測定。6.10空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按上述測定條件和步驟進(jìn)行。7結(jié)果計(jì)算結(jié)果按式（1）計(jì)算：QUOTE………………(SEQ標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)公式\*ARABIC1)式中：ω—樣品中非那雄胺等10種組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，mg/kg；ρ—供試品溶液中非那雄胺等10種組分的質(zhì)量濃度，μg/L；V—樣品定容體積，mL；m—樣品取樣量，g；D—稀釋倍數(shù)（如未稀釋則為1）。在相同條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8精密度和準(zhǔn)確度多家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證定量下限濃度回收率為80%～110%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%（n=6），中、高濃度回收率為90%～110%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于7.5%（n=6）。9檢出限和定量限本方法中各組分的檢出限、定量下限及取樣量為0.2g時(shí)的檢出濃度和最低定量濃度見表6。表6非那雄胺等10種組分的檢出限、定量下限、檢出濃度和最低定量濃度序號(hào)組分名稱檢出限（ng）定量下限（ng）檢出濃度（mg/kg）最低定量濃度（mg/kg）1羥基氟他胺0.00150.0050.150.52非那雄胺0.00150.0050.150.53尼魯米特0.0030.010.314比卡魯胺0.0030.010.315氟羅地爾0.0030.010.316氟他胺0.0030.010.317環(huán)丙孕酮0.0060.020.628醋酸環(huán)丙孕酮0.0060.020.629度他雄胺0.0060.020.6210依立雄胺0.0060.020.6210圖譜圖1非那雄胺等10種組分標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測提取離子圖（1.尼魯米特；2.羥基氟他胺；3.比卡魯胺；4.氟羅地爾；5.氟他胺；6.非那雄胺；7.環(huán)丙孕酮；8.醋酸環(huán)丙孕酮；9.度他雄胺；10.依立雄胺）

附錄A非那雄胺等10種組分的相關(guān)信息表A.1非那雄胺等10種組分的中文名稱、英文名稱、CAS號(hào)、分子式、相對分子質(zhì)量及結(jié)構(gòu)式中文名稱英文名稱CAS號(hào)分子式相對分子質(zhì)量結(jié)構(gòu)式羥基氟他胺Hydroxyflutamide52806-53-8C11H11F3N2O4292.21非那雄胺Finasteride98319-26-7C23H36N2O2372.54尼魯米特Nilutamide63612-50-0C12H10F3N3O4317.22比卡魯胺Bicalutamide90357-06-5C18H14F4N2O4S430.37氟羅地爾Fluridil260980-89-0C13H11F6N3O5403.23氟他胺Flutamide13311-84-7C