化學(xué)毒物的生殖毒性課件

化學(xué)毒物的生殖毒性

生殖（reproduction）是人和哺乳動(dòng)物繁衍種族的復(fù)雜的生理過程，包括兩性生殖細(xì)胞或稱配子的發(fā)生，即精子發(fā)生(spermatogenesis)和卵子發(fā)生（cogenesis）、配子的釋放、性周期和性行為、卵細(xì)胞受精（fertilization）、受精卵卵裂、胚泡形成、植入(implantation)或著床（imbed）、胚胎形成、胚胎發(fā)育、器官形成、胎兒發(fā)育、分娩和哺乳、出生后發(fā)育直至性成熟，又繁殖下一代。

生殖與發(fā)育過程的每個(gè)階段所涉及的細(xì)胞或器官都可能成為外源化學(xué)物毒作用的靶。

對(duì)大量化學(xué)毒物的研究表明：對(duì)大多數(shù)化學(xué)毒物來說生殖系統(tǒng)比其他系統(tǒng)更敏感。因此，在化學(xué)毒物安全性評(píng)價(jià)中生殖系統(tǒng)至關(guān)重要。生殖毒理的研究目的①通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)獲得劑量-反應(yīng)關(guān)系;②研究化學(xué)毒物對(duì)生殖系統(tǒng)的毒作用機(jī)制；③進(jìn)行人群流行病學(xué)研究；④對(duì)某個(gè)化學(xué)毒物進(jìn)行生殖毒性的安全性評(píng)價(jià)。常用有關(guān)術(shù)語與基本概念1、生殖功能障礙(reproductiondysfunction)：由父方與/或母方接觸化學(xué)毒物導(dǎo)致干擾受孕、孕體、發(fā)育、出生以及后代成熟為健康成人。2、生殖毒性（reproductiontoxicity）：是指外源化學(xué)物對(duì)雄性和雌性生殖功能或能力以及對(duì)后代產(chǎn)生的不良效應(yīng)。包括：①生育力與一般生殖行為；②致畸形；③對(duì)孕后期與哺乳（圍生期、出生后）的不良效應(yīng)。3、生殖毒理學(xué)(reproductiontoxicology)：研究化學(xué)毒物抑制或干擾卵子和精子生成機(jī)制和對(duì)后代發(fā)育的不良作用，為安全性評(píng)價(jià)與預(yù)防提供依據(jù)。4、發(fā)育毒性(developmenttoxicity)：化學(xué)毒物在著床前胚泡、器官形成，胎兒和新生兒各發(fā)育階段干擾正常發(fā)育過程，稱為發(fā)育毒性。不同的化學(xué)毒物作用于不同發(fā)育階段。過早或過遲接觸都可能不產(chǎn)生效應(yīng)。出生時(shí)發(fā)育毒性的四大表現(xiàn)為：①胚胎胎兒死亡；②結(jié)構(gòu)異常；③生長(zhǎng)發(fā)育遲緩；④功能缺陷。5、胚胎-胎兒毒性（embryo－fetaltoxicity）：指發(fā)育毒性中的胚胎-胎兒生長(zhǎng)發(fā)育遲緩和功能缺陷兩項(xiàng)。6、致畸性（teratogenicity）、致畸作用（teratogeniceffect）：均指化學(xué)毒物可能引起后代畸形的特性或作用。7、畸形(malformation):器官形態(tài)結(jié)構(gòu)的異常。8、畸胎(terate):具有畸形的胚胎或胎仔。9、致畸物(teratogen):凡在一定劑量下，能通過母體對(duì)胚胎或胎兒正常發(fā)育過程造成干擾，使其出生后具有畸形的化學(xué)毒物。10、致畸試驗(yàn)（teratologystudy）：評(píng)定外來化合物是否具有致畸作用的試驗(yàn)。

11、致畸敏感期（criticalperiod）亦稱器官形成期（organogenesisperiod）：胚胎從著床到繼發(fā)腭閉合（表示器官形成基本結(jié)束），這段時(shí)間對(duì)化學(xué)毒物最敏感，故稱敏感期。12、母體毒性(maternaltoxicity)：是指化學(xué)毒物對(duì)孕母產(chǎn)生的損害作用，如表現(xiàn)為增重減慢、功能異常、臨床癥狀，甚至死亡。第一節(jié)雄性生殖毒性－、雄性生殖細(xì)胞的發(fā)生過程

精子生成是一連續(xù)發(fā)生過程，從一個(gè)精原細(xì)胞分化成為成熟的精子，在不同的物種和品系中所需要的時(shí)間并不相同：人類64d小鼠35d兔43dwistar大鼠53.2d公牛54d二、外源化學(xué)物的雄性生殖毒性1、對(duì)睪丸生精細(xì)胞的影晌2、對(duì)內(nèi)分泌功能的影響3、對(duì)性功能和生殖功能的影響三、雄性生殖毒性的檢測(cè)方法（一）精子分析：1、精子計(jì)數(shù)：精子數(shù)是雄性性功能的一項(xiàng)重要指標(biāo)，可提供有關(guān)精子發(fā)育與成熟方面的粗略信息。2、精子形態(tài)觀察精子的形態(tài)通過伊紅染色在顯微鏡下觀察。精子頭部和尾部的形態(tài)學(xué)改變3、精子狀態(tài)分析試驗(yàn)包括精液的pH、液化時(shí)間，精子運(yùn)動(dòng)能力，蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和微量元素的含量等。(二)精子穿透試驗(yàn)：(三)睪丸中標(biāo)志酶活性的測(cè)定：一類為透明質(zhì)酸酶、山梨醇脫氫酶(SDH)、乳酸脫氫酶同工酶x(LDH-x)、5-核苷酸酶、α-磷酸甘油脫氫酶等，在精母細(xì)胞和精細(xì)胞中首先出現(xiàn)，其含量和活性隨精子的形成、成熟而達(dá)到高峰。另一類為6-磷酸葡萄糖脫氫酶、蘋果酸脫氫酶、三磷酸甘油醛脫氫酶、異檸檬酸脫氫酶、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、尿苷二磷酸酶、鳥氨酸脫羧酶等，在睪丸足細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞或精原細(xì)胞內(nèi)含量最高，其含量和活性在性成熟前達(dá)到高峰，并隨精母細(xì)胞、精細(xì)胞和精子的形成、成熟而降低。(四)體外試驗(yàn)：主要是將哺乳動(dòng)物的生殖細(xì)胞在體外條件下進(jìn)行培養(yǎng)，并與受試外源化學(xué)物接觸，觀察生殖細(xì)胞的變化。通過支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞等體外分離培養(yǎng)，測(cè)定支持細(xì)胞的乳酸含量和乳酸脫氫酶活性的變化以及測(cè)定間質(zhì)細(xì)胞分泌的雄激素含量來判斷外源化學(xué)物是否對(duì)所培養(yǎng)細(xì)胞的功能有影響。對(duì)分離培養(yǎng)的支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞，亦可通過細(xì)胞計(jì)數(shù)和形態(tài)學(xué)檢查的方法來判斷外源化學(xué)物是否對(duì)支持細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞有損害作用。若細(xì)胞受到損害，則表現(xiàn)出固縮、脫壁、死亡及崩解。(五)雄性激素檢測(cè)：睪丸的功能主要靠卵泡刺激素(FSH)、黃體生成激素(LH)和雄激素(主要為睪酮)來維持和調(diào)節(jié)。FSH可促迸睪丸內(nèi)精子的發(fā)生。LH可刺激睪丸間質(zhì)細(xì)胞發(fā)育，使其分泌雄性激素，主要是睪丸酮。雄激素可能促進(jìn)精細(xì)胞的增值與分化及維持性功能。(六)顯性致死試驗(yàn)：通過給予雄性動(dòng)物受試化學(xué)物，將其與未經(jīng)受試物處理的雌性動(dòng)物交配，觀察雌性動(dòng)物早期胚胎死亡情況，以評(píng)價(jià)受試物是否對(duì)雄性動(dòng)物的生殖有損害作用的試驗(yàn)。

(七)雄性生殖細(xì)胞遺傳毒性檢測(cè)：小鼠睪丸染色體畸變分析試驗(yàn)

小鼠精子畸變分析試驗(yàn)黑腹果蠅染色體性隱性分析試驗(yàn)……

1、病毒性肝炎：由病毒造成的肝炎按照其病毒系列不同分為甲、乙、丙、丁、戊和庚共六種類型病毒性肝炎。能引起肝臟細(xì)胞腫脹，是世界上流傳廣泛，危害很大的傳染病之一。1908年，才發(fā)現(xiàn)病毒也是肝炎的致病因素之一。1947年，將原來的傳染性肝炎（infectioushepatitis）稱為甲型肝炎（HepatitisA,HA）；血清性肝炎（serumhepatitis）稱為乙型肝炎（HepatitisB,HB）。1965年人類首次檢測(cè)到乙型肝炎的表面抗原。我國(guó)經(jīng)濟(jì)和科學(xué)技術(shù)日益發(fā)展，學(xué)術(shù)文化領(lǐng)域百家爭(zhēng)鳴，（df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr）特別是思想家的革新精神，為中醫(yī)學(xué)理論的創(chuàng)新和突破性進(jìn)展，提供了有利的文化背景。宋代陳無擇著《三因極一病證方論》一書，（45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）提出三因?qū)W說；并產(chǎn)生了最具盛名四大學(xué)派，劉完素倡導(dǎo)火熱論；張從正力倡“攻邪論”；李杲提出“內(nèi)傷脾胃，百病由生”的理論；朱震亨創(chuàng)造性地闡明了相火的演變規(guī)律。編輯本段明清時(shí)期（df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2）是中醫(yī)學(xué)理論綜合匯編、深化發(fā)展，臨床各科辨證體系豐富、提高階段。如明代樓英的《醫(yī)學(xué)綱目》和王肯堂的《證治準(zhǔn)繩》，清代吳謙等編著的《醫(yī)宗金鑒》和陳夢(mèng)雷主編的《古今圖書集成·醫(yī)部全錄》等。王清任著《醫(yī)林改錯(cuò)》，注重實(shí)證研究，（df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr）糾正了古醫(yī)籍中關(guān)于解剖知識(shí)的某些錯(cuò)誤，肯定了“腦主思維”，發(fā)展了瘀血理論。溫病學(xué)說的形成和發(fā)展，標(biāo)志著中醫(yī)理論的創(chuàng)新與突破，吳有性著《溫疫論》，葉天士著《溫?zé)岵∑?，吳鞠通著《溫病條辨》等，在藥物學(xué)研究方面，（45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）李時(shí)珍著的《本草綱目》，總結(jié)了16世紀(jì)以前我國(guó)藥物學(xué)研究的成就。醫(yī)的診察疾病能參考現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的微觀分析，將辨證與辨病相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)宏觀與微觀的統(tǒng)一，使中醫(yī)診斷客觀化，即把分析與綜合相結(jié)合的方法引入中醫(yī)理、法、方、藥的研究，使二者有機(jī)結(jié)合，互相借鑒、補(bǔ)充，避免各自的片面性、局限性，這將有利于中西醫(yī)學(xué)的優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，“和而不同”，多元發(fā)展。近年來，中醫(yī)藥在防治非典、禽流感和艾滋病方面發(fā)揮的獨(dú)特作用也證實(shí)了二者的有機(jī)結(jié)合，具有肯定的臨床療效。編輯本段東西方醫(yī)學(xué)交融不管是中醫(yī)學(xué)還是西醫(yī)學(xué)，從二者現(xiàn)有的思維方式的發(fā)展趨勢(shì)來看，均是走向現(xiàn)代系統(tǒng)論思維，中醫(yī)藥學(xué)理論與現(xiàn)代科學(xué)體系之間具有系統(tǒng)同型性，屬于本質(zhì)相同而描述表達(dá)方式不同的兩種科學(xué)形式?？赏诂F(xiàn)代系統(tǒng)論思維上實(shí)現(xiàn)交融或統(tǒng)一，成為中西醫(yī)在新的發(fā)展水平上實(shí)現(xiàn)交融或統(tǒng)一的支撐點(diǎn)，希冀籍此能給中醫(yī)學(xué)以至生命科學(xué)帶來良好的發(fā)展機(jī)遇，進(jìn)而對(duì)醫(yī)學(xué)理論帶來新的革命。編輯本段現(xiàn)代中醫(yī)史上個(gè)世紀(jì)末,本世紀(jì)初，1996年,清華學(xué)界對(duì)中醫(yī)氣本質(zhì)，經(jīng)絡(luò)實(shí)質(zhì)，陰陽，五行，藏象，中醫(yī)哲學(xué)觀等都有了新的全面整體創(chuàng)造性的認(rèn)識(shí)和解說。如，鄧宇等發(fā)現(xiàn)的:氣是流動(dòng)著的‘信息－能量－物質(zhì)’的混合統(tǒng)一體；分形分維的經(jīng)絡(luò)解剖結(jié)構(gòu)；數(shù)理陰陽；中醫(yī)分形集：分形陰陽集－陰陽集的分形分維數(shù)，五行分形集－五行集的分維數(shù)；分形藏象五系統(tǒng)－暨心系統(tǒng)、肝系統(tǒng)、脾系統(tǒng)、肺系統(tǒng)、腎系統(tǒng)；中醫(yī)三個(gè)哲學(xué)觀－新提出的第三哲學(xué)觀：相似觀－分形論等。還包括近代針灸經(jīng)絡(luò)的發(fā)展史,近代中醫(yī)氣的進(jìn)展簡(jiǎn)史,中西醫(yī)結(jié)合史,中醫(yī)中藥史等.六種類型的病毒性肝炎遺傳因子不同，除乙型肝炎遺傳因子是DNA外，其余幾型肝炎遺傳因子均為RNA。其中甲型肝炎的傳播途徑是糞口傳播，乙型肝炎的傳播途徑是血液傳播、性傳播和母嬰傳播。疫苗。

2、酒精性肝炎：酒精性肝炎早期可無明顯癥狀，但肝臟已有病理改變，發(fā)病前往往有短期內(nèi)大量飲酒史，有明顯體重減輕，食欲不振，惡心，嘔吐，全身倦怠乏力，發(fā)熱，腹痛及腹瀉，上消化道出血及精神癥狀。體征有黃疸，肝腫大和壓痛，同時(shí)有脾腫大，面色發(fā)灰，腹水浮腫及蜘蛛痣，食管靜脈曲張。從實(shí)驗(yàn)室檢查看，有貧血和中性白細(xì)胞增多，紅細(xì)胞容積測(cè)定（MCV）大于95FL,血清膽紅素增高，可達(dá)17.1μmoL/L或以上，轉(zhuǎn)氨酶中度升高，常大于2.0，測(cè)定線粒體AST（mAST）及其與總AST（tAST）的比值，其升高可達(dá)12.5+5.2%。并有γ-GT，谷氨酸脫氫酶和堿性磷酸酶活力增高，凝血酶原時(shí)間延長(zhǎng)。此外，病毒性肝炎還有丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎和庚型肝炎。過去被定為己型肝炎病毒的病毒現(xiàn)在被確定為乙型肝炎病毒的一個(gè)屬型，因此己型肝炎不存在。在病毒肝炎的疫苗，A型、B型、D型的疫苗已研發(fā)成功；C型、E型、F型的目前無編輯本段宋金元時(shí)期精品課件文檔，歡迎下載，下載后可以復(fù)制編輯。更多精品文檔，歡迎瀏覽。(八)雄性生殖毒性病理檢查：睪丸、附睪、前列腺以及精囊的重量和大小的改變常是接觸有害外源化學(xué)物的明顯征兆。

從解剖、病理學(xué)觀察等形態(tài)學(xué)角度評(píng)價(jià)外源化學(xué)物對(duì)雄性生殖系統(tǒng)的毒性作用，是雄性生殖毒理學(xué)研究中不可缺少的較為敏感的指標(biāo)和重要手段。第二節(jié)雌性生殖毒性一、雌性生殖細(xì)胞的發(fā)生過程二、外源化學(xué)毒物的雌性生殖毒性雌性哺乳類的生殖過程包括：性器官的成熟；卵細(xì)胞的發(fā)育與具有受精能力；性功能、性欲和性行為；卵受精和著床；胚胎和胎兒發(fā)育；分娩和授乳。這一系列過程中任何一環(huán)節(jié)受到損害，均可對(duì)生殖功能產(chǎn)生不良影響，不僅損害母體，而且危害后代。1、對(duì)卵細(xì)胞的損害

無論是身體細(xì)胞還是卵細(xì)胞受到損害都有可能影響其后代的健康與幸福；2、受孕后身體生理變化可增加對(duì)化學(xué)毒物的敏感性；3、對(duì)性激素和性周期的作用所有干擾中樞神經(jīng)系統(tǒng)和性腺調(diào)節(jié)GnRH或LHRH合成與釋放的信息傳遞的外源化學(xué)毒物都有可能影響性激素的產(chǎn)生與作用，化學(xué)毒物能進(jìn)入大腦，損害下丘腦，干擾性激素從而影響正常的月經(jīng)周期和排卵；4、性行為在很大程度上受精神心理因素影響，外源化學(xué)毒物的作用與之混雜在一起；5、對(duì)孕體的損害從卵細(xì)胞受精到胎兒出生前統(tǒng)稱為孕體(conceptus）。（1）著床前期：這時(shí)受損傷的胚泡容易死亡，稱為著床前丟失（preimplantationloss）。（2）胚胎期：即器官發(fā)生期，嚙齒類在第7～16天，人是第3～8周（又稱胚期）。這期的特點(diǎn)是細(xì)胞移動(dòng)和組合，形成器官原基，四肢和顏面形成等。這時(shí)期特別容易誘發(fā)器官結(jié)構(gòu)的缺陷，即結(jié)構(gòu)畸形，故又稱敏感期；也可能引起胚胎死亡。

嚙齒類胚胎死亡后被吸收，稱為吸收胎（resorption），在人則以流產(chǎn)告終，人的胚胎約50％死亡。畸形的發(fā)生取決于化學(xué)毒物的性質(zhì)、劑量以及給予的時(shí)間。在胚胎期中不同日給予致畸物會(huì)誘發(fā)不同器官畸形，因?yàn)椴煌鞴俚拿舾衅谟胁顒e，過早或過遲反而不引起畸形。（3）胎兒期：嚙齒類是第8天以后，人是第9-41周，這時(shí)孕體稱胎兒。這期主要是組織與器官的繼續(xù)生長(zhǎng)與分化，功能逐漸成熟。死亡的胎兒稱為死胎，在嚙齒類也不能吸收，留在子宮內(nèi)，以后產(chǎn)出，稱死產(chǎn)。發(fā)育毒性四大類表現(xiàn)中死亡、畸形、生長(zhǎng)遲緩易判斷。功能不全研究相對(duì)較少，因?yàn)橥霈F(xiàn)較遲，較難檢查出，常被忽視。三、雌性生殖毒性的檢測(cè)方法(一)體外試驗(yàn)Amann等(1982年)曾對(duì)雌性生殖毒性提出一個(gè)較為全面的試驗(yàn)方案，見表7-2（P127-128）在雌性生殖毒性評(píng)價(jià)中，包括多種體外試驗(yàn)方法，能說明生殖器官多方面的功能及完整性。體外試驗(yàn)對(duì)于闡明化學(xué)毒物的毒性作用機(jī)理具有重要意義。(二)動(dòng)物試驗(yàn)

在毒理學(xué)領(lǐng)域中，生殖與發(fā)育毒性的確切評(píng)定較為困難。原因在于:①許多不同的生殖與發(fā)育階段都可以誘發(fā)損害作用;②損害作用的后果多種多樣，可以是結(jié)構(gòu)損傷或者功能損傷，并可表現(xiàn)在不同的器官等;③損害作用可表現(xiàn)在初生時(shí)期或發(fā)育成熟以后，即可表現(xiàn)在整個(gè)生命過程的不同階段。(三)其它輔助試驗(yàn)

雌性動(dòng)物動(dòng)情周期觀察、排卵觀察、雌激素水平的測(cè)定、病理組織學(xué)測(cè)定等一些輔助試驗(yàn)。這些試驗(yàn)不僅可對(duì)雌性生殖毒性做出估計(jì)，而且對(duì)中毒機(jī)制的探討具有重要意義。第三節(jié)生殖與發(fā)育毒性試驗(yàn)的目的和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要點(diǎn)一、生殖與發(fā)育毒性研究的目的：揭示化學(xué)品對(duì)哺乳動(dòng)物生殖發(fā)育的任何有害影響，并將研究的結(jié)果與所有可以得到的其他毒理學(xué)資料聯(lián)系起來，以推測(cè)對(duì)人可能造成的生殖危險(xiǎn)。（應(yīng)包括成年動(dòng)物和從受孕到子代性成熟的各個(gè)發(fā)育階段接觸受試物、應(yīng)連續(xù)通過一個(gè)完整的生命周期）。完整的生殖發(fā)育過程細(xì)分為如下階段。A階段交配前到受孕：檢查成年雄性和雌性生殖功能，配子的發(fā)育與成熟，交配行為，受精。B階段受孕到著床：檢查成年雌性生殖功能，胚胎著床前發(fā)育、著床。C階段著床到硬腭閉合：檢查成年雌性生殖功能，胎體發(fā)育，主要器官形成。D階段硬腭閉合到妊娠結(jié)束：檢查成年雌性生殖功能、胎體的發(fā)育與生長(zhǎng)，器官的發(fā)育與生長(zhǎng)。E階段出生到斷乳：檢查成年雌性生殖功能，新生仔對(duì)宮外生活的適應(yīng)，斷乳前的發(fā)育與生長(zhǎng)。F階段斷乳到性成熟：檢查斷乳后的發(fā)育與生長(zhǎng)，對(duì)獨(dú)立生活的適應(yīng)，達(dá)到完全的性功能。二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的要點(diǎn)：（一）、動(dòng)物選擇必須以哺乳動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

原則：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)受試物的動(dòng)力學(xué)、毒效學(xué)及其他有關(guān)參數(shù)應(yīng)與人最接近，如代謝過程與生物轉(zhuǎn)化應(yīng)與人相近、胎盤結(jié)構(gòu)與人相似、健康、生育力強(qiáng)、多產(chǎn)、孕期短、自發(fā)畸形率低、價(jià)廉、易得和操作方便。

（二）、劑量設(shè)計(jì)高劑量應(yīng)該在母體中產(chǎn)生輕度的毒性；低劑量不應(yīng)有任何可歸因于受試物的有害作用；中劑量在高、低劑量之間按等比級(jí)差定位，應(yīng)引起最小的毒作用。（三）、接觸途徑與頻率

應(yīng)與人的接觸途徑相同。（四）、對(duì)照組（溶劑對(duì)照組和陽性對(duì)照組）

用與試驗(yàn)組相同的最大容量的賦形劑、陽性物化學(xué)毒物的生殖毒性評(píng)價(jià)需四方面資料：1 環(huán)境流行病學(xué)資料；2 控制下的臨床研究；3 動(dòng)物毒性試驗(yàn)；4 體外試驗(yàn)。動(dòng)物生殖毒性試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)：①容易控制暴露條件，暴露動(dòng)物數(shù)量、年齡、狀態(tài)以及選擇檢測(cè)效應(yīng)指標(biāo)（終點(diǎn)）；②動(dòng)物試驗(yàn)預(yù)測(cè)化學(xué)毒物對(duì)人類的致畸性，靈敏度較高。缺點(diǎn)：①實(shí)驗(yàn)結(jié)果外推到人有不肯定性，預(yù)測(cè)對(duì)人的致畸性特異性不夠高；②從較高劑量暴露結(jié)果外推到人（暴露較低劑量）有一定困難，人與人之間的個(gè)體差異比動(dòng)物的更大。第四節(jié)致畸試驗(yàn)

一、動(dòng)物致畸試驗(yàn)(一)、基本原理致畸試驗(yàn)是檢查受試外源化學(xué)物能否通過妊娠母體引起胚胎毒性或后代畸形的動(dòng)物試驗(yàn)。通過致畸試驗(yàn)可以確定一種受試物是否具有致畸作用。胚胎在器官形成期，可因受到化學(xué)物或放射性物質(zhì)的作用，使細(xì)胞分化、器官形成和正常發(fā)育受到阻滯，以致出現(xiàn)胎仔器官的器質(zhì)性缺陷而呈現(xiàn)畸形。(二)、基本方法(1)、動(dòng)物選擇

除參照毒性試驗(yàn)中選擇動(dòng)物的一般原則，還應(yīng)特別注意妊娠期較短而一致、產(chǎn)仔數(shù)多和胎盤結(jié)構(gòu)與人類接近且自發(fā)畸形率較低等特點(diǎn)。一般選用兩種哺乳動(dòng)物，首選為大鼠，此外可采用小鼠或家兔。大鼠對(duì)大多數(shù)外源化學(xué)物的代謝過程，基本與人類接近；二是大鼠的受孕率較高，每窩產(chǎn)仔可達(dá)8～12只，易獲得所需樣本數(shù)；三是胎仔大小適中，易觀察畸形情況。缺點(diǎn)是大鼠對(duì)外源化學(xué)物的代謝速率較快，對(duì)致畸物的易感性較低，易出現(xiàn)假陰性結(jié)果。同時(shí)，大鼠的胎盤結(jié)構(gòu)也與人類有一定差異。(2)、動(dòng)物交配處理

選擇健康性成熟的末孕產(chǎn)雌雄動(dòng)物，大鼠體重200～250g，小鼠20～25g，雌雄按1:1或2:1同籠交配。次日早晨陰道涂片檢查精子或檢查陰栓，凡發(fā)現(xiàn)檢出精子或陰栓，即確定為妊娠第0天。將查出的孕鼠按隨機(jī)分組的原則分組。動(dòng)物數(shù)量：大鼠或小鼠每組10～20只，家兔8～12只，接觸化學(xué)物方式與途徑：與人體實(shí)際接觸情況一致，一般多經(jīng)口給予，雌鼠妊娠的第7～15天染毒，常用灌胃方式。試驗(yàn)期間每2～3天稱取孕鼠體重：通過體重變化可觀察受試動(dòng)物的妊娠情況和胚胎發(fā)育情況。(3)、劑量分組

致畸試驗(yàn)中劑量分組是一個(gè)極為關(guān)鍵與復(fù)雜的問題。一般原則是一方面要求出最大無作用劑量，以及引起致畸的閾劑量，同時(shí)還要保持母體生育能力，不致母體大批流產(chǎn)和過多胚胎死亡，也應(yīng)避免較多母體死亡。一般高劑量組可選雌鼠LD50的1/5-1/3劑量，低劑量組取1/50～1/30LD50。的劑量；也可以以亞慢性毒性試驗(yàn)中的最大無作用劑量作為高劑量組，以其1/30作為低劑量組。

最好方法：預(yù)試摸劑量。

對(duì)照組：陰性對(duì)照(溶劑對(duì)照)陽性對(duì)照:維生素A(l5000IU/kg乙酰水楊酸(250mg/kg)敵枯雙五氯酚鈉等。(4)、動(dòng)物剖檢—剖腹產(chǎn)

在預(yù)期分娩前1～2d處死母鼠進(jìn)行檢查。一般大鼠在受孕后第19～20d，小鼠第18～19d。稱量并記錄母鼠最終體重。采用頸椎脫臼法或斷頭法處死動(dòng)物。從腹中線剖腹，暴露子宮和卵巢，為胎仔檢查做準(zhǔn)備。(5)、胎仔檢查切開左右兩側(cè)子宮鑒別并記錄每窩胎仔中活胎數(shù)、晚期死胎數(shù)、早期死胎數(shù)、吸收胎數(shù)及各種胎仔的特征，并記錄編號(hào)。對(duì)活胎仔要測(cè)量其體重、體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)和性別(生殖突與肛門間距離，雌胎仔約lmm，雄胎仔約2mm)。對(duì)大鼠還應(yīng)取出卵巢、記錄黃體數(shù)。黃體呈黃色，突起于卵巢表面，呈魚卵狀，可代表排卵數(shù)。然后進(jìn)行胎仔外觀畸形檢查、內(nèi)臟及軟組織畸形檢查和骨鉻畸形檢查?；螜z查只限于活產(chǎn)胎仔。內(nèi)臟檢查的胎仔需在鮑音氏(Bouin)溶液中固定2周以上，用自來水沖洗固定液后，用切片法檢查內(nèi)臟。而骨骼畸形檢查則需經(jīng)固定、透明和茜素紅染色等步驟后，才能迸行。（三）、結(jié)果判定：常用的評(píng)價(jià)指標(biāo)有:(1)平均著床數(shù)（％）＝(2)平均活胎率（％）＝(3)著床后死亡率（％）＝(4)畸胎出現(xiàn)率（％）＝(5)活胎仔平均畸形出現(xiàn)數(shù)＝(6)母體畸胎出現(xiàn)率（％）＝

經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后，若試驗(yàn)組母體畸胎出現(xiàn)率高于對(duì)照組，活胎仔畸形出現(xiàn)率顯著高于對(duì)照組，而且畸形的出現(xiàn)具有劑量-效應(yīng)關(guān)系時(shí)，才能判定外源化學(xué)物對(duì)受試動(dòng)物具有致畸作用。雌鼠LD50致畸指數(shù)＝最小致畸劑量評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：致畸指數(shù)10以下為不致畸；10～100為致畸；100以上為強(qiáng)致畸。（四）、注意事項(xiàng)：1.雌雄鼠交配后并非全部懷孕，大鼠妊娠率約70％~90％，小鼠妊娠率較大鼠低。2.不同季節(jié)，飼養(yǎng)條件不同，妊娠率亦不同。3.實(shí)驗(yàn)組懷孕率明顯低于對(duì)照組時(shí)，對(duì)于“未受孕”的結(jié)論，應(yīng)予謹(jǐn)慎考慮并查明是否因受試物有較強(qiáng)胚胎毒作用而使胚胎流產(chǎn)、早期死亡所致。二、體外致畸作用試驗(yàn)法體外全胚培養(yǎng)器官培養(yǎng)細(xì)胞胚培養(yǎng)……第五節(jié)繁殖試驗(yàn)（reproductionstudies）1、概念：通過對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁殖過程的觀察，來評(píng)價(jià)外源性化學(xué)物質(zhì)對(duì)動(dòng)物性腺功能、交配、受精能力、分娩、授乳以及后代發(fā)育等繁殖功能有無損害作用

的試驗(yàn)。2、目的：評(píng)價(jià)受試物對(duì)親代生殖和后代的發(fā)育與生殖影響一系列環(huán)節(jié)。4、觀察指標(biāo)：（1）、對(duì)親代動(dòng)物的子宮、卵巢、陰道、睪丸、精囊、前列腺作肉眼大體觀察，必要時(shí)應(yīng)作病理組織學(xué)檢查。（2）、每代的第一窩仔鼠斷乳后觀察3個(gè)月，記錄出生時(shí)和斷乳時(shí)的存活率、體重、體長(zhǎng)、尾長(zhǎng)。在喂養(yǎng)期間觀察一般健康情況、攝食量、體重、飼料效價(jià)、性成熟情況及死亡率等指標(biāo)。（3）、對(duì)每代的第二窩仔鼠主要觀察：(1)受孕率（％）＝(2)妊娠率（％）＝(3)出生活仔率（％）＝(4)出生存活率（％）＝(5)哺乳存活率

＝*娩活體幼仔的窩數(shù)：每窩只要有一個(gè)活體幼仔或以上，均應(yīng)計(jì)數(shù)。5、結(jié)果評(píng)價(jià)：將實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物各項(xiàng)觀察指標(biāo)統(tǒng)計(jì)結(jié)果與對(duì)照組動(dòng)物進(jìn)行比較，如實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物在交配、妊娠、幼仔存活、幼仔發(fā)育等方面受到影響，說明受試化學(xué)物質(zhì)對(duì)動(dòng)物生育繁殖功能有損害作用。環(huán)境流行病學(xué)研究1、研究方法：①前瞻性流行病學(xué)研究用于研究那些出現(xiàn)／上市不久的化學(xué)毒物，盡可能采用前瞻性隊(duì)列研究（prospectivecohortstudies）。②回顧性或橫斷面調(diào)查用于那些老污染物。③環(huán)境流行病學(xué)研究+分子流行病學(xué)研究。2、觀察終點(diǎn)：生殖功能、臨床化驗(yàn)（精液等）、生化（如激素）、分子生物學(xué)（如標(biāo)志物、精子DNA斷裂）、生育結(jié)局等。3、檢測(cè)方法：除了常規(guī)外，需事先預(yù)試和對(duì)工作人員培訓(xùn)與考核。無論調(diào)查取樣、資料整理、統(tǒng)計(jì)都要建立質(zhì)量控制。控制下的臨床研究1、控制下的病人臨床研究；2、選擇健康志愿者。3、研究范圍只限于對(duì)那些引起短期效應(yīng)和能較快逆轉(zhuǎn)的效應(yīng)，而不適于那些主要可能引起慢性疾病的化學(xué)毒物。1、病毒性肝炎：由病毒造成的肝炎按照其病毒系列不同分為甲、乙、丙、丁、戊和庚共六種類型病毒性肝炎。能引起肝臟細(xì)胞腫脹，是世界上流傳廣泛，危害很大的傳染病之一。1908年，才發(fā)現(xiàn)病毒也是肝炎的致病因素之一。1947年，將原來的傳染性肝炎（infectioushepatitis）稱為甲型肝炎（HepatitisA,HA）；血清性肝炎（serumhepatitis）稱為乙型肝炎（HepatitisB,HB）。1965年人類首次檢測(cè)到乙型肝炎的表面抗原。我國(guó)經(jīng)濟(jì)和科學(xué)技術(shù)日益發(fā)展，學(xué)術(shù)文化領(lǐng)域百家爭(zhēng)鳴，（df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr）特別是思想家的革新精神，為中醫(yī)學(xué)理論的創(chuàng)新和突破性進(jìn)展，提供了有利的文化背景。宋代陳無擇著《三因極一病證方論》一書，（45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）提出三因?qū)W說；并產(chǎn)生了最具盛名四大學(xué)派，劉完素倡導(dǎo)火熱論；張從正力倡“攻邪論”；李杲提出“內(nèi)傷脾胃，百病由生”的理論；朱震亨創(chuàng)造性地闡明了相火的演變規(guī)律。編輯本段明清時(shí)期（df肺25s血液f369血小板t5172紅血球gdf55m白血球fd2）是中醫(yī)學(xué)理論綜合匯編、深化發(fā)展，臨床各科辨證體系豐富、提高階段。如明代樓英的《醫(yī)學(xué)綱目》和王肯堂的《證治準(zhǔn)繩》，清代吳謙等編著的《醫(yī)宗金鑒》和陳夢(mèng)雷主編的《古今圖書集成·醫(yī)部全錄》等。王清任著《醫(yī)林改錯(cuò)》，注重實(shí)證研究，（df高血壓958心臟病983u6糖尿病87fr）糾正了古醫(yī)籍中關(guān)于解剖知識(shí)的某些錯(cuò)誤，肯定了“腦主思維”，發(fā)展了瘀血理論。溫病學(xué)說的形成和發(fā)展，標(biāo)志著中醫(yī)理論的創(chuàng)新與突破，吳有性著《溫疫論》，葉天士著《溫?zé)岵∑罚瑓蔷贤ㄖ稖夭l辨》等，在藥物學(xué)研究方面，（45傳染病q566丙肝964jo乙肝28jgsx甲肝gh）李時(shí)珍著的《本草綱目》，總結(jié)了16世紀(jì)以前我國(guó)藥物學(xué)研究的成就。醫(yī)的診察疾病能參考現(xiàn)代