液相色譜的方法開發(fā)-梯度方法

液相色譜的方法開發(fā)（二）梯度方法梯度洗脫的特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)單位時間的分離能力增加檢測靈敏度提高缺點(diǎn)儀器設(shè)備要求高不適合某些檢測方式柱需再生定量分析的重復(fù)性較低梯度的洗脫方式高壓梯度及低壓梯度梯度洗脫的可變參數(shù)A及B液的成分和化學(xué)特性梯度的陡度梯度的變化形狀梯度平衡時間的影響（二）如不用梯度：分離不理想說明流動相水中的雜質(zhì)在此條件下可能會對檢測有影響。說明流動相水中的雜質(zhì)在此條件下可能會對檢測有影響。整個色譜峰組保留時間太長，分離度也不好。梯度平衡時間的影響（一）但是9個化合物出了10個色譜峰，說明有雜質(zhì)存在，很可能是流動相水中的。但是9個化合物出了10個色譜峰，說明有雜質(zhì)存在，很可能是流動相水中的。梯度方法開發(fā)實(shí)例-第七步梯度平衡時間的影響（二）A及B液的成分和化學(xué)特性說明流動相水中的雜質(zhì)在此條件下可能會對檢測有影響。10分鐘的梯度，6分鐘的平衡時間色譜圖不重復(fù)典型的“實(shí)驗(yàn)室水”有大量的有機(jī)污染物不適合高靈敏度梯度分析為使色譜峰前移，提高起始時乙腈的比例（50-100%，水-乙腈），分離得到改善。為使色譜峰前移，提高起始時乙腈的比例（50-100%，水-乙腈），分離得到改善。梯度方法開發(fā)實(shí)例-第五步但是9個化合物出了10個色譜峰，說明有雜質(zhì)存在，很可能是流動相水中的。根據(jù)“梯度曲線下的面積越大，洗脫能力越強(qiáng)”的規(guī)律，試用#5曲線使3-9號峰提前(曲線5，50-100%B)，但是小峰仍沒有分出來。根據(jù)“梯度曲線下的面積越大，洗脫能力越強(qiáng)”的規(guī)律，試用#5曲線使3-9號峰提前(曲線5，50-100%B)，但是小峰仍沒有分出來。從空白梯度圖顯示，在同樣的色譜條件，同樣的檢測靈敏度下，共有兩個雜質(zhì)峰。梯度方法開發(fā)實(shí)例-第二步梯度平衡時間的影響（二）平衡時間從6到7分鐘，第一個峰的保留時間有明顯的變化，說明6到7分鐘的平衡時間不足，而8到9分鐘變化不大因而大于這個時間時，平衡充足。為使色譜峰前移，提高起始時乙腈的比例（50-100%，水-乙腈），分離得到改善。典型的“實(shí)驗(yàn)室水”有大量的有機(jī)污染物不適合高靈敏度梯度分析如不用梯度：分離不理想如不用梯度：分離不理想梯度平衡時間的影響（二）整個色譜峰組保留時間太長，分離度也不好。梯度方法開發(fā)實(shí)例-第二步如不用梯度：分離不理想梯度條件的優(yōu)化梯度曲線的變化∶凸線梯度平衡時間的影響（一）10分鐘的梯度，6分鐘的平衡時間色譜圖不重復(fù)梯度平衡時間的影響（二）平衡時間∶6分鐘平衡時間∶7分鐘平衡時間∶8分鐘平衡時間∶9分鐘平衡時間從6到7分鐘，第一個峰的保留時間有明顯的變化，說明6到7分鐘的平衡時間不足，而8到9分鐘變化不大因而大于這個時間時，平衡充足。有機(jī)污染物的影響（二）“三蒸水”有大量的有機(jī)污染物不適合梯度分析有機(jī)污染物的影響（三）典型的“實(shí)驗(yàn)室水”有大量的有機(jī)污染物不適合高靈敏度梯度分析梯度方法開發(fā)實(shí)例-第一步開發(fā)一個有9個烷基苯酮化合物的梯度方法，用C18柱，在最初的條件下(0-100%水-乙腈)，分離不理想。整個色譜峰組保留時間太長，分離度也不好。梯度方法開發(fā)實(shí)例-第二步為使色譜峰前移，提高起始時乙腈的比例（50-100%，水-乙腈），分離得到改善。但是9個化合物出了10個色譜峰，說明有雜質(zhì)存在，很可能是流動相水中的。梯度方法開發(fā)實(shí)例-第三步從空白梯度圖顯示，在同樣的色譜條件，同樣的檢測靈敏度下，共有兩個雜質(zhì)峰。說明流動相水中的雜質(zhì)在此條件下可能會對檢測有影響。梯度方法開發(fā)實(shí)例-第四步空白梯度圖同樣品的色譜圖進(jìn)行對照后，我們看到雜質(zhì)（共兩個峰）中的第一個小峰對第8個色譜峰有干擾，會使其定量分析結(jié)果不準(zhǔn)確。梯度方法開發(fā)實(shí)例-第五步根據(jù)“梯度曲線下的面積越大，洗脫能力