孢子發(fā)芽率的測(cè)定

QB/TXXX—20XX孢子發(fā)芽率的測(cè)定本文件規(guī)定了醬油、黃豆醬的種曲及曲精孢子發(fā)芽率的測(cè)定方法。本文件適用于醬油、黃豆醬的種曲及曲精孢子發(fā)芽率的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義3.1孢子發(fā)芽率rateofconidiagermination菌種在一定條件下（如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間等）培養(yǎng)后，所得發(fā)芽孢子數(shù)占孢子總數(shù)的比例，即為該試樣的孢子發(fā)芽率。4設(shè)備和材料4.1恒溫培養(yǎng)箱。4.2顯微鏡。4.3凹玻片、載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、接種棒、等。5培養(yǎng)基和試劑5.1查氏培養(yǎng)基：制備方法見附錄A.1。5.2無(wú)菌生理鹽水：制備方法見附錄A.2。6分析步驟6.1制備懸浮液取試樣適量入盛有25mL事先滅菌的生理鹽水和玻璃珠的錐形瓶中，充分振搖約15min，務(wù)使孢子個(gè)個(gè)分散，制成孢子懸浮液。懸浮液制備后要立刻制作標(biāo)本培養(yǎng)，時(shí)間不宜放長(zhǎng)。6.2制作標(biāo)本先在凹玻片的凹窩內(nèi)滴入無(wú)菌水4滴，再將查氏培養(yǎng)基融化并冷卻至45℃~50℃后，接入孢子懸浮液數(shù)滴。充分搖勻后，用玻璃棒以薄層涂布在蓋玻片上，然后反蓋于凹玻片的窩上，四周涂凡士林封固。放置于30℃~32℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)3h~8h。6.3鏡檢取出標(biāo)本在10×40倍鏡頭條件下觀察孢子發(fā)芽情況，逐個(gè)數(shù)出發(fā)芽孢子數(shù)（孢子邊緣有明顯芽體記為已發(fā)芽孢子數(shù)）和未發(fā)芽孢子數(shù)。在計(jì)數(shù)時(shí)每個(gè)標(biāo)本一般選取10個(gè)不同視野進(jìn)行觀察，每個(gè)視野內(nèi)有10~20個(gè)孢子為宜。每個(gè)樣品制作標(biāo)本不少于2次并鏡檢，然后取其平均值，即為該樣品的孢子發(fā)芽率。QB/TXXX—20XX7分析結(jié)果的表述試樣的孢子發(fā)芽率按式（1）計(jì)算：X=×100……（1）式中：X——孢子發(fā)芽率，%；a——發(fā)芽孢子數(shù)，個(gè)；A——發(fā)芽及不發(fā)芽孢子總數(shù)，個(gè)。結(jié)果保留整數(shù)。8精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。QB/TXXX—20XXA.1.1成分硝酸鈉3.0g磷酸氫二鉀1.0g硫酸鎂0.5g氯化鉀0.5g硫酸亞鐵0.01g蔗糖30g瓊脂15g三級(jí)水1000mLA.1.2制法上述各成分加入三級(jí)水中，加熱煮沸至完全溶解。分裝后，121℃滅菌15min。A.2.1成分氯化鈉