幾種抗菌藥對雞毒支原體bg44株的敏感性測定

幾種抗菌藥對雞毒支原體bg44株的敏感性測定

疫情及其他疾病引起了國內(nèi)外的廣泛關注。從Nelson于1935年首先從患有感冒的雞中分離到支原體至今,已從家禽體內(nèi)分離鑒定出19種支原體。這些支原體中,大多數(shù)對動物不致病,對家禽引起危害的主要有雞毒支原體(MycoplasmaGallisepticum,MG)、滑液支原體、衣阿華支原體和火雞支原體。其中雞毒支原體是禽類最主要的病原菌之一,它可以引起雞、火雞及其它禽類的慢性呼吸道病(chromicrespiratorydisease,CRD)。該病最大特點是:發(fā)病率高,病程長,康復慢。雞毒支原體病目前在我國的發(fā)生和流行呈上升趨勢,幾乎100%的雞場都有此病,雞群最高感染率可達83.4%,且經(jīng)常與其他病原菌混合感染,引起一些疫病的暴發(fā)和流行,對養(yǎng)禽業(yè)危害很大。所以對該病的防治,除使用疫苗進行預防外,藥物控制依然是治療該病的有效手段。通過試驗摸索雞毒支原體的敏感藥物及如何聯(lián)合用藥對臨床治療雞毒支原體病具有一定的指導意義。臨床上治療CRD常用大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、林可胺類和氟喹諾酮類等藥物。恩諾沙星是動物專用的氟喹諾酮類藥物,屬于一類廣譜抗菌劑,由于其優(yōu)良的抗菌活性、良好的安全性而受到世界廣泛的關注。恩諾沙星無論在試管中還是在雞體內(nèi),對雞毒支原體都有強大的抑菌作用,是治療雞毒支原體病的理想藥物。試驗選取恩諾沙星、替米考星、泰樂菌素、吉他霉素、林可霉素、沃尼妙林、泰妙菌素、氯霉素及氟苯尼考,對雞毒支原體BG44T株進行體外抑菌試驗,確定藥物的最小抑菌濃度(minimalinhibitoryconcentration,MIC),摸索其藥物敏感性并通過恩諾沙星與其他抗菌藥的聯(lián)合藥敏試驗,找到與其協(xié)同或相加的抗菌藥,為防治雞毒支原體病提供試驗依據(jù)。1材料和方法1.1k0103-阿利克氏恩諾沙星對照品,含量99.9%,批號H0081206;替米考星對照品,含量93.7%,批號K0311109;泰樂菌素標準品,每1mg相當于泰樂菌素1026單位,批號K0160911;吉他霉素標準品,每1mg相當于吉他霉素1611單位,批號K0151010;林可霉素對照品,含量84.9%,批號K0101003;延胡索酸泰妙菌素對照品,含量99.7%,批號K0340808;氯霉素對照品:含量為99.5%,批號:K0350706;氟苯尼考對照品:含量為99.3%,批號:K0301004,均由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。沃尼妙林,含量98.5%,批號100102,由浙江海正藥業(yè)股份有限公司提供。分別稱取各藥并溶于適宜溶劑中,無菌操作配制成1280μg/mL,于4℃保存?zhèn)溆谩?.2蔬菜基改良Frey氏液體培養(yǎng)基,參照現(xiàn)行《中華人民共和國獸藥典》二〇一〇年版三部上規(guī)定方法配制。1.3醫(yī)藥品監(jiān)察所提供雞毒支原體BG44T(CVCC350)株,由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供。取菌種,通過復壯并培養(yǎng),使顏色變化單位(colorchangeunit,CCU)達到10-8CCU/mL以上,于-20℃保存?zhèn)溆谩?.4不同菌株的復合培養(yǎng)采用試管二倍稀釋法進行測定。每排取無菌帶膠塞試管10支,將改良Frey氏液體培養(yǎng)基分裝于各管中,每管0.5mL,取適宜濃度藥液0.5mL加入第1管充分混合后,取0.5mL加入第2管,依此方法,進行稀釋,至最后一管。取CCU達10-8CCU/mL的菌液,用改良Frey氏液體培養(yǎng)基稀釋成10-4,于各管中加入0.5mL。同時試驗設2種對照:培養(yǎng)物對照———接種菌液,不加抗菌藥;培養(yǎng)基對照———不接種菌液,不加抗菌藥。每次試驗重復3次。所有試驗管放置于37℃溫箱中培養(yǎng),當培養(yǎng)物對照為橘黃色,對照培養(yǎng)基不發(fā)生顏色變化時,未發(fā)生顏色變化的最低藥物濃度為該藥物的MIC值。1.5聯(lián)合藥敏藥物的相互作用參照戴自英等的棋盤法進行試驗。根據(jù)已測得的MIC值,以兩藥MIC值的4倍、2倍、1倍、1/2倍、1/4倍分別聯(lián)合。聯(lián)合藥敏的相互作用以FIC指數(shù)作為判定標準。FIC=甲藥聯(lián)合時的MIC/甲藥單用時的MIC+乙藥聯(lián)合時的MIC/乙藥單用時的MIC。判定標準:FIC≤0.5為協(xié)同作用;0.5<FIC≤1為相加作用;1<FIC≤2為無關作用;FIC>2為拮抗作用。2結(jié)果2.1恩諾沙星、替米考星、泰樂菌素、吉維霉素、林可霉素、沃尼白林、泰明菌素、氯霉素和氟苯尼科對雞毒株bg44t的mic試驗測定的MIC結(jié)果表明,MGBG44T株對恩諾沙星、替米考星、泰樂菌素、吉他霉素、沃尼妙林、泰妙菌素均敏感(表1)。2.2利尼妙林、泰妙菌素聯(lián)合恩諾沙星分別與替米考星、泰樂菌素、吉他霉素、林可霉素、沃尼妙林、泰妙菌素聯(lián)合,FIC指數(shù)在0.63~1之間,顯示這6組抗菌藥物聯(lián)用對MG表現(xiàn)為相加作用;恩諾沙星與氯霉素、氟苯尼考聯(lián)用對MG表現(xiàn)為拮抗作用(表2-表3)。3討論3.1本試驗與bg49t株mic檢測數(shù)據(jù)國內(nèi)外關于用抗生素測定雞毒支原體MIC的報道比較有限。僅有曾振靈用恩諾沙星測定MGBG44T株MIC(0.025μg/mL)的報道,與本試驗所測BG44T株MIC值(0.063μg/mL)比較,兩值相差不大。曾振靈用泰樂菌素測定MGBG44T株MIC值(0.00625μg/mL)與本試驗所測定的MIC值(0.016μg/mL);李宏勝用替米考星測定MGBG44T株MIC值(<0.0156μg/mL)與本試驗所測MIC值(0.004μg/mL),由這兩組試驗數(shù)據(jù)可以看出,雖然不同試驗者所測的數(shù)據(jù)有一定差異,但依然可以說明BG44T株對泰樂菌素、替米考星均敏感,適合臨床用藥。在實際臨床用藥報道中,應用恩諾沙星、泰樂菌素、替米考星治療雞毒支原體病均獲得較高治愈率,也直接驗證了這些藥的療效。未見用吉他霉素、沃尼妙林、泰妙菌素、林可霉素、氯霉素、氟苯尼考測定MGBG44T株MIC的報道。但在對雞毒支原體其他菌株,如S6株、PG31株、F株和R株MIC測定的報道中,發(fā)現(xiàn)這些菌株均對恩諾沙星、泰樂菌素、泰妙菌素、林可霉素、替米考星、氟苯尼考敏感,而本試驗中BG44T株只對恩諾沙星、泰樂菌素、泰妙菌素、替米考星敏感,說明雞毒支原體不同菌株對某些抗生素的敏感性存在差異。3.2林可霉素的聯(lián)合作用王春華等聯(lián)合恩諾沙星與替米考星治療雞毒支原體病,顯示效果顯著。有文獻報道氟喹諾酮類和林可霉素聯(lián)用可用于治療雞支原體合并大腸桿菌感染。本試驗通過對MGBG44T株的聯(lián)合藥敏試驗,從理論上驗證了恩諾沙星+替米考星、恩諾沙星+林可霉素的聯(lián)合作用,說明可用于治療雞毒支原體病。未見恩諾沙星與其他4種藥臨床應用效果的報道,但從試驗數(shù)據(jù)顯示,因表現(xiàn)為相加作用,故為能更加有效的防治支原體與其他病原菌的混合感染,臨床上可考慮聯(lián)合應用。恩諾沙星-氯霉素聯(lián)合、恩諾沙星-氟苯尼考聯(lián)合,FIC指數(shù)均為2.5,表現(xiàn)為拮抗作用,提示在臨床應用上應避免同時使用這兩種藥,以免失去藥效。有報道指出氟喹諾酮類抗菌藥物不能與氯霉素等合用,因合用后可導致效用降低,同時會影響肝腎功能及神經(jīng)系統(tǒng)。劉瑞安也指出喹諾酮類藥物與氯霉素類聯(lián)用可能會出現(xiàn)無關或拮抗作用,所以在臨床使用中應避免此種方式聯(lián)合。但陳忠良卻提出了另一種用藥方式可避免此種聯(lián)合的拮抗作用,他指出對于先使用過氯霉素的畜禽,需過48h后再用恩諾沙星,可避免減效。3.3藥物聯(lián)用對mebg49t株體外抑菌試驗雞毒支原體是引起雞呼吸道病的主要病原微生物,感染后可造成雞肉品質(zhì)下降,雞群產(chǎn)蛋量減少,經(jīng)濟損失明顯。因雞毒支原體常與多種細菌、病毒混合造成感染,且MG不同菌株對抗生素敏感性和抗藥性存在差異,為保證藥物療效,防止和減緩耐藥菌株的形成,臨床上多采用藥物聯(lián)合或交替使用的方式。目前對雞毒支原體病的防治,雖然更多的是先進行體外抑菌試驗,根據(jù)試驗結(jié)果指導臨床用藥,但藥物聯(lián)合作用于機體