藥品替米考星的測(cè)定

藥品替米考星的測(cè)定

酚類抗菌素是一種大型環(huán)內(nèi)酯類抗菌素。國外采用已知含量（有效性）的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行內(nèi)標(biāo)，并采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。由于獲得替米考星標(biāo)準(zhǔn)品有困難,我們?cè)噲D采用1HNMR法測(cè)定替米考星的含量。采用1HNMR進(jìn)行藥物定量分析已有諸多文獻(xiàn)報(bào)道[3～5],1HNMR法已作為有些化合物定量的法定方法。在藥物分析中1HNMR主要用于有機(jī)化合物的結(jié)構(gòu)測(cè)定,它也是一種藥物定量分析的重要手段。1HNMR用于定量分析的基礎(chǔ)是化學(xué)環(huán)境不同的氫原子吸收峰面積只與所含的氫原子數(shù)目有關(guān),在不需引入任何校正因子的情況下,可直接根據(jù)共振峰的面積求出所代表的氫原子的數(shù)目,故積分值是定量分析的主要依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明1HNMR方法作為藥物定量的一種方法,具有簡(jiǎn)單準(zhǔn)確的特點(diǎn)。1實(shí)驗(yàn)部分1.1試劑及標(biāo)準(zhǔn)方法BrukerAvance300超導(dǎo)核磁共振波譜儀,QNP探頭。溶劑采用北京化工廠氘代核磁試劑CDCl3,內(nèi)標(biāo)0.1%TMS。定量內(nèi)標(biāo)為香豆素,天津天泰精細(xì)化學(xué)品公司生產(chǎn),化學(xué)純,含量用GC法(GB8798-1988)測(cè)定。替米考星樣品為大明實(shí)業(yè)有限責(zé)任公司提供。1.2掃描次數(shù)和積分測(cè)定溫度(探頭溫度),室溫25℃;環(huán)境濕度,30%。脈沖寬度,p1=8μs;脈沖延遲時(shí)間,d1=8s;掃描次數(shù),ns=32。替米考星,δ5.85,1H,二重峰,積分范圍:5.777～5.945;香豆素,δ7.72,1H,二重峰,積分范圍:7.680～7.785。精確稱量替米考星和香豆素置于5mm核磁共振樣品管內(nèi),加0.5mLCDCl3使完全溶解。測(cè)定上述配置好樣品的氫譜,分別將上述兩組峰積分。1.3內(nèi)標(biāo)和內(nèi)標(biāo)的積分面積m樣品質(zhì)量的計(jì)算公式如下:其中:AS為被測(cè)樣品選定信號(hào)的積分面積;nS為樣品被積分信號(hào)包含的質(zhì)子數(shù);MS為被測(cè)樣品的相對(duì)分子質(zhì)量;AR為內(nèi)標(biāo)選定信號(hào)的積分面積;nR為內(nèi)標(biāo)被積分信號(hào)包含的質(zhì)子數(shù);MR為內(nèi)標(biāo)的相對(duì)分子質(zhì)量;mR為稱取的內(nèi)標(biāo)質(zhì)量;wR%為內(nèi)標(biāo)的質(zhì)量百分含量;mS為樣品質(zhì)量的計(jì)算值。2結(jié)果與討論2.1樣品和溶劑的選擇2.1.1樣品的數(shù)量通常由0.1ml/l濃度的溶液組成，具體濃度取決于樣品的相對(duì)分子質(zhì)量和溶解2.1.2內(nèi)標(biāo)及內(nèi)標(biāo)加入時(shí)測(cè)試本實(shí)驗(yàn)用CDCl3作為溶劑,由于藥物一般相對(duì)分子質(zhì)量比較大,所以稱樣時(shí)有的樣品可能質(zhì)量比較大,因此要選擇對(duì)被測(cè)定樣品和內(nèi)標(biāo)溶解性都非常好的氘代試劑,防止出現(xiàn)樣品部分溶解造成誤差。2.1.3確定字段的選擇定量內(nèi)標(biāo)的1HNMR的信號(hào)峰一定要與被測(cè)樣品的信號(hào)峰完全分離,至少要保證有一組峰完全分離,以保證積分的準(zhǔn)確性。2.2試驗(yàn)條件的選擇2.2.1樣品內(nèi)標(biāo)積分面積一定要保證選擇足夠長的延遲時(shí)間d1(≥5×T1),否則對(duì)結(jié)果影響很大。一般多設(shè)置幾個(gè)實(shí)驗(yàn),每個(gè)實(shí)驗(yàn)的d1從小到大進(jìn)行采樣,然后對(duì)選擇的定量共振峰進(jìn)行積分,選擇一個(gè)相對(duì)合適的數(shù)值。本實(shí)驗(yàn)對(duì)于替米考星,我們做了延遲時(shí)間分別為2、4、6、8、10、15、20和25s的實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn),在6s之前,隨著d1的增大,樣品和內(nèi)標(biāo)積分面積也增大;在d1≥6s以后,積分面積隨d1的增加沒有明顯的變化,因此我們選擇8s。2.2.2量化共振峰的選擇一定要選擇完全分離的信號(hào)峰作為定量共振峰,否則會(huì)造成積分面積的誤差。2.2.3選擇掃描次數(shù)并選擇掃描具體數(shù)量，應(yīng)確?；鶋K的直方性和高信噪比2.3替米考星與香豆素的面積比對(duì)的線性回歸y按上述方法制備6個(gè)待測(cè)樣品,分別測(cè)定1HNMR,并記錄積分面積,結(jié)果見表1。以替米考星與香豆素的質(zhì)量比(y)對(duì)替米考星與香豆素的面積比(x)作線性回歸,回歸方程:y=0.1539x+0.0141,r=0.9985。結(jié)果表明,用1HNMR法做替米考星的定量測(cè)試,線性關(guān)系良好。2.4重復(fù)實(shí)驗(yàn)取4號(hào)樣品,同一條件下連續(xù)做6個(gè)1HNMR譜,以替米考星與香豆素的峰面積比計(jì)算檢測(cè)重復(fù)性,RSD為0.327%。2.5其他影響測(cè)試效果的因素2.5.1均勻場(chǎng)2.5.2積分中的競(jìng)爭(zhēng)2.5.3圖紙?zhí)幚?.6核磁共振信號(hào)峰的定歸用本方法做定量分析,前提是被測(cè)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)必須是已知的,核磁共振信號(hào)峰可以完全歸屬,至少選定進(jìn)行定量積分的信號(hào)歸屬是已知的,因此對(duì)于一些未知結(jié)構(gòu)的樣品本方法不適合。3通過補(bǔ)充的定量方法確定分綜上所述,本文報(bào)道的用核磁共振方法對(duì)樣品進(jìn)行定量,線性關(guān)系和重復(fù)性都較好,結(jié)果切實(shí)可信,且具有操作簡(jiǎn)單、快速準(zhǔn)確的特點(diǎn),在被測(cè)樣品沒有或難以得到對(duì)照品的情況下,可以做為一種補(bǔ)充的定量方法。盡量調(diào)節(jié)磁場(chǎng)均勻度,不好的勻場(chǎng)會(huì)造成半峰寬的加寬以及峰形