高效液相色譜法在食品中的應(yīng)用

高效液相色譜法在食品分析中的應(yīng)用化工1001李偉15簡(jiǎn)介分類食品分析中的應(yīng)用儀器推薦高效液相色譜工作原理

儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào).

流程圖

高效液相色譜儀的系統(tǒng)組成泵儲(chǔ)液器進(jìn)樣器色譜柱記錄儀檢測(cè)器試樣1.高壓：液體流經(jīng)色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對(duì)流動(dòng)相施加高壓。2.高速：一般可達(dá)1～10ml/min。3.高效：顆粒極細(xì)（一般為10mm以下）、規(guī)則均勻的固定相，傳質(zhì)阻抗小，柱效高，分離效率高。4.高靈敏度：高效液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測(cè)器，進(jìn)一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測(cè)器靈敏度可達(dá)10-11g。另外，用樣量小，一般幾個(gè)微升。5.高選擇性：6.適應(yīng)范圍寬：氣相色譜法雖具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優(yōu)點(diǎn)，但是受技術(shù)條件的限制，沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析。而高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要?dú)饣?，因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對(duì)于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子量大的有機(jī)物原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進(jìn)行分離、分析。高效液相色譜的特點(diǎn)有：反相色譜與正相色譜主要類型分配色譜法（partitionchromatography）吸附色譜法（adsorptionchromatography）離子交換色譜法（IEC）空間排阻色譜法（SEC）化學(xué)鍵合相色譜法(bondedphasechromatography；BPC)親合色譜法（affinitychromatography；AC）手性色譜法（chiralchromatography；CC）膠束色譜法（micellarchromatography；MC）電色譜法（electrochromatography；EC）糕點(diǎn)中的色素樣品的前處理稱取10.0g粉碎后，加入30mL乙醇-氨-水（7:2:1）溶液。將燒杯置于超聲波清洗器中超聲30min。將上清液倒入離心管中離心，8000r/min,15min，取上清液于100mL容量瓶中。重復(fù)提取3次，合并上清液，用乙酸調(diào)pH值至7.0，最后用水定容，搖勻，0.2um濾膜過濾。色譜條件儀器：島津高效液相色譜儀，LC-20ADXR高壓泵、二極管陣列檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-20A柱溫箱、CBM-20A系統(tǒng)控制器。色譜柱：

C18,150*4.6mm;流動(dòng)相：甲醇：0.02mol/L乙酸銨；梯度洗脫：乙酸銨0-5min,85%-15%;5-10min,60%-40%;10-15min,20%-80%;15-20min,15%-85%;流速：1.0Ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)：410nm;進(jìn)樣量：20.0uL。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：樣品前處理技術(shù)高速離心過濾、超濾選擇性沉淀萃取索氏抽提衍生化反應(yīng)樣品濃縮—旋蒸等新技術(shù)—加速溶劑萃?。ˋSE）

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高效液相色譜測(cè)定苯甲酸、山梨酸

儀器和試劑

美國(guó)Waters公司液相色譜儀、2487雙通道紫外檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器。標(biāo)準(zhǔn)品：苯甲酸（純度99.2%），去離子，甲醇為HPLC級(jí)試劑，其他試劑為分析純。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

色譜參數(shù)和條件色譜柱：WatersSymmetryShieldTMRP18(5um,3.9mm*150mm)；流動(dòng)相：甲醇+0.02mol/L乙酸銨水溶液（3:97），流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量：10uL；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm。樣品制備

取均質(zhì)后的肉及肉制品樣品2.5g，加入10mL乙醚，高速勻漿2min,將上清液轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中，重復(fù)提取一次。清夜合并于濃縮液瓶中。35℃濃縮至約5mL，加入3mL飽和NaCl溶液、5mL0.5moL/LNaOH溶液，混勻1min。靜置分層后，取水相，重復(fù)萃取一次，合并水相。滴加HCl酸化至PH≈1。加入10mL乙醚，重復(fù)萃取一次，合并乙醚，35℃濃縮，過濾。2mL甲醇+水（1:1）溶液定容，用于HPLC分析。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:三聚氰胺的檢出應(yīng)用島津

LC-10AHPLC儀器測(cè)定奶粉及奶制品中三聚氰胺的殘留量。樣品經(jīng)三氯乙酸、乙酸鉛溶液超聲提取，再用混合型陽離子交換樹脂固相萃取，洗脫劑用氮?dú)獯蹈?，溶于甲醇溶液，過

0.45μm濾膜后，上機(jī)測(cè)定。本法分析條件：色譜柱采用

c18。流動(dòng)相為

10mmol/L醋酸銨水溶液

-乙晴（50：

50）流速為

1.5mL/mL，檢測(cè)波長(zhǎng):243nm保留時(shí)間為

6.9min，空白無干擾。檢出限為

:1.0ug

HPLC對(duì)食品加工及貯藏過程產(chǎn)生毒素的分析

檢測(cè)食品中致癌物丙烯酰胺檢測(cè)器：二極管陣列色譜柱：反相高效液相色譜測(cè)定，采用C18固相流動(dòng)相：甲醇:水(體積比5∶95)檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。方法：外標(biāo)法----丙烯酰胺在0.1～10mg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，方法檢出限為10ng/g。用建立的方法分析面包、谷類、豆類、堅(jiān)果類和土豆類、油炸類食品結(jié)果顯示:(1)食品炸焦的程度越深，則丙烯酰胺含量越高。(2)食品貯藏不當(dāng)，會(huì)引起真菌生長(zhǎng)，造成食品的腐敗變質(zhì)，同時(shí)有些霉菌產(chǎn)生的霉菌毒素，具有較強(qiáng)的毒性和耐熱性。P230II型高效液相色譜儀檢測(cè)器UV230Ⅱ紫外-可見檢測(cè)器波長(zhǎng)范圍190～700nm波長(zhǎng)準(zhǔn)確度±1.0nm檢測(cè)池分析池體積光源氘燈工作站EC2006數(shù)據(jù)處理工作站價(jià)格：90000元Waters600泵100μl泵頭流量范圍0.01到20.0ml/min檢測(cè)器二極管陣列、紫外可見價(jià)格：200000左右Waters600

HPLC對(duì)食品添加劑的測(cè)定

蘇丹（Sudan）色素是一種人工合成染料，在化工生產(chǎn)中主要用于對(duì)油類、蠟和肥皂的染色。有關(guān)研究表明，蘇丹Ⅰ號(hào)（SudanⅠ）會(huì)導(dǎo)致鼠類患癌，它對(duì)人類肝細(xì)胞也顯現(xiàn)出可能致癌的特性。液相色譜法采用乙腈提取后經(jīng)凝膠滲透色譜法對(duì)樣品進(jìn)行凈化，利用反相高效液相色譜法，以乙腈－酸性水溶液為流動(dòng)相，采用梯度洗脫，以二極管陣列檢測(cè)器定性定量測(cè)定食品中的4種蘇丹色素，結(jié)果最低檢出限分別為