HPLC法測(cè)定阿司匹林中游離水楊酸含量

HPLC法測(cè)定阿司

匹林中游離水楊酸含量··戴云堅(jiān)

殷煒銘邵加安

陳鐵剛第一頁，共二十六頁。背景·阿司匹林是一非甾體類解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、抗風(fēng)濕藥物。在其生產(chǎn)過程中乙?；煌耆騼?chǔ)藏過程中水解產(chǎn)生

的水楊酸對(duì)人體有毒性.因此有必要對(duì)阿司匹林中的水楊酸進(jìn)行限量和含量的測(cè)定?！吨袊幍洹芬恢毖赜?/p>

對(duì)照品化學(xué)反應(yīng)目視比色法判斷結(jié)果，此方法當(dāng)對(duì)照

品溶液與供試品溶液顏色相近時(shí)易造成判定誤差。此

次實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)HPLC法檢查阿司匹林中的水楊酸。第二頁，共二十六頁。實(shí)驗(yàn)儀器及試藥儀器agilent高效液相色譜儀,島津LC-10A(單泵)高效液相色譜儀；量筒,移液管，容量瓶。試藥阿司匹林樣品、

水楊酸對(duì)照品、冰醋酸、無水甲醇、超純水。第三頁，共二十六頁。實(shí)驗(yàn)方法色譜條件色譜柱：C18色譜柱（4.6X150mm）；流動(dòng)相：1%冰醋酸-甲醇(50：50)(組1),甲醇：水：冰醋酸(8：4：1)(組2)；檢測(cè)波長(zhǎng)：300nm；流速：0.8ml·min-1；柱溫：室溫第四頁，共二十六頁。溶液的配制水楊酸對(duì)照品溶液：水楊酸對(duì)照品0．1g100mL量瓶取此液1.0ml100mL量瓶10μg/mol阿司匹林樣品溶液：阿司匹林對(duì)照品0.1g100mL量瓶1mg/moL組1:1%冰醋酸-甲醇(50：50)組2:

冰醋酸：甲醇（1：10）第五頁，共二十六頁。系統(tǒng)適應(yīng)性·

水楊酸及阿司匹林的高效液相分離圖譜及保留時(shí)間

的確定:分別取水楊酸對(duì)照品溶液、阿司匹林供試

品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。第六頁，共二十六頁。組1第七頁，共二十六頁。組2第八頁，共二十六頁。最低檢出限試驗(yàn)(組1)精密吸取水楊酸對(duì)照品溶液，用流動(dòng)相逐級(jí)進(jìn)行稀釋。當(dāng)記錄的色譜圖中信噪比為10：1時(shí)。確定水楊酸的定量限，信噪比為3：1時(shí)確定檢測(cè)限。噪音信號(hào)為2.1ng/ml，檢測(cè)限為6.3ng/ml。水楊酸精密度試驗(yàn)按溶液配置中的方法配置水楊酸對(duì)照品溶液，從溶液配置到進(jìn)樣，重復(fù)6次，計(jì)算水楊酸峰積分面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD≤5%）。第九頁，共二十六頁。進(jìn)樣峰面積峰面積/濃度平均（峰面積/濃度）RSD（%）1801746.880174.6880515.80.382802056.180205.613807673.380767.334804326.780432.675805846.980584.696809299.380929.93進(jìn)樣濃度（μg/ml）峰面積峰面積/濃度平均（峰面積/濃度）RSD（%）19.84352.2593435.8035.3650.8229.89352.2522635.62310.05352.8393235.12410.05352.6987635.09510.07352.6452035.2069.97352.5516435.36組１：水楊酸精密度試驗(yàn)結(jié)果表組２：水楊酸精密度試驗(yàn)結(jié)果表第十頁，共二十六頁。水楊酸的線性試驗(yàn)配制不同濃度的水楊酸溶液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液。各取20μl依次注入液相色譜儀，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為

縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸處理，得水楊酸回歸方程。組１：4、6、10

、16

、20μg/ml組２：1.5

、3

、6

、9

、15

、24

、30μg/ml第十一頁，共二十六頁。組1第十二頁，共二十六頁。組2第十三頁，共二十六頁?；厥章试囼?yàn)③加入阿司匹林50mg（組１）／100mg(組２）100ml量瓶①

0.5mL濃度為1mg/mL的水楊酸溶液/5.0ml濃度為10ug/mL的水楊酸溶液稀釋進(jìn)樣20μl計(jì)算平均回收率②

1.0mL濃度為1mg/mL的水楊酸溶液/15.0ml濃度為10ug/mL的水楊酸溶液1.5mL濃度為1mg/mL的水楊酸溶液/25.0ml濃度為10ug/mL的水楊酸溶液第十四頁，共二十六頁。組１：回收率試驗(yàn)結(jié)果組別加入阿司匹林量（mg）加入水楊酸量(mg)水楊酸理論總加入量(mg)實(shí)際所測(cè)水楊酸量(g)回收率(%)149.50.49650.713310.6570092.1251.00.9931.216381.31051107.8349.61.48951.706751.88565110.5第十五頁，共二十六頁。組２：回收率試驗(yàn)結(jié)果加入阿司匹林量(mg)樣品含水楊酸量(mg)加入水楊酸量(mg)測(cè)得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)104.70.0937070.050.154245107.33105.471.49108.20.0968390.050.155000105.56101.60.0909320.150.257745106.98104.40.0934380.150.256579105.40104.30.0933490.250.358701104.47103.50.0926330.250.353236103.09第十六頁，共二十六頁。穩(wěn)定性試驗(yàn)時(shí)間（min）0714212835峰面積119.46167.03208.82250.36305.76345.91時(shí)間（min）071421283542峰面積205196.2209214.3230418.9250668.4288797.7320371.5351414.4配制阿司匹林供試品溶液，分別在0、7、14、21、28、35

、42分鐘時(shí)依法測(cè)定。得水楊酸一組峰積分面積，觀察峰面積的變化率，得到試驗(yàn)溶液的穩(wěn)定時(shí)間范圍。組１：穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表組２：穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表第十七頁，共二十六頁。水楊酸峰面積與時(shí)間的變化率（豎軸為峰面積，橫軸為時(shí)間）組1第十八頁，共二十六頁。組2水楊酸峰面積與時(shí)間的變化率（豎軸為峰面積，橫軸為時(shí)間）第十九頁，共二十六頁。外標(biāo)法測(cè)定阿司匹林中水楊酸含量100mL量瓶精密吸取1.0mL100mL量瓶對(duì)照品溶液(10ug/ml)記錄色譜圖20μL阿司匹林0.1g100mL量瓶濾膜過濾供試品溶液(1mg/ml)20

μL記錄色譜圖組別/峰面積水楊酸平均峰面積樣品濃度（mg/ml）水楊酸含量阿司匹林樣品1阿司匹林樣品23476.53003165.103011.0090.9848.809%0.326%組1:水楊酸對(duì)照品0.1g第二十頁，共二十六頁。外標(biāo)法測(cè)定阿司匹林中水楊酸含量100mL量瓶100mL量瓶對(duì)照品溶液(3ug/ml)精密吸取3.0mL20

μL記錄色譜圖阿司匹林0.15g50mL量瓶濾膜過濾供試品溶液(3mg/ml)20

μL記錄色譜圖溶液峰面積水楊酸濃度

水楊酸含12平均值（ug/ml)

量供試品205196.2209214.3207205.32.685對(duì)照品231913.1231125.6231519.40.09%3.000組2:水楊酸對(duì)照品10mg第二十一頁，共二十六頁。１.流動(dòng)相的選擇本實(shí)驗(yàn)兩個(gè)流動(dòng)相相比較,1%冰醋酸-甲醇(50：50)(組1）理論塔板數(shù)與分離度教好，甲醇：水：冰醋酸(8：4：1)(組2)對(duì)稱性較好，但有雜峰。２.組２所用儀器沒有信噪比參數(shù)，所以沒有確定檢測(cè)限。３.從分子結(jié)構(gòu)上分析水楊酸中含有羥基和羧酸，而阿司匹林中僅含有一個(gè)羧酸且有酯的結(jié)構(gòu)，但從色譜分析中，阿司匹林的保留時(shí)間卻小于水楊酸的，就其原因可能是因?yàn)樗畻钏岬姆肿觾?nèi)間氫鍵大大減小了它的極性所致。討論第二十二頁，共二十六頁。４.在做樣品的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)阿司匹林的穩(wěn)定性都不好，特別是組1阿司匹林的水解率很大，且隨時(shí)間變化呈一定的線性關(guān)系，原因可能有以下幾方面：一是溶液配置過程太長(zhǎng)，導(dǎo)致水解發(fā)生；二是所配溶劑酸性控制不好，導(dǎo)致了阿司匹林的水解。由實(shí)驗(yàn)可知用冰醋酸：甲醇(1：10)(pH值約為2．4）做溶劑相比

1%冰醋酸-甲醇(50：50)可一定程度抑制阿司匹林水解．解決方法:一.在實(shí)驗(yàn)過程中確定阿司匹林的有效穩(wěn)定時(shí)間，在這段時(shí)間內(nèi)進(jìn)行水楊酸含量的測(cè)定。二.改用其他溶劑,像乙腈一甲酸(99:1)溶液作為本方法測(cè)定溶劑.第二十三頁，共二十六頁。５.檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇由文獻(xiàn)可知，水楊酸對(duì)照品溶液在(303±2)、(236±2)nln的波長(zhǎng)處有最大吸收，阿司匹林對(duì)照品溶液在(276±2)、(226±2)nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。分別用水楊酸的最大吸收236、302nm的波長(zhǎng)作為檢定波長(zhǎng)，做阿司匹林供試溶液的液相分離色譜，結(jié)果顯示，用236nm作為檢定波長(zhǎng)時(shí)，水楊酸響應(yīng)靈敏度高，溶劑、阿司匹林的響應(yīng)靈敏度更高，得到分離色譜響應(yīng)因素也多，所得分離色譜不理想；用

303nm作為檢定波長(zhǎng)時(shí)，水楊酸響應(yīng)靈敏度雖有所降低，但

溶劑、阿司匹林的響應(yīng)靈敏度大大降低，得到分離色譜可達(dá)到基線分離，響應(yīng)因素也少，有利于水楊酸的測(cè)定。第二十四頁，共二十六頁。謝謝！第二十五頁，共二十六頁。內(nèi)容總結(jié)HPLC法測(cè)定阿司匹林中游離水楊酸含量。阿司匹林是一非甾體類解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、抗風(fēng)濕藥物。在其生產(chǎn)過程中乙?；煌耆騼?chǔ)藏過程中水解產(chǎn)生的水楊酸對(duì)人體有毒性.因此有必要對(duì)阿司匹林中的水楊酸進(jìn)行限量和含量