穿心蓮葉活性成分研究

穿心蓮葉活性成分研究

皇室用心蓮是貴族科的一種植物。它的綽號是“burm.f.）。產(chǎn)于印度，現(xiàn)在廣泛分布于中國福建、廣東、廣東、海南、云南等地。穿心蓮為常用中藥,具有清熱解毒、涼血消腫等功效。臨床上多用于呼吸道感染、急性菌痢、腸胃炎、感冒發(fā)熱及高血壓等疾病的治療。為進一步揭示穿心蓮藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ),我們對其葉的化學(xué)成分進行了較為系統(tǒng)的研究。除分離得到含量較高的穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯以外,還從中分離得到了6個化合物,分別鑒定為:8-甲基新穿心蓮內(nèi)酯苷元(8-methylandrograpanin)(Ⅰ)、3-脫氫脫氧穿心蓮內(nèi)酯(3-dehydrodeoxyan-drographolide)(Ⅱ)、新穿心蓮內(nèi)酯苷元(andrograpanin)(Ⅲ)、8(17),13-ent-labdadien-15→16-lactone-19-oicacid(Ⅳ)、β-谷甾醇(Ⅴ)和胡蘿卜苷(Ⅵ)。本文報道化合物Ⅰ-Ⅵ。其中,化合物Ⅰ和Ⅱ為新天然產(chǎn)物,化合物Ⅳ和Ⅴ為首次從該植物中分離得到?；衔铫駸o色晶體(甲醇),mp127～129℃,ESI-MS中m/z341為[M+Na]+,結(jié)合13C和DEPT譜推導(dǎo)其分子式為C20H30O3。UV(MeOH)λmax:219nm,IR(KBr)νmax:3437(羥基),2945,1752(α、β-不飽和γ-內(nèi)酯),1640(雙鍵),1042cm-1,提示該化合物為α、β-不飽和γ-內(nèi)酯類二萜成分。1HNMR顯示3個甲基氫信號[δ:1.55,1.16,0.92(each3H,s)];一個三取代烯鍵氫信號[7.21(1H,t,J=1.5Hz)];兩個連氧亞甲基氫信號[3.59(1H,d,J=10.8),3.96(1H,d,J=10.8);4.73(2H,q,J=1.8)]。13CNMR中顯示共有20個碳信號,其中在δ:60～90之間有2個連氧碳信號(δ:70.8,64.2),δ:100～150之間有4個烯碳信號(δ:145.5,139.8,134.0,127.1),在δ:174.8有一個羰基碳信號。化合物Ⅰ的1H、13CNMR譜數(shù)據(jù)同已知化合物andrograpanin比較:發(fā)現(xiàn)大多數(shù)信號都相同,只是在化合物Ⅰ的13CNMR譜中明顯多了一個甲基碳信號δ:19.7(C-17),同時andrograpanin的環(huán)外雙鍵信號δ:149.0(C-17)和107.2(C-8)變成了化合物Ⅰ的δ:139.8(C-8)和127.1(C-9)雙鍵信號;同樣,化合物Ⅰ的1HNMR譜中多了一個甲基氫信號δ:1.55(3H,s,H-17),而環(huán)外雙鍵氫信號δ:4.61(H,s,H-17)和4.87(H,s,H-17)消失。因此,推測其環(huán)外雙鍵發(fā)生了移位。另外,在化合物Ⅰ的HMBC譜中,可觀察到δ:1.55(3H,s,H-17)甲基氫信號與δ:139.8(C-8)、127.1(C-9)以及34.3(C-7)碳信號有相關(guān)關(guān)系,δ:0.92(3H,s,H-20)甲基氫信號與δ:127.1(C-9)碳信號有相關(guān)關(guān)系,δ:2.11(1H,m,H-11)和2.25(1H,m,H-11)氫信號與δ:139.8(C-8)、127.1(C-9)碳信號有相關(guān)關(guān)系(見圖1)。根據(jù)以上信息,證實環(huán)外雙鍵確實發(fā)生了移位。結(jié)合HSQC及COSY譜,推斷化合物Ⅰ為8-甲基新穿心蓮內(nèi)酯苷元(8-methylandrograpanin),并對化合物Ⅰ的1H和13CNMR信號進行了全歸屬(見表1和表2)。化合物Ⅰ與文獻報道的5,10-labda-8,13-dien-16-oicacid,15,18-dihydroxy-,γ-lactone(8CI)一致,該化合物曾在新穿心蓮內(nèi)酯的酸水解過程中獲得,故鑒定化合物Ⅰ為8-甲基新穿心蓮內(nèi)酯苷元(8-methylandrograpanin)?；衔铫駷橐恍绿烊划a(chǎn)物?；衔铫驘o色片狀結(jié)晶(甲醇),mp140～142℃,ESI-MS中m/z355為[M+Na]+,結(jié)合13C和DEPT譜推導(dǎo)其分子式為C20H28O4。UV(MeOH)λmax:220nm;IR(KBr)νmax:3409(羥基),2950,1742(α、β-不飽和γ-內(nèi)酯),1700(羰基),1645(雙鍵),1207,1048,899(環(huán)外雙鍵)cm-1,提示該化合物為α、β-不飽和γ-內(nèi)酯類二萜成分。1HNMR顯示兩個甲基氫信號[δ:0.96,1.13(each3H,s)];一個三取代烯鍵氫信號[7.34(1H,br.s)];一個環(huán)外雙鍵氫信號[4.73(1H,br.s),4.94(1H,br.s)];兩個連氧亞甲基氫信號[3.92(1H,d,J=11.2Hz),3.31(1H,d,J=11.2Hz);4.81(2H,br.s)]。13CNMR中顯示共有20個碳信號,其中在δ:60～90之間有2個連氧碳信號(δ:72.0,65.8),δ:100～150之間有4個烯碳信號(δ:148.0,147.6,134.4,108.3),在δ:176.7有一個酯羰基碳信號,在δ:216.8有一個酮羰基碳信號?；衔铫虻?H和13CNMR同已知化合物andrograpanin比較:發(fā)現(xiàn)大多數(shù)信號都相同,只是化合物Ⅱ的13CNMR譜中在低場處明顯多了一個δ:216.0(C-3)的羰基碳信號,而在高場處少了一個δ:36.5的CH2碳信號。C-2和C-4位分別從δ:20.1和δ:40.6向低場位移至δ:36.8和δ:55.7,推測化合物Ⅱ中C-3位被氧化為酮基。在化合物Ⅱ的HMBC譜中,δ:1.13(3H,s,H-18)甲基氫信號與δ:216.0處羰基碳信號有相關(guān),δ:3.31(1H,d,J=11.2,H-19)和3.92(1H,d,J=11.2,H-19)羥甲基氫信號與δ:216.0處羰基碳信號有相關(guān)(見圖2)。根據(jù)以上信息,證實C-3位氧化為酮基。結(jié)合HSQC及COSY,推斷化合物Ⅱ為5β,9βH,10α-labda-8(20),13-dien-16-oicacid,15,18-dihydroxy-3-oxo-,γ-lactone(8Cl),并對其1H和13CNMR信號進行了全歸屬(見表1和表2)?；衔铫蚺c文獻報道的3-脫氫脫氧穿心蓮內(nèi)酯(3-dehydrodeoxyandrographolide)一致,該化合物曾在脫氧穿心蓮內(nèi)酯的氧化過程中得到,故鑒定化合物Ⅱ為3-dehydrodeoxyandrographolide?；衔铫驗橐恍绿烊划a(chǎn)物。1nmr、esi-ms和柱層析熔點用X-4型顯微熔點測定儀測定(未校正);IR用JASCOFI/IR-480PlusFourierTransform紅外光譜儀(KBr壓片)測定;NMR用BrukerDRX-400和BrukerAvence-500FT型核磁共振儀測定;ESI-MS用FinniganLCQAdvantageMAX質(zhì)譜儀測定。柱層析用硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn)品;硅膠GF254薄層預(yù)制板為煙臺化學(xué)工業(yè)研究所產(chǎn)品;所用試劑均為化學(xué)純或分析純。穿心蓮原植物采集于江西省贛州市,由安徽蕪湖高等中醫(yī)藥學(xué)校劉曉龍教授鑒定為Andrographispaniculata(Burm.f.)Nees。2穿心蓮li體浸膏的制備取穿心蓮全葉2kg,粉碎成粗粉,用10倍量的95%乙醇冷浸兩次。第1次為72h,第2次為48h,合并冷浸液,加入適量活性炭脫色,過濾,濾液減壓回收乙醇,至析出穿心蓮內(nèi)酯晶體。過濾除去晶體,濾液再濃縮得浸膏。浸膏經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析(洗脫劑為氯仿-甲醇)、SephadexLH-20柱分離純化以及HPLC反復(fù)制備,得到化合物Ⅰ(19mg)、Ⅱ(35mg)、Ⅲ(85mg)、Ⅳ(36mg)、Ⅴ(31mg)、Ⅵ(44mg)。3化合物為8.17,13-ent-16-lactwell-19-oicacid,見表8化合物Ⅰ無色針狀結(jié)晶(甲醇),mp127～129℃。UV(MeOH)λmax:219nm。IR(KBr)νmax:3437,2945,1752,1640,1042cm-1。1H和13CNMR數(shù)據(jù)見表1和表2?；衔铫驘o色片狀結(jié)晶(甲醇),mp140～142℃。UV(MeOH)λmax:220nm。IR(KBr)νmax:3409,2950,1742,1700,1445,1207,1048,899cm-1。1H和13CNMR數(shù)據(jù)見表1和表2。化合物Ⅲ無色針晶(甲醇),mp226～228℃。UV(MeOH)λmax:219nm。IR(KBr)νmax:3405,2922,1748,1700,1643,1448,1330,669cm-1。1H和13CNMR數(shù)據(jù)見表1和表2,以上數(shù)據(jù)與文獻報道的andrograpanin數(shù)據(jù)一致,推斷化合物Ⅲ為新穿心蓮內(nèi)酯苷元(andrograpanin)?；衔铫魺o色針晶(甲醇),mp116～118℃。UV(MeOH)λmax:219nm。IR(KBr)νmax:3405,2964,1746,1699,1450,1205,1054cm-1。1H和13CNMR數(shù)據(jù)見表1和表2,以上數(shù)據(jù)與文獻報道的8(17),13-ent-labdadien-15→16-lactone-19-oicacid數(shù)據(jù)一致,故鑒定化合物Ⅳ為8(17),13-ent-labdadien-15→16-