獸醫(yī)傳染病學：衣原體病

chlamydiosis概述■由衣原體所引起的傳染病,能使多種動物和禽類發(fā)病,人也易感;■以表現(xiàn)流產(chǎn)、肺炎、結(jié)膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、腦炎等多種臨診癥狀為特征。二．病原：衣原體１．分類與形態(tài)：科(Chlamydiaceae)．屬(Chlamydia&Chlamydophila)。具有完整的細胞壁，無胞壁酸。細胞壁成份主要是蛋白質(zhì)(70%)和類脂質(zhì)(5.1%)，其余部分主要是碳水化合物類。細小，呈球狀，革蘭氏染色陰性，用姬姆薩氏染色，著色良好。2.培養(yǎng)：是一種專性細胞內(nèi)寄生的微生物群；

（１）6～8日齡雞胚卵黃囊中，36～37℃孵育5～6

d，雞胚死亡?？梢姷铰腰S膜充血，易剝離，絨毛尿囊膜水腫，部分胚體有小出血點。卵黃囊膜涂片有多量的衣原體原體。有時可在細胞漿中見到包涵體。將衣原體感染的雞胚卵黃囊保存于-70℃環(huán)境下，衣原體至少可存活10年以上。分離培養(yǎng)

（２）細胞。能在雞胚和McCoy細胞、鼠L細胞、Hela細胞、Vero細胞、BHK21細胞、BGM細胞、Chang氏人肝細胞內(nèi)生長繁殖。

（３）實驗動物：多用小鼠，次為豚鼠．鴿（腹腔內(nèi)腦內(nèi)接種）將衣原體接種hlamydiaceaeChlamydia

chlamydophila

C.trachomatisC.suisC.muridarumC.psittaciC.abortusC.felisC.caviaeC.pneumoniae

C.pecorum牛羊3．生活史：元體(感染相)又稱原生小體或原體，存在于細胞外，形體較小，呈球形，直徑0.2～0.4μm，原生小體具有傳染性。原生小體姬姆薩氏染色呈紫色，馬基維羅氏染色呈紅色；網(wǎng)狀體，又稱始體、初體或網(wǎng)體，呈圓形或不規(guī)則形，結(jié)構(gòu)疏松，直徑0.7～1.5μm，姬姆薩氏染色和馬基維羅氏染色均呈藍色，始體是繁殖型，無傳染性。

原體進入細胞漿后，發(fā)育成較大的外膜明顯的中間體，然后再增大變成始體。始體通過二分裂方式反復分裂，在宿主細胞漿內(nèi)形成包涵體，繼續(xù)分裂變成大量新的原體。原體發(fā)育成熟，導致宿主細胞破裂，新的原體從細胞漿內(nèi)釋放出來，再感染其他細胞。抗原衣原體含有屬、種和型3種特異性抗原，衣原體屬特異抗原（耐熱）決定簇位于脂多糖(LPS)上，

而種、亞種和血清型特異的抗原（不耐熱）決定簇則位于主要外膜蛋白(MOMP)上。

主要外膜蛋白(MOMP)，它可刺激機體產(chǎn)生中和性抗體和T細胞介導的免疫反應(yīng)，從而能夠?qū)挂略w感染，在衣原體保護性4．抵抗力：■在70%酒精、2%來蘇水、2%氫氧化鈉、1%鹽酸、3%過氧化氫及硝酸溶液中數(shù)分鐘內(nèi)可失去感染力。

0.5%石炭酸、0.1%福爾馬林于24

h內(nèi)可將其殺死。

56℃5

min，37℃48

h滅活。在外界干燥的條件下可存活5周。在室溫和日光下最多能存活6d，紫外線對衣原體有很強的殺滅作用。在水中可存活17d。對熱較敏感，常用消毒劑均能迅速將其滅活，對青霉素、四環(huán)素、紅霉素等抗生素敏感，對鏈霉素有抵抗力。三．流行病學：１.傳染源：病畜禽和帶菌者是主要的傳染源;

患病動物可由糞便、尿、乳汁以及流產(chǎn)的胎兒、胎衣和羊水排出病原菌，污染水源和飼料等，經(jīng)消化道感染，亦可經(jīng)呼吸道或眼結(jié)膜感染?；疾游锱c健康畜交配或用病公畜的精液人工受精可發(fā)生感染，或子宮內(nèi)感染。臨床感染康復后，許多動物可成長期帶菌，排菌。一些外表健康的牛也有很高的糞便帶菌率。健康動物和人陽性率:北京鴨47.1％；鴨場職工79.1％，日本牛40~50％。三．流行病學：２．傳播途徑：患病動物可由糞便、尿、乳汁以及流產(chǎn)的胎兒、胎衣和羊水排出病原菌，污染水源和飼料等，經(jīng)消化道感染，亦可經(jīng)呼吸道或眼結(jié)膜感染?；疾游锱c健康畜交配或用病公畜的精液人工受精可發(fā)生感染，子宮內(nèi)感染也有可能。各種家畜、家禽均易感，以羊、牛、鸚鵡、鴿子較多見。因動物種類不一，表現(xiàn)形式多樣。牛腦脊髓炎時多為散發(fā)。

懷孕牛、羊流產(chǎn)常呈地方流行性，羔羊發(fā)生結(jié)膜炎或關(guān)節(jié)炎時多呈流行性。

羔羊關(guān)節(jié)炎和結(jié)膜炎常見于夏秋。犢牛肺腸炎病例多發(fā)生在冬季。３．易感動物：發(fā)機機理

衣原體一般經(jīng)口或呼吸道侵入易感宿主，直接經(jīng)菌血癥階段再定位于多種不同的組織和器官。

受感染的動物在臨床上是保持隱性還是引起疾病，主要取決于病原體的毒力、感染量、宿主的年齡和抵抗力。衣原體在動物體內(nèi)的潛伏感染，在應(yīng)激或宿主抵抗力下降時，則可以活化而大量增殖，經(jīng)菌血癥階段再定位于不同的組織或器官。

腸道潛伏的衣原體可長期隨糞便排出，造成病原擴散，衣原體可在胃腸道上皮細胞內(nèi)繁殖，發(fā)生衣原體性支氣管肺炎的仔豬可同時患胃腸炎。四、癥狀與病變１、流產(chǎn)型：又稱為地方流行性流產(chǎn)。

羊、牛、豬等可表現(xiàn)發(fā)熱、流產(chǎn)，死產(chǎn)或產(chǎn)弱仔，一般流產(chǎn)發(fā)生于懷孕后期，流產(chǎn)率從20%～90%不等。分娩后胎衣滯留，有的繼發(fā)感染細菌性子宮內(nèi)膜炎而死亡。病畜體溫升高1～2℃。年青公牛常發(fā)生精囊炎，其特征是精囊、睪丸呈慢性發(fā)炎，發(fā)病率可達10%；公豬發(fā)生睪丸炎、副睪炎、陰莖炎、尿道炎；

綿羊可發(fā)生結(jié)膜炎，眼結(jié)膜充血、水腫，呈現(xiàn)混濁、潰瘍和穿孔。這是由于衣原體侵入羊眼，在結(jié)膜上皮細胞的胞質(zhì)空泡內(nèi)形成初體和原生小體引起。１、流產(chǎn)型：

病變：胎衣水腫，絨毛葉壞死，流產(chǎn)胎兒皮膚上有淤血斑，皮下和臟器（肝脾）均有不同程度的水腫，腹腔積液。心內(nèi)膜有出血點。肝臟表面有密集的灰黃色小結(jié)節(jié)狀病灶。

組織學檢查發(fā)現(xiàn)胎兒肝、肺、腎、心和骨骼肌有彌漫性和局灶性網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞增生變化。２、肺腸炎型：主要見于６月齡以下犢牛，也見于仔豬、羔羊。

癥狀：發(fā)熱，咳嗽，鼻流漿液黏液性分泌物，流淚，咳嗽及支氣管肺炎，有時出現(xiàn)胸膜炎或心包炎；下痢；病變：肺膨脹不全，灰紅色病灶，或有纖維素肺炎或胸膜炎；肝與大腸、小腸及腹膜發(fā)生纖維素性粘連；幼畜常表現(xiàn)為卡他性胃腸炎，腸系膜和淋巴結(jié)腫脹充血；３.多發(fā)性關(guān)節(jié)炎型：

主要發(fā)生于羔羊和犢牛，表現(xiàn)為發(fā)熱41℃，食欲喪失，四肢跛行，關(guān)節(jié)腫大，疼痛并跛行；弓背而立，兩眼常有濾泡性結(jié)膜炎；

病變：關(guān)節(jié)漿液性發(fā)炎，關(guān)節(jié)周圍（纖維層一直到鄰近肌肉）充血水腫．關(guān)節(jié)和腱鞘中有大量琥珀色液體，雜有灰黃色絮片。

4.結(jié)膜炎型：主要發(fā)生于綿羊，開始于一眼或兩眼大量流淚，結(jié)膜充血水腫，角膜混濁，潰瘍，穿孔?！?.腦脊髓炎型（伯斯病，Bussdisease)

１歲以下的犢牛最易感，突然發(fā)熱，有呼吸系統(tǒng)．消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的癥狀。

體溫升高，流涕，流涎，咳嗽明顯。呼吸困難，下痢。運動障礙，行走搖擺，轉(zhuǎn)圈運動，角弓反張，四肢麻痹，幼畜感染常歸于死亡。病變：脾淋腫大，纖維素性胸膜炎、腹膜炎和心包炎；

組織學變化：腦膜和中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管充血，軟腦膜炎，血管周圍炎。腦和脊髓的神經(jīng)元變性，壞死，并有淋巴細胞或膠質(zhì)細胞浸潤。6．鸚鵡熱（鳥疫）

多為隱性感染，鸚鵡、鴿、鴨、火雞及觀賞鳥等可呈顯性感染。表現(xiàn)精神沉郁，食欲減退或停食，呆立，眼眵，流涕、下痢;

病變：脾腫大(只限于鸚鵡)，肝腫大，有壞死灶。氣囊發(fā)炎，呈現(xiàn)云霧樣混濁或有干酪樣滲出物。常有纖維素性心包炎。有些病例肌胃、腺胃出血。雞還可見有輸卵管炎、腹膜炎，卵巢充血，輸卵管出血。五．Diagnosis

１、病料的采?。簭挠胁∽兓蛴邪Y狀的系統(tǒng)組織采取如血液、病變臟器、流產(chǎn)胎兒及各種分泌物。

２、分離培養(yǎng):污染嚴重的材料可先將病料經(jīng)腹腔(較常用)、腦內(nèi)或鼻內(nèi)接種3～4日齡小鼠。死亡或衰弱的于７~10天內(nèi)撲殺，可見脾臟腫大，纖維素性肺炎，腹膜炎。鏡檢時可取腹腔滲出物和脾臟作涂片。腦內(nèi)和鼻內(nèi)接種小鼠可制成腦膜、肺臟印片。也可將樣品懸液0.2～0.5

mL接種于6～7日齡雞胚卵黃囊內(nèi)，在39℃孵育。接種后3～10d內(nèi)死亡的雞胚卵黃囊血管充血。取雞胚卵黃囊膜涂片，作姬姆薩染色，若鏡檢發(fā)現(xiàn)有大量衣原體原生小體則可確定。2.分離培養(yǎng)

細胞:McCoy和L929細胞，其他傳代細胞如BHK21、

LF、Vero等傳代細胞均可供選用。將病料懸液0.5～1.0

mL

接種于細胞，2～7

d后取出感染細胞蓋玻片，用熒光標記的抗體、酶結(jié)合的單克隆抗體、碘或姬姆薩氏染色，胞漿中若出現(xiàn)特征性的包涵體，即可考慮存在衣原體。本法敏感性為

80%～90%，特異性為

100%。需時一周。3.血清學方法（1）CFT是一種特異性強的經(jīng)典血清學方法，被廣泛地應(yīng)用于衣原體定性診斷及抗

原研究上。此法要求抗原及血清必須是特異性的，補體血清必須來源于無衣原體

感染動物。畜禽感染后７－１０天出現(xiàn)補反抗體，以１：16以上為陽性，１：８可低于１：4為陰性；改良CFT，即向補體中加入50mL/L新鮮的正常血清，如雞血清，可用于檢測來自不能正常與補體結(jié)合的抗體的血清，以提高其敏感性。國外已經(jīng)有微量CFT檢測火雞及野禽血清中的衣原體抗體。3.血清學方法

（2）間接血凝試驗(IHA)；HA是用純的衣原體致敏綿羊紅細胞后，用于動物血清中衣原體抗體檢測，此法簡單快捷，敏感性較高。國

內(nèi)外都已廣泛使用。

（3）免疫熒光試驗(IFT)改良衣原體熒光檢測法,即將標本涂于載玻片上,然后甲醇固定

10min后將熒光抗體染液滴于標本上,置37℃濕盒中

30min后沖洗、晾干,鏡檢。改良后用過氧化氫的氧化作用加速抗原抗體反應(yīng),縮短了試驗過程。（4）酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)

此法是用來檢測臨床標本中衣原體抗原的一種有效方法。所用抗體多為衣原體屬脂多糖單克隆或多克隆抗體，特異性強。本法具有簡便快速的特點，適用于大量標本的檢測，但與細菌有交叉反應(yīng)，可出現(xiàn)假陽性。另外，敏感性受標本中衣原體的數(shù)量影響。5.種的鑒定（1）碘技術(shù)及藥敏試驗（沙眼衣原體）

發(fā)育的包涵體內(nèi)糖原顯著增加，這是沙眼衣原體所特有的，因此可利用碘技術(shù)即碘與糖原結(jié)合被染成暗金黃色到棕紅色進行診斷，但此法敏感性不高。

沙眼衣原體的另一特性是其所有菌株都能被磺胺嘧啶鈉所抑制，因此藥敏試驗可用此藥物對其鑒定。這兩種方法為鑒別沙眼衣原體種提供了可靠的資料。（2）PCR■國內(nèi)外學者已成功應(yīng)用衣原體的主要外膜蛋白基因(MOMP、ompA、ompB)、熱休克蛋白、脂多糖為靶基因序列，通過運用

PCR與DNA雜交技術(shù)及Real-Time

PCR等技術(shù)實現(xiàn)衣原體的檢測。■苗振川等利用衣原體的外膜主蛋白(MOMP)合成引物，以衣原體基因

組為模板擴增出特異性片斷以檢測羊流產(chǎn)衣原體，有很好的特異性及敏感性。邱昌慶等通過PCR技術(shù)檢測了鸚鵡熱衣原體外膜主蛋白編碼基因序列在不同菌株之間的差異?！鰢庥腥私⒘他W鵡熱種特異性(species-specific)PCR，用于檢測衣原體的MOMP基因區(qū)的靶序列。(3)單克隆抗體技術(shù)(MAbs)

用禽源分離株血清型特異性單克隆抗體可鑒定鸚鵡熱衣原體，國外已經(jīng)研制出抗6種血清型的鸚鵡熱衣原體單克隆抗體，用于新分離株的血清分型研究。

謝琴等利用單克隆抗體、ELISA技術(shù)研制的雙抗夾心酶標法，檢測豬流產(chǎn)胎兒衣原體，靈敏度及檢出率高，特異性好，有助于衣原體病的早期診斷和流行病學調(diào)查。七．防治：

預防：加強管理和消除各種應(yīng)激因素，發(fā)生時對病畜禽隔離與消毒。常用的消毒液有5%的來蘇爾溶液、3%的氫氧化鈉溶液、10%的漂白粉溶液等?！鰧奈窗l(fā)生過衣原體病的健康畜禽群，每年春秋季用衣原體間接血凝試驗各進行一次檢測。監(jiān)測比例：種用畜禽群100%監(jiān)測；其他畜禽群10%抽樣監(jiān)測。對衣原體陽性和疑似病例應(yīng)及時淘汰和隔離處理，逐步進行凈化。治療

對四環(huán)素族抗生素、紅霉素及螺旋霉素敏感，故四環(huán)素、金霉素(CTC)可混于飼料中以預防衣原體病。乙酰螺旋霉素、卡巴霉素、強力霉素、明氟奎諾龍(fluoro

quinolone)用于治療，效果較好，可預防及防止繼發(fā)感染。也有報道用車

前草、旱蓮草等中草藥與四環(huán)素等抗生素的中西醫(yī)結(jié)合療法，有較好療效。 對慶大霉素、卡那霉素、新霉素、鏈霉素和磺胺嘧啶鈉不敏感。疫苗

目前已經(jīng)研制出用于綿羊、山羊、牛、豬和貓的不同衣原體疫苗，尤其在羊的流產(chǎn)衣原體疫苗上研究較多，如用卵黃囊、胎膜制成福爾馬林懸液苗及佐劑苗。對禽類衣原體尚未研制出商品化疫苗。

20世紀70年代,通過對羊的鸚鵡熱衣原體性流產(chǎn)進行流行病學調(diào)查、病原特性研