制烏頭炮制前后類和二苯乙烯苷含量變化

制烏頭炮制前后類和二苯乙烯苷含量變化

烏爾是蓼科植物的一個有效成分。它的有效成分是：一類可以促進腸道蠕動，抑制甘油（tg）和膽固醇對腸道的吸收，從而降低血脂。另一個有效成分是二苯乙烯胺鈉，它具有減少膽固醇的功能。何首烏炮制前后用法各異,作用亦不同,探明其在炮制前后主要成分的變化是很有必要的。本文采用紫外分光光度法測定了何首烏炮制前后蒽醌類和二苯乙烯苷的含量。1藥品、化學(xué)品測定JASCOV-560分光光度計,JASCO日本分光株式會社產(chǎn)品;電熱恒溫水浴鍋,江蘇省醫(yī)療器械廠產(chǎn)品;AEL-160電子讀數(shù)天平,日本島津公司產(chǎn)品;TG328A電光分析天平,上海天平儀器廠產(chǎn)品。對照品大黃素(含量為99.5%),購自大連市藥品檢定所,批號020315;二苯乙烯苷對照品(含量為99.6%),由中國藥品生物制品檢定所提供,批號020803;何首烏,購自安徽亳州藥材公司,經(jīng)鑒定為蓼科植物何首烏之塊根;制何首烏按《中國藥典》(2000版一部)由本室炮制。所用試劑均為分析純:醋酸鎂[Mg(Ac)2],沈陽試劑一廠產(chǎn)品,批號020805;氯仿(CH3Cl),天津市天河化學(xué)試劑廠產(chǎn)品,批號020217;甲醇(CH3OH),公主嶺市化學(xué)試劑廠產(chǎn)品,批號020216。2方法和結(jié)果2.1大黃素溶液配制精密稱取對照品大黃素2.0mg于10mL量瓶中,用甲醇溶解、稀釋并定容至刻度,即得大黃素溶液,備用。精密稱取對照品二苯乙烯苷2.5mg于10mL量瓶,用于95%的乙醇溶解、稀釋并定容至刻度,即得二苯乙烯苷對照品溶液,備用。2.2吸收光譜法的繪制2.2.1紫外分光光度法精密量取大黃素0.5mg于10mL量瓶中。用0.5%Mg(Ac)2溶液顯色,并加0.5%Mg(Ac)2至刻度,在紫外分光光度計上,以0.5%Mg(Ac)2為空白對照,在波長400~700范圍內(nèi)掃描,得吸收圖譜。大黃素經(jīng)0.5%Mg(Ac)2顯色后,其在510nm處有一最大吸收峰,可用于含量測定。2.2.2c.c.乙醇為空白對照圖精密量取二苯乙烯苷對照品0.3mg于10mL量瓶中,95%乙醇稀釋并加至刻度,以95%乙醇為空白對照,在200~400nm處掃描,得吸收圖譜。二苯乙烯苷的乙醇溶液在波長310nm處有最大吸收峰。2.3標準曲線的繪制2.3.1大黃素吸收度計算精密吸取大黃素對照品溶液0.1,0.4,0.6,0.8,1.0mL于10mL量瓶中,用0.5%Mg(Ac)2顯色并稀釋至刻度,在510nm處以0.5%Mg(Ac)2為空白,依次測其吸收度。以吸收度為縱坐標,大黃素濃度為橫坐標,經(jīng)回歸得回歸方程:Y=29.70×10-3X+7.95×10-3,r=0.9993(n=6)。結(jié)果表明,大黃素濃度在2.1~21.0mg/L范圍內(nèi),與吸收度呈良好的線性關(guān)系。2.3.2吸收度的測定精密吸取二苯乙烯苷對照溶液50,100,200,300,400μL分別于10mL量瓶中,95%乙醇為空白,依次測定其吸收度。以吸收度為縱坐標,濃度為橫坐標,經(jīng)回歸得回歸方程:Y=73.00X+0.0420,r=0.9992(n=5)。結(jié)果表明,二苯乙烯苷濃度在1.25~10.0mg/L范圍內(nèi),與吸收度呈良好的線性關(guān)系。2.4日內(nèi)在7d,評論員7.分別取同一大黃素和二苯乙烯苷對照品溶液,重復(fù)進樣,測定日內(nèi)、日間精密度。結(jié)果:大黃素日內(nèi)RSD為0.95%(n=4),日間RSD為1.92%(n=4);二苯乙烯苷日內(nèi)RSD為0.75%(n=4),日間RSD為2.3(n=4)。2.5加標回收率測定分別精密量取大黃素和二苯乙烯苷對照品儲備液0.3,0.5,0.9mL和75,250,400μL各5份,分別用0.5%Mg(Ac)2和95%乙醇稀釋至10mL,按上述方法測定其濃度,計算回收率,結(jié)果見表1。2.6游離ac2提取法精密稱取生何首烏、制何首烏各0.5g于索氏提取皿中,加入氯仿150mL,提取4h,至氯仿回滴液無色,游離蒽醌提盡,過濾,揮干氯仿,以0.5%Mg(Ac)2溶解并轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中,反復(fù)操作3次。并加0.5%Mg(Ac)2至刻度。在510nm處,以0.5%Mg(Ac)2為空白,測定吸收度,數(shù)據(jù)代入回歸方程求得游離蒽醌的含量。上述過濾后殘渣,加95%乙醇200mL,水浴回流4h,使二苯乙烯苷及結(jié)合蒽醌提取安全,過濾,回收部分乙醇,定容于50mL量瓶中(A)。取2mL置于20mL量瓶中,以95%乙醇定容。在310nm處,以95%乙醇為空白,測其吸收度,求得二苯乙烯苷的含量,結(jié)果見表2。3結(jié)合型衍生物的含量現(xiàn)代藥理研究已證實,制何首烏具有增強免疫、改善記憶障礙及抗衰老等作用,而生何首烏有一定的毒性,長時間服用可引起動物消瘦、倦怠、動作遲緩和死亡。通過實驗比較,制何首烏中游離蒽醌的含量高于生何首烏中游離蒽醌的含量,而生何首烏中結(jié)合蒽醌的含量則明顯高于制何首烏,提示生何首烏中有瀉下作用的結(jié)合型蒽醌衍生物炮制后水解成無瀉下作用的游離蒽醌衍生物,而后者具有滋補作用;生何首烏中二苯乙烯苷的含量略高于制何首