刺五加對(duì)抑郁癥大鼠行為學(xué)的影響

刺五加對(duì)抑郁癥大鼠行為學(xué)的影響

抑郁是最常見的精神障礙，主要表現(xiàn)為抑郁、精神障礙和運(yùn)動(dòng)緩慢、自發(fā)和自我控制和自殺。慢性休克可以誘導(dǎo)抑郁。臨床資料顯示刺五加在抑郁癥治療中有一定作用,但其對(duì)各種抑郁癥狀的作用效果尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過觀察刺五加對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳運(yùn)動(dòng)時(shí)間及慢性溫和性不可預(yù)知應(yīng)激(chronicunpredictablemildstress,CUMS)結(jié)合孤養(yǎng)的抑郁模型大鼠糖水偏愛度、體重增長和行為學(xué)的影響,進(jìn)一步探討刺五加的作用效果,并與鹽酸氯丙咪嗪和兩藥聯(lián)用的抗抑郁作用效果進(jìn)行比較,為臨床針對(duì)不同癥狀選擇用藥提供一定的理論依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1動(dòng)物健康SD雄性大鼠(清潔級(jí))90只,體重200～230g,購于浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1.1.2懸濁液的溶解刺五加浸膏(黑龍江新醫(yī)圣制藥有限責(zé)任公司,國藥準(zhǔn)字Z23020376),用水溶解為濃度125mg/ml的懸濁液;鹽酸氯丙咪嗪(上海信誼九福藥業(yè)有限公司,批號(hào)070601),粉碎后用水溶解為濃度7.5mg/ml的懸濁液。1.2方法1.2.1刺五加浸膏多次給藥對(duì)大鼠的安全性評(píng)價(jià)參照文獻(xiàn)方法,將36只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC)、空白對(duì)照組(BC)和刺五加浸膏灌服組I、II、III、IV組(GI、II、III、IV組),每組6只,NC組不給藥,BC組灌服生理鹽水,GI、II、III、IV灌服刺五加浸膏的劑量依次為100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg和600mg/kg,連續(xù)9d,于灌服的第1、3、5、7、9天將大鼠放入高60cm,直徑35cm,水深30cm的量筒,觀察其5min內(nèi)水面累計(jì)不動(dòng)時(shí)間。1.2.2應(yīng)激刺激試驗(yàn)(1)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后進(jìn)行Open-Field測(cè)試,剔除水平運(yùn)動(dòng)次數(shù)加垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)不足40次或超過120次的大鼠,將48只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC)、空白對(duì)照組(BC)、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(EC)、刺五加浸膏組(AS)、鹽酸氯丙咪嗪組(CH)及刺五加浸膏+鹽酸氯丙咪嗪組(A+C),每組8只。(2)采用CUMS結(jié)合孤養(yǎng)方法造模,參照文獻(xiàn)并略加改進(jìn)。NC組大鼠在安靜、室溫20～22℃、自然光照、自由進(jìn)食和進(jìn)水的條件下每籠4只飼養(yǎng),不予任何刺激。其余各組每籠1只飼養(yǎng),接受以下各種不同的應(yīng)激刺激:強(qiáng)迫游泳(12℃,5min)、夾尾(1min)、禁水(24h)、禁食(24h)、鼠籠傾斜45°(24h)、溫箱(45℃,5min)、搖晃(3Hz/s,15min),7d為一組,順序隨機(jī),每天1種,連續(xù)21d。(3)除NC和BC組不灌服任何物質(zhì)外,從造模的第8天開始,于每次應(yīng)激刺激前30min,EC組灌服生理鹽水(1ml/只),AS組灌服刺五加浸膏(600mg/kg),CH組灌服鹽酸氯丙咪嗪(20mg/kg),A+C組灌服刺五加浸膏+鹽酸氯丙咪嗪(600mg/kg+20mg/kg),連續(xù)28d。(4)訓(xùn)練大鼠適應(yīng)含糖飲水,禁食禁水24h后采用雙瓶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行蔗糖水測(cè)試。分別于造模前、應(yīng)激刺激結(jié)束后及給藥完成后,測(cè)試2h大鼠液體消耗,計(jì)算糖水偏愛度(糖水偏愛度=糖水消耗/總液體消耗×100%)。(5)采用不透明,周壁、底面為黑色材料制成的敞箱裝置(底面邊長100cm用白線劃分為面積相等的25塊,高40cm)。每隔7d,于上午8∶30～12∶00之間,將大鼠置于中心方格內(nèi),觀察其5min內(nèi)中央格停留時(shí)間、后肢直立次數(shù)(兩前爪騰空或攀附板壁)、穿越格數(shù)(四爪均進(jìn)入方格)、清潔運(yùn)動(dòng)次數(shù),結(jié)束后測(cè)定體重。1.3t檢驗(yàn)所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,配對(duì)t檢驗(yàn),由SPSS11.5系統(tǒng)完成,Origin7.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)作圖。2結(jié)果2.1兩組小鼠血清內(nèi)時(shí)間的比較除GI組外,其他各組大鼠灌服刺五加5d后5min內(nèi)水面停留不動(dòng)時(shí)間與NC組相比都有不同程度的減少。與NC組相比,GIV組于第5天開始即顯著減少(P<0.05),GII、III兩組從第7天開始顯著減少(P<0.05),BC組沒有顯著差異(圖1)。2.2兩組as組和b組的血壓比較各組大鼠在造模前兩天糖水偏愛度均沒有顯著差異(P>0.05);與NC組相比,BC組和EC組在第21天和第35天明顯降低(P<0.01);AS組、CH組和A+C組在第21天偏低(P<0.05),在第35天恢復(fù)(P>0.05,表1)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.3刺五加對(duì)抑郁大鼠的手術(shù)影響2.3.1高水平差異檢驗(yàn)與NC組相比,各組在第8天即延長并存在顯著差異(P<0.05),BC組第22天達(dá)最大后維持高水平,AS組第15天達(dá)最大后逐漸縮短但仍存在顯著差異(P<0.05),CH組和A+C組第15天達(dá)最大后逐漸縮短,A+C組在第28和36天沒有顯著差異(P>0.05),CH組在第36天沒有顯著差異(P>0.05,圖2A)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.3.2as組和a+c組第32天達(dá)最小后維持水平與NC組相比,各組在第8天即減少并存在顯著差異(P<0.05),BC組第22天達(dá)最小后維持低水平,AS組第15天達(dá)最小后逐漸增加至第36天恢復(fù)(P>0.05),CH組和A+C組在第8天后逐漸增加至第36天恢復(fù)(P>0.05,圖2B)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.3.3as組和a+c組的平均變化及差異與NC組相比,各組在第8天即減少并存在顯著差異(P<0.05),BC組第22天達(dá)最小后維持低水平,AS組第22天達(dá)最小后逐漸增加至第36天仍存在顯著差異(P<0.05),CH組和A+C組在第8天后即開始增加,至第36天,A+C組恢復(fù)(P>0.05),CH組仍未完全恢復(fù)(P<0.05,圖2C)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.3.4組as組和a+c組的后完全恢復(fù)與NC組相比,各組在第8天開始即減少并存在顯著差異(P<0.05),BC組第15天達(dá)最小后維持低水平,AS組第15天達(dá)最小后逐漸增加至第28天和第36天恢復(fù)(P>0.05),CH組和A+C組第15天達(dá)最小后逐漸增加,至第36天,A+C組恢復(fù)(P>0.05),CH組仍未完全恢復(fù)(P<0.05,圖2D)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。2.4各組第二周和第二周衰減周對(duì)比各組大鼠在第一周沒有顯著差異(P>0.05);與NC組相比,BC組第二周開始明顯減慢并始終存在顯著差異(P<0.05),AS組、CH組和A+C組第二周減慢并存在顯著差異(P<0.05),其他各周無顯著差異(P>0.05,圖2E)。EC組與BC組相比沒有顯著差異(P>0.05)。3對(duì)抑郁癥患者行為特征的影響強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)屬行為絕望模型,常用于抗抑郁劑的快速篩選。本實(shí)驗(yàn)中我們首先應(yīng)用了該模型,對(duì)刺五加作為抗抑郁藥物進(jìn)行初步篩選。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,經(jīng)過連續(xù)9d的強(qiáng)迫游泳,NC組和BC組大鼠5min內(nèi)水面停留不動(dòng)時(shí)間明顯延長,灌服200mg/kg、400mg/kg和600mg/kg刺五加浸膏組動(dòng)物則明顯縮短,以600mg/kg起效最快。由Willner等首先提出的CUMS模型是抗抑郁藥物的篩選和抑郁癥病理生理研究較為理想的模型之一。本實(shí)驗(yàn)中我們采用CUMS+孤養(yǎng)方式建立了抑郁模型,采用雙瓶實(shí)驗(yàn)測(cè)量液體消耗,曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)測(cè)試行為學(xué)改變。結(jié)果表明,抑郁模型大鼠(BC組和EC組),造模期間總液體消耗無明顯變化,1%蔗糖水偏愛度第21天顯著下降至第35天持續(xù)處于低水平;造模第8天后肢直立次數(shù)、穿越格數(shù)、清潔運(yùn)動(dòng)次數(shù)均顯著減少,中央格停留時(shí)間顯著增加,至第36天(造模結(jié)束后2周末)仍保持這種行為學(xué)改變;抗抑郁劑鹽酸氯丙咪嗪治療4周后(第36天)1%蔗糖水偏愛度回升到正常水平,治療兩周后(第21天)行為學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均有所恢復(fù),治療4周(第36天)多數(shù)恢復(fù)正常水平。結(jié)果顯示,該模型不僅反映了動(dòng)物對(duì)幸福事件反應(yīng)能力的下降、活動(dòng)能力下降和興趣喪失與抑郁癥臨床表現(xiàn)中的精神運(yùn)動(dòng)性阻抑癥狀相似,而且這種抑郁狀態(tài)可保持較長時(shí)間并可為抗抑郁劑改善。同時(shí)也表明該模型符合相關(guān)國際標(biāo)準(zhǔn),可用于研究抑郁癥的發(fā)病機(jī)制和抗抑郁劑藥理作用等相關(guān)研究。刺五加浸膏是刺五加粉乙醇濃縮提取物。臨床研究證實(shí)刺五加與傳統(tǒng)的抗抑郁藥丙咪嗪、氟西汀等一樣,有助于改善抑郁癥患者的心境和情緒,且副反應(yīng)少,更為安全有效。本研究結(jié)果顯示,AS組較CH組模型大鼠糖水偏愛度和穿越格數(shù)的恢復(fù)無明顯差異,中央格停留時(shí)間和垂直運(yùn)動(dòng)次數(shù)的恢復(fù)略差,清潔運(yùn)動(dòng)次數(shù)恢復(fù)略好;A+C組大鼠的中央格停留時(shí)間、穿越格數(shù)和清潔運(yùn)動(dòng)次數(shù)的恢復(fù)優(yōu)于單獨(dú)使用鹽酸氯丙咪嗪,中央格停留時(shí)間和穿越格數(shù)的改善優(yōu)于單獨(dú)使用刺五加,其他無差異。目前,國外大多數(shù)學(xué)者采用液體消耗實(shí)驗(yàn)中糖水偏愛度顯著降低作為測(cè)量快感缺乏的客觀指標(biāo),Open-field測(cè)試中的穿越方格數(shù)目減少反映動(dòng)物活動(dòng)度的降低,后肢直立次數(shù)減少和中央格停留時(shí)間延長反映動(dòng)物對(duì)新鮮環(huán)境的好奇程度降低,清潔動(dòng)作次數(shù)減少反映動(dòng)物對(duì)周圍環(huán)境的要求及對(duì)自身的關(guān)注下降。我們認(rèn)為:單獨(dú)和聯(lián)合使用藥物在改善抑郁癥的核心