H2S含量測(cè)定試劑盒說明書

第第頁H2S含量測(cè)定試劑盒說明書H2S含量測(cè)定試劑盒說明書微量法100T/96S注意：正式測(cè)定之前選擇23個(gè)預(yù)期差別大的樣本做猜測(cè)定。測(cè)定意義：H2S是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子，存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì)，生理濃度的H2S對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長(zhǎng)時(shí)程加強(qiáng)功能具有緊要的調(diào)整作用，并對(duì)自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發(fā)揮側(cè)緊要的病理生理效應(yīng)。測(cè)定原理：H2S與醋酸鋅、N,N二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán)，亞甲基藍(lán)在665nm處有最大汲取峰，通過測(cè)定其吸光值可計(jì)算H2S含量。自備試驗(yàn)用品及儀器：天平、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、蒸餾水。試劑構(gòu)成和配制：提取液：液體100mL×1瓶，4℃保管。試劑一：液體25mL×1瓶，4℃保管。試劑二：液體16mL×1瓶，4℃保管。試劑三：液體8mL×1瓶，4℃避光保管。試劑四：液體8mL×1瓶，4℃保管。試劑五：液體1.5mL×1管，4℃避光保管。樣品處理：1.組織：依照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。2.細(xì)菌、真菌：依照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500～1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波碎裂細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。3.血清（漿）：直接測(cè)定。操作表：1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)整波長(zhǎng)至665nm。2、操作表空白管測(cè)定管樣品（μL）150H2O（μL）150試劑一（μL）150150充分震蕩混勻試劑二（μL，4℃，離心10min，去上清，留沉淀H2O（μL，4℃，離心10min，去上清，留沉淀試劑一（μL）7575試劑三（μL）7575充分震蕩混勻試劑四（μL）757510000rpm，4℃，離心10min，吸取200μL上清于96孔板中試劑五（μL）1010混勻，25℃靜置5min，測(cè)定665nm吸光值，記為A測(cè)定和A空白，ΔA=A測(cè)定A空白。H2S含量計(jì)算公式：用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=0.0022x，R2=0.9988（1）組織樣品a.依照蛋白濃度計(jì)算H2S（nmol/mgprot）=×V反總÷（V樣×Cpr）=681.8×ΔA÷Cprb.依照樣本重量計(jì)算H2S（nmol/g鮮重）=×V反總÷（V樣÷V樣總×W）=681.8×ΔA÷W（3）細(xì)胞H2S（nmol/104cell）=×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)））=681.8×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）（2）液體樣品H2S（nmol/mL）=×V反總÷V樣=681.8×ΔAV反總：反應(yīng)總體積，0.225mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.