經(jīng)典名方經(jīng)典的藥食兩相萃取相抑菌性和抗氧化性研究

經(jīng)典名方經(jīng)典的藥食兩相萃取相抑菌性和抗氧化性研究

丁香是一種喜光、濕、光、影的。它具有很強的抗寒性?，F(xiàn)有的栽培品種可以安全地生活在北方，正常生長、開花和果實。丁香還具較強的耐旱性,對土壤要求不嚴,能耐瘠薄,除強酸性土壤外,其能在各類土壤上正常生長。丁香壽命較長,有數(shù)百年的古樹,主要分布在亞洲溫帶地區(qū)及歐洲東南部。丁香提取物可用于果蔬以及肉制品的保鮮,是值得研究和開發(fā)的天然防腐源。丁香提取液還用于醬油保鮮,不僅達到很好的抑菌效果,還賦予醬油一種特殊的香味。丁香的甲醇、丙酮提取液對番茄灰霉病菌(Botrytiscirerea)菌絲的生長表現(xiàn)出較強的抑制作用,可用于番茄的表面殺菌和保鮮;此外還可對草莓進行涂膜低溫保鮮,可以抑制呼吸強度,減少Vc等營養(yǎng)物質(zhì)的損耗,顯著延緩果實在貯藏間的品質(zhì)降低,有效減少貯藏期間爛果的發(fā)生。厚樸(MagnoliaofficinalisRehd.etWils.)主要分布在湖北恩施、五峰、湖南永州的道縣、江華、雙牌縣、四川都江堰、浙江景寧的麗水縣和廣西桂林的資源縣等。厚樸(CORTEXMAGNOLIAEOFFICINALIS)是常用中藥,具有行氣燥濕、降逆平喘之功效,用于治療脘腹脹痛、宿食不消、嘔吐瀉痢、氣逆喘咳等癥。厚樸提取物對芝麻油和豬油等油脂都有較強的抗氧化性。另外,厚樸酚具有很強的清除氧自由基的活性,對動物組織具有抗氧化作用以及抗衰老效果。和厚樸酚是一種聯(lián)苯酚類化合物,作為厚樸的主要有效成分之一,具有廣譜抗菌性,對大腸桿菌、鏈球菌、金黃色葡萄球菌等引起人類疾病的細菌和植物病原真菌均具有較強的抑制作用,且對水果采后致腐真菌有抑制作用。有關(guān)丁香和厚樸的抑菌性和抗氧化性研究有一些報道,但其不同溶劑萃取物的抑菌性和抗氧化性研究不多。為此,筆者通過對丁香和厚樸的不同溶劑萃取物抑菌性和抗氧化性進行研究,以期更好地了解其抑菌成分和抗氧化成分的存在部位,為更好地開發(fā)丁香和厚樸天然食品防腐劑和抗氧化劑提供參考。1材料和方法1.1材料表面1.1.1wi、化學、maagoliae丁香(FLOSCARYOPHYLLI)、厚樸(CORTEXMAGNOLIAEOFFICINALIS),購自河南千方藥業(yè)有限公司。1.1.2聚乙酸乙酯、氯化鈉、蛋白、脂質(zhì)酸鈉、脂酸乙酯鹽、脂質(zhì)中酸乙酯、氯化鈉、蛋白、脂質(zhì)酸鈉、脂質(zhì)酸鈉、脂質(zhì)酸鈉、脂質(zhì)酸鈉微膠囊的生產(chǎn)乙醇、石油醚、葡萄糖、牛肉膏、氫氧化鈉、乙酸乙酯、氯化鈉、蛋白胨、瓊脂,均為市售分析純;二苯基苦味酰基自由基(DPPH),購自Sigma-Aldrich公司。1.1.3菌株和微生物實驗室金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、黃曲霉(Aspergillusflavus)、黑曲霉(Aspergillusniger)、黑根霉(Rhizopusnigricans)、毛霉(Mucormucedo),均由河南工業(yè)大學微生物實驗室提供。1.1.4儀器、儀器和儀器SF-320型高速萬能粉碎機(河南周口制藥機械廠);RE-52旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);101FX-1電熱鼓風干燥箱(上海樹立儀器儀表公司);150AB生化培養(yǎng)箱(上海樹立儀器儀表公司);XFS-280M手提式壓力蒸汽滅菌器(浙江新豐醫(yī)療器械有限公司);天浮牌系列電子天平(天平金羊天平儀器廠);722N型可見分光光度計(上海菁華科技儀器公司);743Rancimat油脂氧化穩(wěn)定測定儀(瑞士萬通公司)。1.2方法1.2.1馬鈴薯汁的制備①細菌培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基):將牛肉膏3.0000g,蛋白胨10.0000g,氯化鈉5.0000g,瓊脂20.0000g,蒸餾水1L,調(diào)pH為7.2～7.4,0.1MPa(121℃)高壓滅菌20min,備用。②真菌培養(yǎng)基(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基PDA):將馬鈴薯去皮,洗凈,切成小塊,稱取300.0000g,放入1L水中煮沸20min,雙層紗布過濾,得馬鈴薯汁,將其補足1L,再加20.0000g瓊脂、20.0000g葡萄糖,煮沸,分裝,0.1MPa(121℃)高壓滅菌20min,備用。③0.85%生理鹽水:將8.5000g氯化鈉加入1L蒸餾水中,溶解后于0.1MPa(121℃)高壓滅菌20min,備用。1.2.2懸浮液的制備取少量已活化的待測菌種于已滅菌的裝有生理鹽水的試管中,充分混勻,制成菌懸液,備用。1.2.3丁香浸膏的制備將丁香、厚樸粉碎,過40目篩,備用。準確稱取50.0000g丁香粉,按料液比1∶12加入95%乙醇,浸提,于85℃水浴鍋中回流5h,真空抽濾,濃縮至50ml(每毫升相當于1.0g原料),備用。取丁香提取液10ml,置于125ml分液漏斗中,加入10ml蒸餾水,震蕩均勻,用石油醚萃取3次,每次5～10ml,收集、合并3次萃取的上清液;再用乙酸乙酯按相同的方法萃取。分別將丁香蒸餾水相部分、石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液濃縮至浸膏,濃度為0.04g/ml,密封,冷藏保存,備用。厚樸提取物的制備同上。1.2.4含菌培養(yǎng)基的制備將直徑為6mm的圓濾紙片滅菌后放入各相提取物中浸泡2h,取出,置于常溫下,備用。同時取適量的石油醚、乙酸乙酯、蒸餾水于燒杯中,放入滅菌紙片,作空白對照。將各培養(yǎng)皿中倒入15～20ml培養(yǎng)基,凝固后將各種受試菌菌懸液在相應(yīng)的固體培養(yǎng)基上均勻涂布,制成含菌培養(yǎng)基。取浸泡過的濾紙片貼在含菌平板上,并放入一片對應(yīng)的空白濾紙,每皿共貼4片。將細菌置于37℃下培養(yǎng)24h,真菌置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h,記錄抑菌圈的大小,確定抑菌效果。1.2.5抗逆反應(yīng)試驗1.2.5.dpph自由基清除率測定采用DPPH法測定。精確稱取0.0126gN,N-二苯基三硝基苯肼(DPPH)自由基,用無水乙醇溶解定容至50ml容量瓶中,搖勻,低溫保存。將DPPH自由基儲備液取出,室溫下放置,讓其自然膨脹至刻度,吸取10ml,用無水乙醇定容至100ml容量瓶中,搖勻,得0.0252mg/ml的DPPH自由基溶液。用無水乙醇為基準在517nm處測其吸光度,按下列公式計算清除率:清除率(%)=1-[(At-A1)/A0]×100。式中,A0為517nm處零時刻DPPH自由基反應(yīng)液的吸光度值;At為517nm處t時刻DPPH自由基反應(yīng)液基本穩(wěn)定時的吸光度值;A1為517nm處樣品液的吸光度。1.2.5.油脂氧化穩(wěn)定性測定將5ml新鮮煉制的豬油放入油脂氧化穩(wěn)定性測定儀的樣品瓶中,再加入1ml丁香萃取液和1ml厚樸萃取液,在743Rancimat油脂氧化穩(wěn)定測定儀上測定,分別以5ml豬油和1ml水、5ml豬油和1ml乙酸乙酯、5ml豬油和1ml石油醚作空白試驗。測定溫度110℃,空氣流量10L/h。根據(jù)記錄曲線達到拐點時的誘導時間長短,以判斷樣品抗氧化性能的強弱。2結(jié)果與分析2.1抑菌性和抑菌能力由表1可知,丁香石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液及厚樸石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液抑菌能力較強,而兩者的水萃取液抑菌性均較小。丁香石油醚萃取液對真菌的抑菌性較強,對細菌的抑菌性較弱;乙酸乙酯萃取液對細菌的抑菌性較強,對真菌無抑菌性;厚樸石油醚萃取物、厚樸乙酸乙酯萃取液對細菌和真菌的抑菌能力相似。由此可知,丁香石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液、厚樸石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液中防腐活性成分含量較高。2.2不同溶劑的顧問效應(yīng)2.2.1清除自由基能力由圖1可知,試樣所用6種萃取液均有一定的清除自由基作用,均達到90%以上,但清除能力差異明顯。丁香各溶劑萃取液清除自由基能力較強;而厚樸各萃取液清除自由基能力相對較弱,各萃取液清除自由基能力的強弱依次為:丁香石油醚萃取液>丁香水萃取液>丁香乙酸乙酯萃取液>厚樸石油醚萃取液>厚樸乙酸乙酯萃取液>厚樸水萃取液。2.2.2抗氧化能力的比較圖2顯示,丁香和厚樸的不同溶劑萃取液加入到豬油中,都對豬油有一定的抗氧化效果。其中丁香乙酸乙酯萃取液、厚樸乙酸乙酯萃取液、石油醚萃取液的抗氧化能力較強,丁香石油醚萃取液次之,丁香水萃取液、厚樸水萃取液的抗氧化能力相對較弱。各萃取液抗氧化能力的強弱為:厚樸乙酸乙酯萃取液>厚樸石油醚萃取液>丁香乙酸乙酯萃取液>丁香石油醚萃取液次>丁香水萃取液>厚樸水萃取液。3套溶劑萃取液抗氧化能力測定方法(1)丁香石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液、厚樸石油醚萃取液、乙酸乙酯萃取液均有較強的抑菌能力,含有較多防腐活性成分。丁香、厚樸石油醚相萃取液、乙酸乙酯萃取液、水萃取液均有一定的清除自由基的能力,說明各萃取相均含有較強的抗氧化成分,其清除自由基強弱順序為:丁香石油醚萃取液>丁香水萃取液>丁香乙酸乙酯萃取液>厚樸石油醚萃取液>厚樸乙酸乙酯萃取液>厚樸水萃取液。此外,丁香和厚樸的不同溶劑萃取液對豬油表現(xiàn)出較強的抗氧化能力,各提取液抗氧化能力強弱順序為:厚樸乙酸乙酯萃取液>厚樸石油醚萃取液>丁香乙酸乙酯萃取液>丁香石油醚萃取液>丁香水萃取液>厚樸水萃取液。(2)長期以來,食品保鮮主要依靠合成防腐劑和