微生物實(shí)驗(yàn)室常用菌種的維護(hù)與管理

微生物實(shí)驗(yàn)室常用菌種的維護(hù)與管理

在微生物實(shí)驗(yàn)室，通常需要保存一些常見(jiàn)的細(xì)菌和菌株，如金色細(xì)菌、引起性細(xì)菌、幾種常見(jiàn)的沙門氏菌和流行性疾病。學(xué)生們進(jìn)行了細(xì)菌涂片染色、細(xì)菌接種和制備、凝集原生動(dòng)物、免疫動(dòng)物和制備血清和測(cè)定血清效率等。在做抗菌藥物敏感試驗(yàn)時(shí),也需常備一套對(duì)各種抗菌藥物“敏感”的對(duì)照菌株,使學(xué)生學(xué)會(huì)判斷細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性。對(duì)這些菌種的妥善保管和保存,是良好的實(shí)驗(yàn)室管理和實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的重要保證。1保存由于實(shí)驗(yàn)室中保存的菌種大多對(duì)人體具有致病性,經(jīng)多次移種又易被污染和發(fā)生變異,做好安全及質(zhì)量管理至關(guān)重要,主要應(yīng)做到以下幾點(diǎn)。1.1專業(yè)人員負(fù)責(zé)菌種保管應(yīng)指定專人負(fù)責(zé),存放于加鎖的冰箱中。保管人應(yīng)具備高度的責(zé)任心,明確職責(zé),嚴(yán)格執(zhí)行有關(guān)的規(guī)章制度,以確保菌種安全。1.2菌種的名稱和數(shù)量實(shí)驗(yàn)室應(yīng)備有一本詳細(xì)登記本,對(duì)各種菌種進(jìn)行詳細(xì)登記,內(nèi)容包括菌種的名稱,編號(hào),數(shù)量,分離日期,鑒定者,細(xì)菌的形態(tài)染色,培養(yǎng)生化特性,抗原結(jié)構(gòu),動(dòng)物致病力等,并注明使用、移種及銷毀的情況和原因。1.3菌種移種時(shí)間對(duì)菌種的保管不僅要求菌種不死,還要力求其生物學(xué)性狀等不發(fā)生變異。各種菌種應(yīng)按規(guī)定時(shí)間定期移種。細(xì)菌在人工培養(yǎng)基上經(jīng)數(shù)代培養(yǎng)后,其形態(tài)、菌落、毒力等均易發(fā)生變異,因此,在每移種3次后應(yīng)做一次全面鑒定,檢測(cè)菌種有無(wú)污染和變異,如發(fā)現(xiàn)污染和變異時(shí),應(yīng)及時(shí)處理。2保存保存菌種應(yīng)根據(jù)細(xì)菌的培養(yǎng)特性、抵抗力等選擇適合的培養(yǎng)基,微生物實(shí)驗(yàn)室常用菌種的一般保存方法有以下幾種:2.1立輥儲(chǔ)存法2.1.1接種傳代1次腸道桿菌、葡萄球菌等營(yíng)養(yǎng)要求不高的細(xì)菌可接種于普通瓊脂斜面上,斜面底部應(yīng)加少許無(wú)糖肉膏液,以防干涸(但變形桿菌“OX”及傷寒桿菌“0”菌株宜接種于斜面底部無(wú)肉湯的干燥的瓊脂斜面,以防變異),用橡皮塞塞緊,置37℃培養(yǎng)18～24h后,放于4℃冰箱中,可保存1個(gè)月,每經(jīng)1個(gè)月需接種傳代1次。2.1.2接種1個(gè)月2個(gè)月鏈球菌及肺炎球菌的營(yíng)養(yǎng)要求較高,在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)不良或不生長(zhǎng),應(yīng)接種于血液瓊脂斜面上,37℃培養(yǎng)生長(zhǎng)后,放4℃冰箱保存,鏈球菌需半個(gè)月～1個(gè)月接種1次;肺炎球菌因能產(chǎn)生自溶酶而導(dǎo)致自溶現(xiàn)象,需4d移種1次。肺炎球菌在人工培養(yǎng)基上經(jīng)數(shù)代培養(yǎng)后,其形態(tài)、菌落、毒力均易發(fā)生變異,在人工培養(yǎng)基上肺炎球菌很快失去莢膜,經(jīng)多代培養(yǎng)后其光滑型菌落可變?yōu)榇植谛?毒力也大為降低。2.1.3vi產(chǎn)物的毒力成分為新鮮全蛋、1%葡萄糖肉湯及甘油。少數(shù)沙門氏菌當(dāng)新從病人檢材中分離出來(lái)時(shí),常具有Vi抗原,具有Vi抗原的細(xì)菌,有抵抗吞噬的作用,并保護(hù)細(xì)菌不被相應(yīng)抗體在補(bǔ)體參與下所溶解,故毒力較強(qiáng)。含有Vi抗原的沙門氏菌等,可接種于雞蛋斜面上,37℃培養(yǎng)18～24h,加無(wú)菌液體石蠟至斜面浸沒(méi),再超出約1cm,置4℃冰箱,可保存3～6個(gè)月,Vi抗原經(jīng)長(zhǎng)期人工培養(yǎng),也易消失。2.1.4血清“制備”白喉?xiàng)U菌可保存在該培養(yǎng)基上,其成分為1%葡萄糖肉湯(pH7.4)1份,牛血清或兔血清(無(wú)菌)3份。白喉?xiàng)U菌在此培養(yǎng)基上生長(zhǎng)迅速、旺盛,菌體形態(tài)典型,如在培養(yǎng)基中再加入5%～10%的中性甘油,則培養(yǎng)出的白喉?xiàng)U菌的異染顆粒更為明顯,但24h后即衰老成為多形態(tài),很少有異染顆粒,菌體粗大3～4倍,置4℃冰箱可保存2周～1個(gè)月。2.2半固體穿刺保護(hù)法2.2.1液體石蠟的傳代移種大腸桿菌、葡萄球菌、綠膿桿菌等可穿刺接種于普通半固體培養(yǎng)基內(nèi),37℃培養(yǎng)18～24h后,加1層無(wú)菌的液體石蠟,厚度約為1cm,置4℃冰箱可保存3～6個(gè)月。傳代移種時(shí),將半固體菌種管傾斜,使液體石蠟流至一邊,再取菌移種于新的培養(yǎng)基。將沾有少數(shù)液體石蠟的接種環(huán)浸于95%酒精中片刻,再燒灼滅菌,以免直接在酒精燈下燒灼時(shí),液體石蠟四濺,引起污染。2.2.2結(jié)核桿菌培養(yǎng)基結(jié)核桿菌的營(yíng)養(yǎng)要求較高,在培養(yǎng)基中需加入復(fù)雜的有機(jī)物如動(dòng)物血清、雞蛋、馬鈴薯、氨基酸以及磷、硫、鉀、鎂等無(wú)機(jī)鹽類才能生長(zhǎng)。結(jié)核桿菌的培養(yǎng)基種類很多,實(shí)驗(yàn)室最常用的是羅氏培養(yǎng)基。該菌生長(zhǎng)速度很慢,一般分裂速度為18h1代,37℃需培養(yǎng)2～3周,置4℃冰箱可保存2～3個(gè)月。2.4厭氧菌的保存將牛肉渣裝于試管中,高約3cm,并加入肉湯約5mL,比肉渣高1倍,在每管液面上加入已溶化的凡士林,高約0.5cm,高壓滅菌后備用。破傷風(fēng)桿菌等專性厭氧菌常保存在庖肉培養(yǎng)基內(nèi)。使用時(shí)先將培養(yǎng)基置于水浴中煮沸10min,以驅(qū)除管內(nèi)存留的氧氣,然后將破傷風(fēng)桿菌接種于肉渣培養(yǎng)基內(nèi),經(jīng)37℃培養(yǎng)2～7d后,培養(yǎng)基呈輕度均勻混濁,肉渣部分消化,微變黑,產(chǎn)生少量氣體,4℃冰箱可保存2～3個(gè)月。2.5培養(yǎng)基的制備適用于有芽胞的細(xì)菌的保存,將過(guò)篩后的中性細(xì)砂烘干,裝入小試管內(nèi)約lcm高,橡皮塞塞緊,滅菌烘干備用。用無(wú)菌生理鹽水洗下培養(yǎng)基上的細(xì)菌培養(yǎng)物,制成懸液。吸此菌液約0.5mL注入砂管內(nèi),以砂土全部被浸濕為度。塞好管塞,放人干燥器內(nèi)抽干。然后放在裝有氯化鈣(吸水劑)的干燥瓶?jī)?nèi),置冰箱保存?zhèn)溆谩Ｐ栌镁N時(shí),取一接種環(huán)砂土接種于適宜培養(yǎng)基上培養(yǎng)即可。2.6副溶血性弧菌回復(fù)突變型將細(xì)菌的普通培養(yǎng)基生長(zhǎng)物放于4℃冰箱或室溫冷暗處保存。用這種方法保存,只可保存數(shù)天,久之容易變異甚至死亡。一般只