齊墩果酸在更年期綜合癥治療中的獨(dú)立性研究

齊墩果酸在更年期綜合癥治療中的獨(dú)立性研究

目前，女性貞節(jié)常用于更年期綜合征的治療，取得了積極的治療效果。然而，尚不清楚什么樣的復(fù)合氨基酸（acid）作為其主要有效組成部分是否在更年期綜合征的治療中發(fā)揮了作用。本實驗就此進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。1材料和方法1.1實驗藥物齊墩果酸為云南玉溪萬方天然藥物有限公司產(chǎn)品,批號:030401;大豆異黃酮為天津尖峰天然產(chǎn)物公司產(chǎn)品,批號:20040410。1.2動情周期及年齡選用30只11～15月齡雌性SD大鼠,體重280～350g。經(jīng)陰道細(xì)胞涂片檢查,呈現(xiàn)不規(guī)則的動情周期確定為更年期鼠。隨機(jī)分配到更年期組及各用藥組,每組10只。另選4～6月齡,體重150～220g雌性SD大鼠10只作為青年對照組。實驗動物由南方醫(yī)院實驗動物中心提供。1.3模型大鼠分組設(shè)更年期模型組、齊墩果酸組、大豆異黃酮組及青年鼠對照組。齊墩果酸組予以50mg/kg·d齊墩果酸2ml,大豆異黃酮組予以500mg/kg·d大豆異黃酮2ml,更年期模型組與青年鼠對照組均予以0.9%生理鹽水2ml,連續(xù)6周。1.4觀察項目和方法各組實驗動物取腹主動脈血樣后處死,摘除卵巢、腎上腺進(jìn)行病理檢查。1.4.1抗氧化酶活性測定雌激素(E2)水平測定采用免疫化學(xué)發(fā)光法。脂質(zhì)過氧化物(LPO)水平測定采用TBA比色法,結(jié)果以脂質(zhì)過氧化物的穩(wěn)定終產(chǎn)物丙二醛(MDA)濃度(nmol/ml)表示。超氧化物歧化酶(SOD)活性測定采用化學(xué)發(fā)光法。谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性測定采用DTNB直接顯色法。1.4.2組織病理學(xué)觀察將摘除下來的各組大鼠雙側(cè)卵巢用福爾馬林固定、石蠟包埋,切片,片厚6μm,HE染色,低倍鏡下觀察卵巢橫切面中原始卵泡、生長卵泡(包括初級卵泡和次級卵泡)、退化卵泡及黃體數(shù)目。1.4.3髓炎及類脂滴檢測將摘除下來的各組大鼠腎上腺用福爾馬林固定,石蠟包埋,切片,片厚6μm,HE染色,低倍鏡下觀察腎上腺組織變化(包括有無結(jié)構(gòu)紊亂、瘀血程度及類脂滴含量),高倍鏡下測定腎上腺皮質(zhì)厚度。瘀血程度判斷標(biāo)準(zhǔn):血竇中有少量紅細(xì)胞為“+”;血竇中充滿紅細(xì)胞但血竇未擴(kuò)張為“++”;血竇中充滿紅細(xì)胞,同時伴血竇擴(kuò)張為“+++”。束狀帶類脂滴含量判斷標(biāo)準(zhǔn):“+”,表示高倍鏡下觀察200個束狀帶細(xì)胞并計數(shù)其胞質(zhì)內(nèi)含4個以下類脂滴的細(xì)胞占200個細(xì)胞中70%以上者;“++”表示含5-9個類脂滴的細(xì)胞占200個細(xì)胞中的70%以上者;“+++”表示含10個以上類脂滴的細(xì)胞占200個細(xì)胞中的70%以上者。球狀帶、束狀帶、網(wǎng)狀帶厚度系數(shù):高倍鏡球狀帶、束狀帶、網(wǎng)狀帶各帶厚度占腎上腺皮質(zhì)全厚度的百分比。1.5處理數(shù)據(jù)所有數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件處理,結(jié)果以xˉ±sxˉ±s表示,兩組間差異顯著性分析用t檢驗。2結(jié)果2.1e、e水平比較從表1看出,更年鼠模型組與青年鼠對照組比較,E2水平明顯降低(P<0.01)。各用藥組E2水平均有所提高(P<0.05),其中以齊墩果酸組效果較明顯。2.2gsh-px值從表2中可見,更年期組大鼠MDA值較青年對照組明顯增高(P<0.05),SOD值顯著降低(P<0.01)、GSH-Px值明顯降低(P<0.05);而用藥組均具有較好提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA濃度作用(P<0.05或P<0.01),以齊墩果酸組效果為佳。2.3大豆異黃酮對齊墩羧酸組織物的影響更年鼠模型組原始卵泡少,退化卵泡多,發(fā)育正常的卵泡少,黃體數(shù)目少;齊墩果酸組發(fā)育正常的卵泡較多,生長卵泡增多,退化卵泡少,黃體數(shù)目較多;大豆異黃酮組初級、次級生長卵泡增多,成熟卵泡少,黃體數(shù)目少;青年鼠組原始卵泡多,初、次級卵泡增多,黃體數(shù)目最多。2.4成網(wǎng)部位和細(xì)胞形態(tài)變化表3、4顯示更年期鼠腎上腺皮質(zhì)球狀帶、網(wǎng)狀帶較青年鼠增厚,束狀帶變且細(xì)胞索失去相互平行排列的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)而交叉成網(wǎng),網(wǎng)狀帶內(nèi)近束狀帶區(qū)瘀血明顯,束狀帶細(xì)胞胞質(zhì)中類脂滴含量明顯減少。齊墩果酸組與更年期模型組比較,球狀帶、網(wǎng)狀帶變薄(P<0.05),束狀帶增厚(P<0.01),束狀帶細(xì)胞索形態(tài)基本正常,類脂滴含量接近青年鼠組,網(wǎng)狀帶未見明顯瘀血;大豆異黃酮組能增加腎上腺皮質(zhì)束狀帶厚度,但對于結(jié)構(gòu)紊亂、瘀血程度的改善效果不及齊墩果酸組。3不同年份的免疫組化和平臺藥物治療大鼠肝腎皮質(zhì)的活性變化更年期綜合征是由于增齡卵巢功能衰退所致的下丘腦-垂體-性腺軸機(jī)能減退,導(dǎo)致全身各系統(tǒng)受其影響而產(chǎn)生的一系列變化。中醫(yī)理論認(rèn)為以四診信息為依據(jù),更年期綜合征可分為肝腎陰虛、腎陽虧虛、陰虛陽旺、肝氣郁結(jié)等證型,其中以肝腎陰虛型最為多見。女貞子具有滋補(bǔ)肝腎的作用,因而被廣泛運(yùn)用于更年期綜合征的治療?，F(xiàn)有研究表明,齊墩果酸(oleanolicacid)是女貞子的主要有效成分,能清除自由基,提高機(jī)體對脂質(zhì)過氧化的抵抗力。卵巢退行性變導(dǎo)致的雌激素水平下降是更年期綜合征發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。我們的實驗也證實了更年鼠較青年鼠E2水平減低,卵巢原始卵泡少、退化卵泡多,發(fā)育正常卵泡少,黃體數(shù)量少。本實驗中,更年期大鼠予以齊墩果酸胃飼后,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析,與更年期對照組相比,E2水平增高,初級卵泡增多,卵巢形態(tài)有一定的改善。腎上腺皮質(zhì)在更年期綜合征發(fā)病學(xué)中的作用目前尚未定論。Cooper描述隨年齡增加而導(dǎo)致的腎上腺改變的特點(diǎn)為:結(jié)締組織和間質(zhì)纖維組織增加,替代正常腎上腺皮質(zhì)和髓質(zhì),束狀帶類脂滴缺失等。本實驗顯示更年鼠較青年鼠腎上腺皮質(zhì)束狀帶變薄,球、網(wǎng)狀帶增厚,皮質(zhì)結(jié)構(gòu)紊亂,類脂滴明顯減少,與Cooper的觀點(diǎn)基本一致。而予以齊墩果酸胃飼后,大鼠腎上腺皮質(zhì)束狀帶增厚,球狀帶、網(wǎng)狀帶變薄,類脂滴含量增加,腎上腺組織結(jié)構(gòu)紊亂及瘀血得以改善。此外,更年期與自由基的關(guān)系目前也引起重視。更年期隨著卵巢機(jī)能快速衰退,性激素、促性腺激素水平紊亂,導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化作用增加,自由基清除酶類活性下降。我們的實驗表明更年鼠組脂質(zhì)過氧化物(LPO)的穩(wěn)定終產(chǎn)物丙二醛(MDA)濃度較青年鼠組顯著上升,SOD、GSH-Px活性顯著降低,說明更年期組因內(nèi)分泌改變,有關(guān)器官逐漸衰老,并進(jìn)而出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化作用增加,自由基清除酶類活性下降等變化。而齊墩果酸能使LPO降低(P<0.01),GSH-Px、SOD活性顯著升高(P<0.05),故對自由基損傷有