hplc法測定護(hù)肝片中五味子醇甲的含量

hplc法測定護(hù)肝片中五味子醇甲的含量

肝屏障由柴胡、艾酒、板藍(lán)根、五味子、豬膽粉、綠茶和六位中藥組成。護(hù)肝片具有疏肝理氣,健脾消食。具有降低轉(zhuǎn)氨酶作用。用于慢性肝炎及早期肝硬化。五味子,俗稱山花椒、秤砣子、藥五味子、面藤、五梅子等,唐等《新修本草》載“五味皮肉甘酸,核中辛苦,都有咸味”,故有五味子之名。《中國藥典》2005版采用高效液相色譜法測定五味子醇甲的含量來控制五味子的質(zhì)量,規(guī)定不得少于0.40%。中成藥中五味子醇甲的含量測定方法已有報道,但對護(hù)肝片中五味子醇甲的含量測定報道很少。現(xiàn)對制劑中五味子醇甲進(jìn)行測定,控制護(hù)肝片質(zhì)量。1護(hù)肝片及藥料高效液相色譜儀:安捷倫1100泵;安捷倫檢測器;安捷倫色譜工作站。護(hù)肝片批號(20051201,20051207,20051219)。五味子醇甲對照品(110857-200507)由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純,其它試劑試藥均為分析純。2重量測定2.1s18柱檢測條件色譜柱為USAAgilentZORBAXSB-C18柱(規(guī)格4.6mm×250mm,5μm);甲醇—水(60∶40)為流動相;檢測波長為250nm;流速1.0ml·min-1;柱溫:30℃。2.2提取方法是正確的2.2.1超聲提取的選擇在供試品溶液制備中,分別選用了水、50%甲醇、甲醇進(jìn)行超聲提取,結(jié)果表明甲醇分離效果、峰形及含量為最好,所以選擇甲醇進(jìn)行超聲提取。2.2.2種提取時間對比取供試品適量,用甲醇溶解,超聲波振蕩分別提取20、25、30分鐘,制備供試品溶液,含量結(jié)果表明:三種提取時間結(jié)果無明顯差異,為保證提取完全并縮短處理時間,采用超聲提取20分鐘。子醇甲對照品溶液20μl重復(fù)進(jìn)樣5次,測定峰面積積分值,對照品峰面積積分值的RSD為0.88%。結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)精密度良好。2.8方法的重現(xiàn)性測定分別稱取同批護(hù)肝片樣品6份,分別依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品,按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下方法測定含量,并計(jì)算樣品的RSD值為1.16%,結(jié)果表明,此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。2.9研磨法測定五味子醇甲峰面積積分值依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液,分別在0,4,8,24,30h精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀,進(jìn)樣測定,供試品五味子醇甲峰面積積分值的RSD為0.52%。結(jié)果表明五味子醇甲至少在30h內(nèi)穩(wěn)定。2.10加樣回收率試驗(yàn)采用加樣回收試驗(yàn),取已知含量的同一批供試品各6份,精密稱定,分別精密添加一定量的五味子醇甲對照品,按供試品制備所述方法制備供試品溶液,測定含量(同時測定樣品含量),計(jì)算回收率。6次測定的平均回收率為99.65%,RSD為0.91%。2.11樣品含量測定按本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下方法,測定了三批樣品,結(jié)果見表1,樣品中五味子醇甲的含量差異,每片不低于0.4mg。表1三批樣品含量測定結(jié)果3討論3.1藥物中藥物制備配方2.3供試品溶液的制備。取護(hù)肝片適量,研細(xì),精密稱取約2g,(60∶40),甲醇—水(40∶60)不同比例的流動相,結(jié)果以甲醇—水置50ml量瓶中,加甲醇適量,超聲處理20min使溶解,放置至室溫,(60∶40)為流動相,供試品各峰分離效果最好,故選用甲醇—水加甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,即得。(60∶40)為流動相。2.4對照品溶液的制備。精密稱取五味子醇甲對照品約15.25mg,置50ml容量瓶中,用5甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得(每1ml溶液中含五味子醇甲30.5mg)。2.5陰性干擾試驗(yàn)。在處方中去五味子藥材,按方中比例和制備工藝方法制成陰性制劑,用供試品溶液制備的方法,制成陰性對照溶液,用以上選定的測定條件進(jìn)行吸收曲線繪制,觀察在與五味子醇甲相同的保留時間處是否存在吸收峰,結(jié)果表明:在選定條件下測得的陰性液吸收曲線在與五味子醇甲相同保留時間處不存在吸收峰,因此說明選定的條件測定五味子醇甲無干擾,具有較強(qiáng)的專屬性。2.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。制備濃度為30.5、91.5、153.5、213.5、384.3μg·ml-1的對照品溶液,分別精密吸取10μl注入HPLC,記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)(μg)為橫坐標(biāo),進(jìn)樣量為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸方程為Y=4870X-8019,r=0.9999(n=5)。試驗(yàn)表明,五味子醇甲對照品在30.5~274.5μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2.7精密度試驗(yàn)。依照2.4項(xiàng)下制備對照品溶液,精密吸取五味3.2味子醇甲檢測波長制備五味子醇