復方甘草酸苷對大鼠亞急性酒精性肝損傷的保護作用

復方甘草酸苷對大鼠亞急性酒精性肝損傷的保護作用

酒精性肝病是指因長期飲酒而導致的肝臟疾病。肝臟是酒精代謝的主要場所,飲酒過量,乙醇在體內(nèi)蓄積,對肝臟的損傷表現(xiàn)為肝臟水腫、脂肪化及不同程度的纖維化等。復方甘草酸苷(StrongerNeo-MinophagenC,SNMC)是由甘草酸苷、甘氨酸和鹽酸半胱氨酸等成分組成的一種復方制劑,可以降低氨基轉移酶、保護肝細胞膜、改善肝功能和修復組織損傷,具有抗炎、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)和類激素樣等作用。目前對亞急性酒精性肝損傷的相關報道較少見,通過研究SNMC對肝損傷大鼠谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的影響,探討該藥物對酒精所致大鼠亞急性肝損傷的保護機制。1材料和方法1.1實驗動物選擇健康雄性SD大鼠72只,重量(200±20)g,由咸寧學院動物中心提供。1.2snpc藥劑56°紅星二鍋頭白酒,北京紅星股份有限公司生產(chǎn)。SNMC片劑購自深圳健安醫(yī)藥有限公司。ALT、AST、SOD和MDA檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。1.3snpc的配制適應性喂養(yǎng)1周后,將72只大鼠隨機分為6組:空白組、模型組、SNMC低劑量組、中劑量組、高劑量組和陽性對照藥葵花護肝片組。每日上午10點至10點半按1ml/100g灌胃:空白組和模型組灌蒸餾水,SNMC低、中、高劑量組分別灌濃度為0.15、0.30、0.60g/ml混懸液;陽性對照組灌0.15g/ml葵花護肝片混懸液。連續(xù)1周,每次給藥2h后,除空白組給蒸餾水外,其余各組分別以1ml/100g灌胃稀釋后酒精濃度為45%的白酒。1周后全部處死,檢測相應指標。1.4肝臟指數(shù)的測量由公式:肝臟指數(shù)(%)=肝臟重量(g)/體重(g)×100%,計算每克體重的肝臟克數(shù)作為肝臟指數(shù)。1.5肝組織病理學檢查取大鼠肝左葉,10%中性甲醛溶液固定,常規(guī)石蠟包埋、切片,HE染色。光鏡下觀察肝組織形態(tài)和結構變化。1.6ast含量取全血分離血清,采用賴氏法檢測ALT和AST含量;取部分肝臟,并制備成10%的肝勻漿,采用黃嘌呤氧化酶法檢測SOD活性,用硫代巴比妥酸比色法檢測MDA含量。1.7統(tǒng)計分析實驗數(shù)據(jù)以xˉ±sxˉ±s表示,應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析,組間比較采用t檢驗,以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。2結果2.1模型大鼠不良反應發(fā)生率比較72只大鼠共有67只完成實驗。實驗期間,空白組、SNMC中劑量組、葵花護肝片組12只大鼠全部存活;模型組有2只大鼠不能耐受酒精灌胃刺激而死亡,余下大鼠與空白組比較其體重減輕,嗜睡,毛發(fā)光澤度較差,且反應遲鈍;SNMC低、高劑量組分別有1只和2只大鼠,在酒精灌胃時,液體誤入氣管,導致大鼠窒息而死;SNMC各劑量組相對模型組大鼠,其活動相對較多,食欲和整體狀態(tài)較好。2.2肝臟指數(shù)增加與空白組相比,模型組大鼠終體重無明顯變化(P>0.05),但肝臟指數(shù)增加(P<0.05);與模型組相比,SNMC各劑量組和葵花護肝片組大鼠終體重亦無明顯變化(P>0.05),而高劑量組和葵花護肝片組大鼠肝臟指數(shù)減小(P<0.05)(表1)。2.3肝治療大鼠肝兩種結構的結構變化光鏡下空白組大鼠肝小葉結構清晰,肝細胞索排列整齊,肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列。肝臟細胞形態(tài)規(guī)則,無異常改變。模型組大鼠肝小葉界限不清,其結構遭到破壞,肝細胞明顯腫脹,胞質(zhì)疏松并出現(xiàn)散在的大小不等的脂滴空泡。部分肝細胞發(fā)生腫脹,肝小葉內(nèi)散在肝細胞點狀壞死,匯管區(qū)可見炎性細胞浸潤(圖1:A)。與模型組比較,SNMC各劑量組之間差異不明顯,可見肝細胞多呈放射狀排列,細胞分界較清楚,肝細胞腫脹顯著減輕,脂肪變性、細胞浸潤及點狀壞死程度均降低(圖1:B、圖1:C、圖1:D)。2.4snpc對大鼠血清alt活性的影響與空白組相比,模型組大鼠血清ALT和AST活性顯著升高(P<0.01)。與模型組相比,SNMC高劑量組和葵花護肝片組大鼠血清ALT活性顯著下降(P<0.01);其低、中、高劑量組和葵花護肝片組大鼠血清AST活性下降(P<0.05)(表2)。2.5snpc對大鼠肝組織sod活性的影響與空白組比較,模型組大鼠肝組織SOD活性顯著降低,MDA含量顯著升高(P<0.01);與模型組比較,SNMC中、高劑量組大鼠肝組織SOD活性升高(P<0.05),葵花護肝片組SOD活性顯著升高(P<0.01);各組MDA含量降低(P<0.05)(表3)。3snec對大鼠肝抗氧化活性的影響SNMC臨床上適應于治療慢性肝病,改善肝功能;可以延緩肝纖維化小鼠和暴發(fā)性肝功能衰竭小鼠的病情進展,但對亞急性酒精性肝損傷的作用效果目前研究不多。文中采用酒精灌胃法建立大鼠亞急性肝損傷模型,借以初步探討SNMC對亞急性酒精性肝損傷的相關作用機制。乙醇在肝臟代謝過程中可產(chǎn)生大量自由基,例如O-2、H2O2、OH-、ONOO-等,它們可使肝細胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應。細胞膜遭到破壞,轉氨酶釋放入血,使血中ALT和AST活性升高。而SOD作為抗氧化體系中的重要組成部分,可阻斷自由基對肝細胞造成的損害,并及時修復受損細胞。酗酒使SOD活性下降,自由基不能被有效清除,進而損傷肝細胞,其脂質(zhì)過氧化反應的終末產(chǎn)物MDA增加。實驗模型組大鼠與空白組比較,血清ALT和AST活性顯著增加,肝組織SOD活性顯著降低,MDA含量顯著升高。因此該亞急性酒精性肝損傷大鼠模型的建立是成功的,實驗體系是可靠的。結果顯示,SNMC各劑量組可降低血清AST活性,高劑量組可明顯降低血清ALT活性。說明SNMC能穩(wěn)定肝細胞膜結構,對大鼠亞急性酒精性肝損傷具有保護作用。該藥物在臨床上可改善轉氨酶,對肝組織損傷也有抑制作用。此外實驗還發(fā)現(xiàn)SNMC中、高劑量組