蔬菜、果蔬中氯吡脲殘留量測定方法的研究

蔬菜、果蔬中氯吡脲殘留量測定方法的研究

氯苯魯酯的化學名稱為1-（2-氯-4-吡啶）-3-硝基。這是一種具有細胞分裂活性的苯基植物生長調(diào)節(jié)劑。其生物活性比6-氨基丙烯酸含有10-100倍，廣泛用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。因氯吡脲可能會對人體健康帶來潛在危害,各國對其最高殘留量做出了嚴格限定,其中美國限量值為0.01mg/kg、歐盟限量值為0.05mg/kg、日本肯定列表限量值為0.1mg/kg,而中國規(guī)定氯吡脲在獼猴桃和葡萄上的限量值為0.05mg/kg,在黃瓜和西瓜上為0.1mg/kg。為完善我國的農(nóng)藥殘留分析方法標準體系和保護我國公眾的身體健康,有必要建立氯吡脲在蔬菜、瓜果上的殘留檢測方法。1實驗部分1.1玻璃器協(xié)同色譜psaAgilent1260型液相色譜儀,配紫外檢測器;GC-6890型氣相色譜儀,配μ-ECD檢測器;食品處理機、高速勻漿機、漩渦混勻器、離心機、量筒等各種玻璃器皿。氯吡脲標樣(純度99%,DIKMA公司),分別用乙腈或丙酮配制其標樣貯備液(1000mg/L),置于20℃冰箱中保存,使用前用乙腈或丙酮稀釋至所需濃度。PSA填料、C18粉(43~60μm,Agilent公司);乙腈、甲醇和丙酮均為色譜純;無水Na2SO4、無水MgSO4(分析純)經(jīng)過550℃烘烤2h后置于干燥器中保存;氯化鈉(分析純)經(jīng)120℃烘烤2h后置于干燥器中保存。1.2氯吡脲保留時間和色譜條件液相色譜條件:KromasilC18色譜柱(250×4.6mm,5μm);流動相:A,乙腈;B,水。梯度洗脫條件:0~3min70%~40%A;5~7min20%A。后運行3min;流速:0.9mL/min;進樣量:10μL;柱溫:30℃,檢測波長265nm。在此條件下氯吡脲保留時間7.5min。氣相色譜條件:DB-608毛細管色譜柱(30m×0.53mm×1.0μm);氣化室溫度230℃,檢測器溫度300℃,柱溫程序升溫:起始70℃保持1min,以8℃/min升至110℃,再以25℃/min升至180℃保持2min,升至265℃保持2min;脈沖無分流進樣,進樣量:4μL,柱流量:8mL/min,恒流模式。在此條件下氯吡脲保留時間5.4min。1.3提取液與水層提取:稱取25g(精確至0.01g)已打碎蔬菜或瓜果樣品于250mL三角瓶中,加入25mL乙腈,在勻漿機中高速勻質(zhì)1min,將提取液過濾到預先裝有7g氯化鈉的100mL聚塞量筒中,蓋上蓋子,劇烈振搖1min后,靜置30min以上,使乙腈提取液與水分層。凈化:在小漏斗中墊少量脫脂棉,加入5g無水Na2SO4于脫脂棉上,取10mL上述提取液經(jīng)無水Na2SO4過濾到小燒杯中,在10mL帶蓋的聚四氟乙烯離心管預先裝QuEChERS填料(所有蔬菜和水果均裝有50mgPSA、100mgC18和300mgMgSO4),取2mL小燒杯中的濾液于離心管中,劇烈振蕩30s后以5000r/min離心3min,上清液過濾膜分別供液相,如用氣相色譜檢測,將乙腈置換成丙酮定容檢測。2結果與討論2.1流動相條件的確定液相色譜檢測條件下,研究了不同流動相對氯吡脲峰形和靈敏度的影響。實驗發(fā)現(xiàn)與甲醇-水流動相相比,以乙腈-水為流動相時氯吡脲的峰形和靈敏度稍有改善。在甲醇-水體系的流動相條件下,氯吡脲峰形前拖尾,影響靈敏度,最終確定以乙腈-水為流動相,其梯度條件見1.2節(jié)。在上述儀器條件下,氯吡脲標準溶液、空白樣品和樣品加標的色譜圖見圖1;氣相色譜檢測條件下,考察了SPB-17、DB-1、DB-608、DB-5幾種不同類型的毛細管色譜柱對凈化后的樣品峰形和靈敏度的影響,結果顯示,以大口徑(0.53mm)的DB-608、SPB-17毛細管色譜柱檢測效果較好,色譜圖見圖2。2.2凈化方法對氯吡哌回收率的影響對蔬菜、瓜果中的氯吡脲開展殘留分析時,涉及的凈化手段主要有Florsil固相萃取小柱、氨基固相萃取小柱、QuEChERS凈化。氨基柱凈化回收率不太穩(wěn)定,其它兩種凈化方法均可,但由于QuEChERS凈化方法簡單、快速、經(jīng)濟,本文選用該方法凈化并對PSA用量進行優(yōu)化。實驗發(fā)現(xiàn)當PSA用量為50~200mg時,氯吡脲回收率變化不大,考慮到成本,所以本研究采用50mgPSA進行實驗。樣品提取液在凈化試劑加入前經(jīng)過脫水處理有利于提高凈化試劑的凈化效果。2.3氯吡脲標準曲線的繪制取1mL氯吡脲標準儲備液于100mL容量瓶中,用乙腈或丙酮定容至刻度,得到10mg/L的稀釋標樣,然后再將其稀釋為0.01~1.0mg/L的氯吡脲系列標準溶液,按照1.2節(jié)的色譜條件進樣,保留時間定性,以氯吡脲質(zhì)量濃度(x)為橫坐標,以相應的峰面積(y)為縱坐標,得到不同儀器檢測條件下氯吡脲的線性方程。液相色譜條件下為:y=174.36x+0.1352,r2=1;氣相色譜條件下為:y=418354x+26686,r2=0.9999。說明氣相和液相色譜都能對氯吡脲進行定量分析。2.4回收率和變異系數(shù)對樣品殘留定量分析的影響分別用氣相和液相色譜對氯吡脲在黃瓜、番茄和西瓜空白樣品中進行了3個水平的加標回收率實驗,每個水平進行了5次重復,所有實驗結果都根據(jù)基質(zhì)效應的實際影響作了相應的校正。結果見表1、表2?？梢?液相檢測時回收率變異系數(shù)較小,說明方法重現(xiàn)性較好,而氣相檢測的數(shù)據(jù)變異系數(shù)稍大,說明用氣相檢測時,儀器對氯吡脲的檢測方法重現(xiàn)性稍差?？傮w來看,無論用氣相還是液相檢測氯吡脲,方法回收率和變異系數(shù)都符合要求,能滿足蔬菜瓜果中氯吡脲殘留定量分析的要求。按信噪比(S/N)=3計算該方法對氯吡脲的檢出限均為0.01mg/kg。2.5回收率和基質(zhì)效應用液相色譜UV檢測器檢測樣品中的氯吡脲時,0.1mg/L以下低濃度的氯吡脲在黃瓜基質(zhì)液中有輕度基質(zhì)增強效應表現(xiàn),高濃度時基質(zhì)效應表現(xiàn)不明顯。如用低濃度做添加回收率結果有偏高的趨勢,而添加0.5mg/L的回收率均在正常范圍;西瓜和番茄樣品檢測中基質(zhì)效應不明顯,具體情況見表1的添加回收率實驗結果。表1中西瓜和番茄的實驗結果均是用純乙腈標樣定量的,黃瓜實驗結果是用空白黃瓜基質(zhì)溶液配制標樣校正的結果。由此,在進行氯吡脲實際樣品檢測時應注意檢查不同樣品的基質(zhì)效應并進行必要的校正。相反,用氣相色譜μ-ECD檢測蔬菜瓜果中氯吡脲殘留時,樣品檢測液中氯吡脲表現(xiàn)出較強的基質(zhì)衰減效應。如用μ-ECD測西瓜空白基質(zhì)溶液中濃度為0.5mg/L氯吡脲的峰面積僅為純?nèi)軇┲型瑯訚舛嚷冗岭宸迕娣e的54%。由此可以看出,用氣相檢測時氯吡脲的這種基質(zhì)效應對部分樣品的檢測靈敏度有一定的影響。3腈提取、quehens凈化、吹后凈化本文建立了液相色譜