糖的呈色反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)一糖的呈色反響和定性鑒定1精品課件目的要求

學(xué)習(xí)鑒定糖類及區(qū)分酮糖和醛糖的方法了解鑒定復(fù)原糖的方法及其原理2精品課件糖相關(guān)知識(shí)單糖中的果糖是酮糖，而葡萄糖是醛糖。所有的單糖都是復(fù)原糖；復(fù)原性的二糖有乳糖和麥芽糖，蔗糖是非復(fù)原性二糖。3精品課件糖的呈色反響和定性鑒定Ⅰ.Molish反響——α-萘酚反響Ⅱ.蒽酮反響Ⅲ.酮糖的Seliwanoff反響Ⅳ.Fehling試驗(yàn)Ⅴ.Benedict試驗(yàn)Ⅵ.Barfoed試驗(yàn)4精品課件I、Molish反響——α-萘酚反響實(shí)驗(yàn)原理:糖在濃硫酸或濃鹽酸的作用下脫水形成糠醛及其衍生物與α-萘酚作用形成紫紅色復(fù)合物，在糖液和濃硫酸的液面間形成紫環(huán)，因此又稱紫環(huán)反響?？啡┳霞t色復(fù)合物5精品課件Molish反響α-萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比較穩(wěn)定，其靈敏度與α-萘酚一樣。單糖、雙糖、多糖一般都發(fā)生此反響，但氨基糖不發(fā)生此反響。丙酮、甲酸、乳酸、草酸、葡萄糖醛酸、各種醛糖衍生物、甘油醛等均產(chǎn)生近似的顏色反響。因此，陰性反響證明沒有糖類物質(zhì)的存在；而陽性反響，那么說明有糖存在的可能性，需要進(jìn)一步通過其他糖的定性試驗(yàn)才能確定有糖的存在。Molish反響非常靈敏，0.001％葡萄糖和0.0001％蔗糖即能呈現(xiàn)陽性反響。因此，不可在樣品中混入紙屑等雜物。當(dāng)果糖濃度過高時(shí)，由于濃硫酸對(duì)它的焦化作用，將呈現(xiàn)紅色及褐色而不呈紫色，需稀釋后再做。6精品課件Molish反響操作方法取試管，編號(hào)，分別參加各待測(cè)糖溶液1mL，然后加兩滴Molish試劑，搖勻。傾斜試管，沿管壁小心參加約1mL濃硫酸，切勿搖動(dòng)，小心豎直后仔細(xì)觀察兩層液面交界處的顏色變化。用水代替糖溶液，重復(fù)一遍，觀察結(jié)果。7精品課件II、蒽酮反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)原理:糖經(jīng)濃酸作用后生成的糠醛及其衍生物與蒽酮〔10-酮-9，10-二氫蒽〕作用生成藍(lán)綠色復(fù)合物。該復(fù)合物在630nm有最大的吸收峰，并且在一定范圍內(nèi)，顏色與糖量的多少成正比，該方法可以用于測(cè)定幾乎所有碳水化合物的含量，包括戊糖、己糖，多糖等。在測(cè)定水溶性碳水化合物含量時(shí)切勿將未溶解的沉淀局部混入試劑中，否那么會(huì)將細(xì)胞壁中的纖維和半纖維素混入樣品，造成所測(cè)定值的升高。不同的糖類與蒽酮試劑反響后的顏色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖和甘露糖較淺，五碳糖更淺，故在測(cè)定混合糖的含量時(shí)會(huì)應(yīng)為混合物中不同糖的比例不同造成誤差。在測(cè)定單一糖類的時(shí)候可防止此類的誤差。8精品課件蒽酮反應(yīng)操作方法取試管，編號(hào)，均參加1ml蒽酮溶液，再向各管滴加2~3滴待測(cè)糖溶液，充分混勻，觀察各管顏色變化并記錄。9精品課件III、酮糖的Seliwanoff反響

〔西列瓦諾夫反響〕實(shí)驗(yàn)原理:酮糖在酸的作用下較醛糖更易生成羥甲基糠醛。后者與間苯二酚作用生成鮮紅色復(fù)合物，反響僅需20-30秒。醛糖在濃度較高時(shí)或長時(shí)間煮沸，才產(chǎn)生微弱的陽性反響。該反響是鑒定酮糖的特殊反響。果糖與Seliwanoff試劑反響非常迅速，呈鮮紅色，而葡萄糖所需時(shí)間較長，且只能產(chǎn)生黃色至淡黃色。戊糖亦與Seliwanoff試劑反響，戊糖經(jīng)酸脫水生成糠醛，與間苯二酚縮合，生成綠色至藍(lán)色產(chǎn)物。酮根本身沒有復(fù)原性，只有在變成烯醇式后，才顯示復(fù)原作用。10精品課件酮糖的Seliwanoff反響操作方法取試管，編號(hào)，各參加Sediwanoff試劑1mL，再依次分別參加待測(cè)糖溶液各4滴，混勻，同時(shí)放入沸水浴中，比較各管顏色的變化過程。11精品課件IV、Fehling試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)原理:費(fèi)林試劑是含有硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。硫酸銅與堿溶液混合加熱，那么生成黑色的氧化銅沉淀。假設(shè)同時(shí)有復(fù)原糖存在，那么產(chǎn)生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。由于沉淀的速度不同，而形成的顆粒大小也不同，顆粒大的為紅色，顆粒小的為黃色。為防止銅離子和堿反響生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀，F(xiàn)ehlin試劑中參加酒石酸鉀鈉，它與Cu2＋形成的酒石酸鉀鈉絡(luò)合銅離子是可溶性的絡(luò)離子，該反響是可逆的。平衡后溶液內(nèi)保持一定濃度的氫氧化銅。費(fèi)林試劑是一種弱的氧化劑，它不與酮和芳香醛發(fā)生反響。12精品課件將一定量的甲液和乙液等體積混合時(shí)，硫酸銅與氫氧化鈉反響，生成氫氧化銅沉淀：2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+Na2SO4Fehling試驗(yàn)反響過程在堿性溶液中，所生成的氫氧化銅沉淀與酒石酸鈉反響，生成可溶性的絡(luò)合物酒石酸鉀鈉銅：在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的復(fù)原糖與酒石酸鉀鈉銅反響，酒石酸鉀鈉銅被復(fù)原糖復(fù)原，產(chǎn)生紅色氧化亞銅沉淀，其反響如下：糖酸13精品課件Fehling試驗(yàn)操作方法取試管，編號(hào)，各參加Fehlin試劑甲和乙1mL。搖勻后，分別參加4滴待測(cè)糖溶液，置沸水浴中加熱2~3min，取出冷卻，觀察沉淀和顏色變化。14精品課件V、Benedict試驗(yàn)

〔本尼迪特試驗(yàn)〕實(shí)驗(yàn)原理：Benedict試劑是Fehling試劑的改進(jìn)。Benedict試劑利用檸檬酸作為Cu2+的絡(luò)合劑，其堿性較Fehling試劑弱，靈敏度高，干擾因素少。15精品課件Benedict試驗(yàn)操作方法取試管，編號(hào)，分別參加2mLBenedict試劑和4滴待測(cè)糖溶液，沸水浴中加熱5分鐘，取出后冷卻，觀察各管中的顏色變化。16精品課件VI、Barfoed試驗(yàn)

〔巴弗德氏試劑〕實(shí)驗(yàn)原理：在酸性溶液中，單糖和復(fù)原二糖的復(fù)原速度有明顯差異。Barfoed試劑為弱酸性。單糖在Barfoed試劑的作用下能將Cu2+復(fù)原成磚紅色的氧化亞銅，時(shí)間約為3分鐘，而復(fù)原二糖那么需20分鐘左右。所以，該反響可用于區(qū)別單糖和復(fù)原二糖。當(dāng)加熱時(shí)間過長，非復(fù)原性二糖經(jīng)水解后也能呈現(xiàn)陽性反響。復(fù)原二糖：麥芽糖、乳糖、纖維二糖17精品課件Barfoed試驗(yàn)操作方法取試管，編號(hào)，分別參加2mLBarfoed試劑和2~3滴待測(cè)糖溶液，煮沸2-3分鐘，放置20分鐘以上，比較各管的顏色變化。18精品課件思考題

列表總結(jié)和比較本實(shí)驗(yàn)六種顏色反響的原理和應(yīng)用。運(yùn)用本實(shí)驗(yàn)的方法，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)