槐米中蘆丁和槲皮素的測(cè)定

槐米中蘆丁和槲皮素的測(cè)定

蝗蟲是豆科植物的一種干燥的花蕾，主要有效的成分是黃酮類化合物，如蘆丁和蚱。可采用蘆丁為對(duì)照以紫外分光光度法測(cè)定槐米中的總黃酮量,也可用薄層色譜法或高效液相色譜法測(cè)定槐米中蘆丁或槲皮素含量,但用薄層色譜法同時(shí)測(cè)定槐米中的蘆丁和槲皮素的含量則未見報(bào)道。本文用薄層色譜掃描法分離和測(cè)定了槐米中的蘆丁和槲皮素。1材料和機(jī)器1.1化學(xué)試劑與試劑CS-9301型雙波長(zhǎng)薄層掃描儀(日本島津公司);UV-1型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);聚酰胺薄膜片(浙江臺(tái)州四青生化材料廠);蘆丁、槲皮素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);十二烷基硫酸鈉(SDS)為上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站日本進(jìn)口分裝;其他試劑均為分析純;槐米樣品為廣州市市售,由本院生藥教研室鑒定。1.2并定容液濃度精密稱取蘆丁對(duì)照品20.01mg,加甲醇溶解并定容至10mL,濃度為2.001mg/mL。精密稱取槲皮素對(duì)照品20.04mg,加甲醇溶解并定容至20mL,濃度為1.002mg/mL。1.3鉻層的分離和掃描條件1.3.1展開劑上展開用定量毛細(xì)管吸取供試液,于聚酰胺薄膜上點(diǎn)樣,以微乳液十二烷基硫酸鈉-正丁醇-正己烷-水-甲酸(0.27∶0.63∶0.10∶3∶0.2)為展開劑上行展開,展程約10cm。取出晾干,均勻噴灑1%三氯化鋁乙醇溶液,晾干后置365nm紫外燈下檢視,蘆丁與槲皮素能與其他組分完全分離,槲皮素的Rf值雖然較低,但亦能與原點(diǎn)完全分離,可進(jìn)行定量分析(見圖1)。1.3.2掃描條件雙波長(zhǎng)反射鋸齒形掃描,λS=370nm,λR=550nm,散射參數(shù)SX=3,以峰面積隨行外標(biāo)二點(diǎn)法定量。2結(jié)果2.1水?dāng)嚢韬退芤褐苽湮⑷橐旱闹苽浞椒?十二烷基硫酸鈉-正丁醇-正己烷按重量比0.27∶0.63∶0.10取樣,并加一定比例的水?dāng)嚢枞芙饣靹?放置24h。在微乳液的制備中,水量的多少?zèng)Q定了微乳液的結(jié)構(gòu)為O/W或W/O,對(duì)分離結(jié)果的影響很大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)含水為75%(O/W)型時(shí),槐米中黃酮類成分的分離效果最佳,而如在展開劑中加少量甲酸,能改善拖尾,實(shí)現(xiàn)更佳的分離結(jié)果,最后選擇含水75%微乳液-甲酸(100∶5)的混合溶液為展開劑。2.2點(diǎn)樣量xg線性回歸精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液0.1,0.3,0.6,0.9,1.2,1.5μL,依次點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜片上,按選定的條件展開,掃描測(cè)定,以掃描峰面積值Y對(duì)點(diǎn)樣量X(μg)線性回歸,得回歸方程:Y=143.2+1598.6X,r=0.999,蘆丁點(diǎn)樣量在0.2～3.0μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。精密吸取槲皮素對(duì)照品溶液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0μL,依次點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜片上,按選定的條件展開,掃描測(cè)定,以掃描峰面積值Y對(duì)點(diǎn)樣量X(μg)線性回歸,得回歸方程:Y=123.7+1253.2X,r=0.998,槲皮素點(diǎn)樣量在0.1～1.0μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.3對(duì)照品穩(wěn)定性在同一聚酰胺薄膜上分別點(diǎn)蘆丁對(duì)照品溶液與槲皮素對(duì)照品溶液各0.5μL,展開后每隔30min掃描一次,持續(xù)3h,兩者的峰面積基本不變,穩(wěn)定性良好。2.4蘆丁、槲皮素含量的測(cè)定在同一聚酰胺薄膜片上分別點(diǎn)蘆丁對(duì)照品溶液、槲皮素對(duì)照品溶液各6點(diǎn),點(diǎn)樣量均為0.5μL,依法展開,測(cè)定,得蘆丁、槲皮素含量的RSD分別為1.1%和1.3%。2.5含量測(cè)定精密稱取干燥至恒重的槐米粉末約200mg,置50mL容量瓶中,加入甲醇至刻度,浸泡1h,再超聲提取30min,放至室溫并補(bǔ)充超聲過(guò)程中損失的甲醇到刻度,過(guò)濾,取續(xù)濾液為供試品溶液。吸取供試品溶液2μL點(diǎn)樣,隨行點(diǎn)蘆丁對(duì)照品溶液0.6,1.5μL,槲皮素對(duì)照品溶液0.1,0.4μL,依法展開,掃描,以外標(biāo)兩點(diǎn)法定量。測(cè)定同一槐米粉末6份。測(cè)得蘆丁平均含量22.96%,RSD為1.6%;槲皮素平均含量1.58%,RSD為1.8%。2.6加樣回收率試驗(yàn)取槐米粉末6份,每份約100mg,分別精密稱定,加入蘆丁約25mg,槲皮素對(duì)照溶液(1.002mg/mL)1.5mL(相當(dāng)于槲皮素1.50mg),按上法進(jìn)行操作,得回收率供試液,依法測(cè)得蘆丁平均回收率98.8%,RSD為1.7%;槲皮素平均回收率97.1%,RSD為2.0%。2.7重量測(cè)定依法對(duì)3份槐米樣品進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見表2。3蘆丁和槲皮素含量測(cè)定本法分離選擇性好,分離效率高,能很好地分離槐米