液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用

對(duì)于具有相同或一致質(zhì)量分析的液相鉻ct質(zhì)量分析（lc-ms），是在液相鉻ct質(zhì)量分析的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。對(duì)分離對(duì)象化合物進(jìn)行層析成像，然后對(duì)分離成分的質(zhì)量分析進(jìn)行多層面質(zhì)量分析。它集液相色譜的高分離效能與質(zhì)譜的高鑒定性能于一體,對(duì)研究對(duì)象有足夠的靈敏度、選擇性,分析快速且方便,具有其他分析方法所不能比擬的優(yōu)點(diǎn)。LC-MS/MS可以直接分析不揮發(fā)性化合物、極性化合物、熱不穩(wěn)定化合物和大分子化合物,分析范圍廣,樣品前處理簡(jiǎn)便,是目前最重要的分離分析方法之一,在藥學(xué)研究方面的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。美國(guó)的JemalM綜述了其在藥物研究中進(jìn)行高通量生物分析的發(fā)展,LC-MS/MS在國(guó)內(nèi)的應(yīng)用亦得到了飛速發(fā)展,本資料對(duì)2008-2009年的國(guó)內(nèi)應(yīng)用報(bào)道進(jìn)行綜述。1阿奇毒素的藥動(dòng)學(xué)近年來(lái)LC-MS/MS已較廣泛地用于血藥濃度測(cè)定、藥動(dòng)學(xué)和生物利用度研究。潘杰等建立了適用于藥動(dòng)學(xué)及生物等效性研究的頭孢拉定血漿濃度LC-MS/MS快速分析方法,頭孢拉定和內(nèi)標(biāo)阿昔洛韋的保留時(shí)間分別為1.03,1.04min,分析時(shí)間僅需2min。頭孢拉定的血漿質(zhì)量濃度在0.1～30.0mg·L-1范圍內(nèi)線性良好,定量下限為0.1mg·L-1,日內(nèi)RSD小于3.90%,日間RSD小于14.90%,方法回收率在107.60%～108.70%。趙曦等報(bào)道了LC-MS/MS測(cè)定人血漿中頭孢克洛的方法。血漿樣品經(jīng)沉淀蛋白處理后,用AllureC18柱(50mm×416mm,5μm)分離,乙腈-1%甲酸(20∶80)為流動(dòng)相;采用三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜,電噴霧離子源,以正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行定量分析。血漿中頭孢克洛的線性范圍為0.01～10.00mg·L-1,定量下限為0.01mg·L-1,回收率為79.6%～83.2%,日內(nèi)、日間RSD均小于3.5%。所建方法快速(分析用時(shí)2min)、專屬、靈敏、準(zhǔn)確,適用于頭孢克洛藥動(dòng)學(xué)的研究。劉茜等建立了測(cè)定人體內(nèi)阿奇霉素血藥濃度的HPLC-MS/MS方法,用于研究阿奇霉素分散片人體藥動(dòng)學(xué)。在選定的HPLC-MS/MS條件下阿奇霉素與內(nèi)標(biāo)及血漿雜質(zhì)分離良好,在1.0～1000μg·L-1的范圍內(nèi)線性良好,回收率為88.7%～113.2%,日內(nèi)和日間RSD均小于15%。李鵬飛等建立了快速、靈敏、專屬性強(qiáng)的LC-MS/MS法測(cè)定全血中他克莫司(FK506)的濃度。由于大環(huán)內(nèi)酯類新型免疫抑制劑他克莫司的治療窗窄,患者個(gè)體間和個(gè)體自身藥動(dòng)學(xué)的差異大,臨床應(yīng)用時(shí)需要進(jìn)行嚴(yán)密監(jiān)測(cè)。該方法選用Shim-packVP-ODS色譜柱(150mm×416mm,5μm),以乙腈-10mmol·L-1醋酸銨為流動(dòng)相,采用梯度洗脫進(jìn)行分離。樣品用乙腈進(jìn)行蛋白沉淀后進(jìn)樣,選用3200QTRAP型質(zhì)譜儀的多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描方式檢測(cè)。FK506的線性范圍為0.1～25.0μg·L-1,定量下限和最低檢測(cè)限分別為0.1和0.05μg·L-1,方法日間、日內(nèi)RSD均小于15%,方法提取回收率均接近100.0%,穩(wěn)定性較好,研究者已成功運(yùn)用于對(duì)中國(guó)健康受試者生物等效性研究。徐曉燕等采用HPLC-MS/MS法測(cè)定人血漿中色甘酸鈉濃度,進(jìn)行其滴鼻液和鼻用噴霧劑的藥動(dòng)學(xué)研究并評(píng)價(jià)其生物等效性。采用高效液相分離系統(tǒng),流動(dòng)相為醋酸銨-甲醇(含50%乙腈)(15∶85),固定相為AGTVenusilXBPC18(250mm×416mm,5μm)色譜柱。在0.3～20μg·L-1色甘酸鈉血藥濃度呈線性關(guān)系,定量限為0.3μg·L-1,回收率在94.1%以上,日內(nèi)、日間的RSD均小于14.3%。單劑量給藥色甘酸鈉鼻用噴霧劑或滴鼻液,其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)t1/2分別為(1.82±0.54)和(1.59±0.52)h;tmax分別為(0.47±0.12)和(0.44±0.15)h;Cmax分別為(9.79±4.66)和(10.88±4.05)μg·L-1,AUC0-5h分別為(11.52±3.46)和(12.63±4.23)ng·mL-1·h。色甘酸鈉鼻用噴霧劑相對(duì)生物利用度Fr為(93.6±13.8)%。2008年以來(lái)國(guó)內(nèi)采用電噴霧離子化(ESI)和選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)或多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)方式進(jìn)行體液中藥物定量監(jiān)測(cè),見表1。2陰道檢測(cè)方法濫用的藥物通常包括麻醉性鎮(zhèn)痛藥、精神興奮劑和鎮(zhèn)靜催眠藥等。由于濫用藥物的危害極大,目前已得到了國(guó)際社會(huì)廣泛的關(guān)注和高度重視,相關(guān)的濫用藥物分析測(cè)定技術(shù)亦進(jìn)行了深入的研究和開發(fā),LC-MS/MS在濫用藥物的檢測(cè)中同樣具有廣闊的應(yīng)用前景。卓先義等采用LC-MS/MS同時(shí)檢測(cè)吸食大麻者尿液中四氫大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、大麻酚(CBN)和四氫大麻酸(THC-COOH)的含量。大麻中的化學(xué)成分多且復(fù)雜,THC、CBD和CBN是其主要成分,其中THC是最主要的精神活性成分,在動(dòng)物和人體中都顯示較強(qiáng)的生理活性作用。THC-COOH是THC的主要體內(nèi)代謝物,在體內(nèi)大部分迅速形成葡萄糖結(jié)合物。尿液中THC-COOH的檢測(cè)是目前確證吸食大麻的主要證據(jù),同時(shí)分析大麻酚類和THC-COOH更可幫助判斷吸食時(shí)間,完善分析結(jié)果的推斷與解釋。文獻(xiàn)報(bào)道的該方法延長(zhǎng)尿液中THC-COOH的檢測(cè)時(shí)限,具有特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn),分析范圍廣,前處理簡(jiǎn)便,無(wú)需衍生化,已應(yīng)用于實(shí)際案件。閆志偉等采用OASISMCX固相萃取柱進(jìn)行提取,應(yīng)用LC-MS/MS方法進(jìn)行檢測(cè),運(yùn)用保留時(shí)間和MRM方式對(duì)尿液中嗎啡類藥物及其代謝物進(jìn)行定性定量分析。嗎啡類藥物主要包括嗎啡、可待因、海洛因及其代謝物單乙酰嗎啡(MAM)、葡萄糖醛酸嗎啡(M3G)等。結(jié)果在磷酸鹽緩沖液pH4.0時(shí),海洛因、MAM、可待因、嗎啡、M3G的固相萃取回收率分別達(dá)64.33%～70.21%,96.95%～117.57%,83.60%～123.63%,68.82%～91.03%,94.64%～107.33%;線性范圍0.005～10g·L-1;相關(guān)系數(shù)分別為0.9998,0.9958,0.9992,0.9994,0.9997。賈晶瑩等建立了一種可同時(shí)測(cè)定目前臨床和實(shí)際刑事案例中經(jīng)常遇到的19種濫用藥物尿樣中濃度的LC-MS/MS法,最低檢出限(LOD)在1～100μg·L-1范圍,其中84.21%目標(biāo)物的LOD≤50μg·L-1,52.63%目標(biāo)物的LOD≤10μg·L-1,應(yīng)用該方法,成功對(duì)141例藥物依賴性患者的尿樣中濫用藥物進(jìn)行了定量檢測(cè)。3溴敵隆的hplc-ms/ms法毒性中藥(馬錢子堿、烏頭堿等)、殺鼠藥、有機(jī)磷農(nóng)藥和鎮(zhèn)靜安眠藥等藥物中毒多見于自殺、謀殺和臨床用藥過(guò)量,快速、靈敏、特異地定量分析生物檢材中中毒藥物含量對(duì)于臨床搶救和法庭調(diào)查中的死因判斷均非常重要。王朝虹等建立定量分析人全血中馬錢子堿的LC-MS/MS法。實(shí)驗(yàn)應(yīng)用OasisMCX小柱進(jìn)行固相萃取法提取,XTerraRP18色譜柱分離,在該條件下,人血中馬錢子堿的線性范圍為0.01～5.0mg·L-1,LOD為0.2μg·L-1。趙海雨等建立了全血中測(cè)定第一代羥基香豆素類抗凝血?dú)⑹髣╀鍞陈〉腍PLC-ESI-MS/MS法。血液樣品經(jīng)乙醚提取后,采用UltraC18柱(150mm×2.1mm,5μm)流動(dòng)相:甲醇;流速:200μL·min-1;在負(fù)離子模式下,通過(guò)電噴霧電離(ESI),多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)測(cè)定,外標(biāo)法定量分析溴敵隆。在0.1～50μg·L-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。溴敵隆的回收率為94.34%(RSD為7.3%),定量檢出限為0.028ng。王賢親等建立了能同時(shí)測(cè)定血漿中氯氮平、奧氮平和米氮平的LC-MS/MS方法。血漿中的氯氮平、奧氮平、米氮平用乙醚液-液萃取,采用AgilentZorbaxSB-C18柱(2.1mm×150mm,5μm),電噴霧離子源,正離子檢測(cè),多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行定量分析,卡馬西平作為內(nèi)標(biāo)。結(jié)果氯氮平、奧氮平和米氮平的檢測(cè)限分別為0.45,0.92,0.41μg·L-1,質(zhì)量濃度在10.0～2000.0μg·L-1范圍內(nèi)線性良好(r≥0.9924),平均萃取回收率在65.7%～94.2%,日內(nèi)、日間精密度RSD≤6%。作者還分別報(bào)道了同時(shí)測(cè)定人血漿中5種有機(jī)磷的含量和同時(shí)測(cè)定人血漿中的7種苯二氮芯卓類藥物的LC-MS/MS方法。在一般液相色譜的情況下,樣品沒有得到完全分離,無(wú)法進(jìn)行定量,可在LC-MS/MS的情況下,選擇不同的離子通道進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析,則可對(duì)保留時(shí)間接近的物質(zhì)分別進(jìn)行定量,目標(biāo)物的特征碎片區(qū)別明顯,同時(shí)測(cè)定多種目標(biāo)物是LC-MS/MS高選擇性的典型示例。報(bào)道的這些方法均適用于法庭與臨床毒物分析。4lc-ms/ms分析從所整理的文獻(xiàn)可以看出,LC-MS/MS的檢測(cè)水平基本上都在ng·mL-1,靈敏度較傳統(tǒng)的HPLC-UV高3～4個(gè)數(shù)量級(jí)。常規(guī)的HPLC分析時(shí),被測(cè)藥物與內(nèi)源性等物質(zhì)在色譜保留上達(dá)到完全分離,一個(gè)樣品分析時(shí)間通常為10～30min,而LC-MS/MS采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)或多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)技術(shù)選擇與待測(cè)組分相