常見致病菌檢驗-致瀉大腸埃希菌檢驗

病原學(xué)特性細菌性食物中毒條件性致病菌食物中毒條件致病菌一般情況下不引起發(fā)病，只有當(dāng)它們在食物中繁殖到相當(dāng)數(shù)量時才可能引起食物中毒，主要包括有大腸桿菌、變形桿菌和魏氏梭菌。（一）大腸桿菌食物中毒

1.生物學(xué)特性大腸桿菌為腸道正常菌群，一般不致病，而且還能合成維生素B和K，產(chǎn)生大腸菌素，對機體有利。但有些致病性大腸桿菌能產(chǎn)生內(nèi)毒素和腸毒素引起食物中毒。大腸桿菌屬G-兩端鈍圓的短桿菌，近似球形，周生鞭毛，能運動，無芽孢，有些能形成莢膜，好氧或兼性厭氧，最適生長溫度為40℃，pH為4.3-9.5。

細菌性食物中毒條件性致病菌食物中毒（一）大腸桿菌食物中毒

1.生物學(xué)特性在伊紅一美蘭瓊脂類平板上可形成紫黑色帶有金屬光澤的菌落。致病性大腸桿菌和非致病性大腸桿菌在形態(tài)上和生物學(xué)特性上難以區(qū)分，只能從抗原性不同來區(qū)分。大腸桿菌有三種抗原，即菌體抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）和莢膜抗原（K抗原）。莢膜抗原又分為A、B、L三類。一般有K抗原的菌株比沒有K抗原的菌株毒力強，而致病性大腸桿菌的K抗原主要為B抗原，少數(shù)為L抗原。大腸桿菌平板菌落圖及革蘭氏染色顯微形態(tài)圖

大腸桿菌EMB平板菌落形態(tài)照片細菌性食物中毒條件性致病菌食物中毒（一）大腸桿菌食物中毒2.中毒癥狀及原因病原性大腸桿菌引起食物中毒的主要癥狀是急性胃腸炎，但較沙門氏菌輕。有嘔吐、腹瀉，大便呈水樣便、軟便或粘液便，重癥有血便。腹瀉次數(shù)每日達10次以內(nèi)，常伴有發(fā)熱、頭痛等癥狀。病程較短，1-3天即可恢復(fù)。潛伏期為2-20hr，一般4-6hr。通常病原性大腸桿菌的菌數(shù)平均在107cfu/g才能引起急性胃腸炎。食物中毒的機制目前還不是十分清楚的。

細菌性食物中毒三條件性致病菌食物中毒（一）大腸桿菌食物中毒

大腸桿菌主要存在于人和動物腸道內(nèi)，隨糞便排出，分布于自然界，如空氣、水、土壤、食品等處。本菌污染食品的途徑與沙門氏菌污染食品的情況相同。近年來大腸桿菌O157:H7（出血性大腸桿菌）引起了廣泛的關(guān)注。它是20世紀(jì)80年代被微生物專家發(fā)現(xiàn)的一種新的腸道病原菌。該菌引起的中毒1982年首次在美國爆發(fā);1984年在日本發(fā)現(xiàn)可引起腹瀉的病例；1996年夏季在日本大規(guī)模流行。致瀉大腸埃希氏菌及其檢驗一、目的與要求1、學(xué)習(xí)掌握致瀉性大腸埃希氏菌檢驗的基本原理和方法；2、了解動物性食品檢驗致瀉性大腸埃希氏菌的意義。二、生物學(xué)特性俗稱大腸桿菌1、革蘭氏陰性菌2、桿狀、兩端鈍圓、周生鞭毛、無莢膜3、需氧及兼性厭氧4、能在普通瓊脂上生長普通大腸埃希氏菌EscherichiaColi掃描照片三、污染途徑污染水源和土壤，進而污染食物肉類食品乳制品水產(chǎn)品等四、致病性

腸道內(nèi)感染腹瀉、食物中毒、腸熱癥腸道外感染鼠疫（烈性傳染病）、泌尿道感染、肺炎、腦膜炎、傷口化膿、敗血癥物學(xué)檢驗五、微生檢樣25g+營養(yǎng)肉湯225mL乳糖發(fā)酵陽性的發(fā)酵管36℃±1℃6h腸道菌增菌肉湯麥康凱EMB36℃±1℃18h~24h乳糖發(fā)酵或不發(fā)酵的菌落3個~5個，氧化酶—，革蘭氏陰性桿菌TSI、靛基質(zhì)、pH7.2尿素KCN、賴氨酸、動力TSI底層+，H2S—，KCN—，尿素—血清學(xué)試驗非左述的各種反應(yīng)結(jié)果非大腸埃希氏菌報告（一）檢驗步驟檢樣→樣品處理→增菌培養(yǎng)→伊紅美藍（EMB）平板分離培養(yǎng)→生化鑒定→血清學(xué)鑒定→報告1、增菌培養(yǎng)以無菌手續(xù)稱取檢樣25

g，加在225

mL營養(yǎng)肉湯中，以均質(zhì)器打碎1

min或用乳缽加滅菌砂磨碎。取出適量，接種乳糖膽鹽培養(yǎng)基，以測定大腸菌群MPN，其余的移入500

mL廣口瓶內(nèi)，于36±1℃培養(yǎng)6

h。挑取1

環(huán)，接種于

1管30

mL腸道菌增菌肉湯內(nèi)，于

42℃培養(yǎng)

18

h。2、分離培養(yǎng)

將乳糖發(fā)酵陽性的乳糖膽鹽發(fā)酵管和增菌液分別劃線接種麥康凱或伊紅美藍瓊脂平板；污染嚴重的檢樣，可將檢樣勻液直接劃線接種麥康凱或伊紅美藍平板，于36±1℃培養(yǎng)18～24

h，觀察菌落。不但要注意乳糖發(fā)酵的菌落，同時也

要注意乳糖不發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的菌落。EMB培養(yǎng)基黑紫色或紫紅色，圓形，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤。菌落特征：3、生化檢驗

自鑒別平板上直接挑取數(shù)個菌落分別接種三糖鐵瓊脂（TSI）或克氏雙糖鐵瓊脂（KI）。同時將這些培養(yǎng)物分別接種蛋白胨水、半固體、pH7.2

尿素瓊脂、KCN

肉湯和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基。以上培養(yǎng)物均在

36℃培養(yǎng)過夜。TSI斜面產(chǎn)酸或不產(chǎn)酸,底層產(chǎn)酸,H2S陰性,KCN陰性和尿素陰性的培養(yǎng)物為大腸埃希氏菌.TSI底層不產(chǎn)酸或H2S、KCN、尿素有任何一項為陽性的培養(yǎng)物，均非大腸埃希氏菌。必要時做氧化酶實驗或革藍氏染色鏡檢。

三糖鐵瓊脂試驗：只能利用葡萄糖的細菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細菌，則產(chǎn)生大量的酸，使整個培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。細菌分解含硫氨基酸，產(chǎn)生H2S，與FeSO4發(fā)生反應(yīng)形成FeS。靛基質(zhì)試驗：細菌分解蛋白質(zhì)中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，吲哚與對二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而成紅色。脲酶試驗：細菌分解尿素產(chǎn)生兩分子氨，使培養(yǎng)基pH升高，指示劑酚紅顯示出紅色，即證明細菌有脲酶。動力試驗：有動力的細菌會沿著穿刺線擴散生長。賴氨酸脫羧試驗：細菌從賴氨酸脫去羧基（-COOH），導(dǎo)致培養(yǎng)基pH變堿，指示劑溴麝香草酚藍就顯示出藍色，試驗結(jié)果為陽性，如果細菌不能脫酸，培養(yǎng)基不變則為黃色。4、血清學(xué)試驗

假定試驗：挑取經(jīng)生化試驗證實為大腸埃希菌的瓊脂培養(yǎng)物，用致病性大腸埃希氏菌、

侵襲性大腸埃希氏菌和產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌多價O

血清和出血性大腸埃希氏菌

O157

血清做玻片凝集試驗。當(dāng)與某一種多價

O

血清凝集時，再與該多價血清所包含的單價O血清做試驗。

致瀉大腸埃希氏菌所包括的

O抗原群。如與某一單價

O

血清呈現(xiàn)強凝集反應(yīng)，即為假定試驗陽性。多價血清單價血清單價血清單價血清單價血清OK多價1O55：K59（B5）O86：K61（B7）O111：K58（B4）O127a：K63（B8）OK多價2O26：K60（B6）O125：K70（B15）O126：K71（B16）O128：K67（B12）OK多價3O44：K74（L）O114：K90（B）O119：K69（B14）O142：K86（B）5、結(jié)果報告

根據(jù)以上生化試驗和血清學(xué)試驗結(jié)果作出報告。

致瀉大腸埃希氏菌食物中毒細菌性食物中毒三條件性致病菌食物中毒條件致病菌一般情況下不引起發(fā)病，只有當(dāng)它們在食物中繁殖到相當(dāng)數(shù)量時才可能引起食物中毒，主要包括有大腸桿菌、變形桿菌和魏氏梭菌。（一）大腸桿菌食物中毒

1.生物學(xué)特性大腸桿菌為腸道正常菌群，一般不致病，而且還能合成維生素B和K，產(chǎn)生大腸菌素，對機體有利。但有些致病性大腸桿菌能產(chǎn)生內(nèi)毒素和腸毒素引起食物中毒。大腸桿菌屬G-兩端鈍圓的短桿菌，近似球形，周生鞭毛，能運動，無芽孢，有些能形成莢膜，好氧或兼性厭氧，最適生長溫度為40℃，pH為4.3-9.5。

細菌性食物中毒三條件性致病菌食物中毒（一）大腸桿菌食物中毒

1.生物學(xué)特性在伊紅一美蘭瓊脂類平板上可形成紫黑色帶有金屬光澤的菌落。致病性大腸桿菌和非致病性大腸桿菌在形態(tài)上和生物學(xué)特性上難以區(qū)分，只能從抗原性不同來區(qū)分。大腸桿菌有三種抗原，即菌體抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）和莢膜抗原（K抗原）。莢膜抗原又分為A、B、L三類。一般有K抗原的菌株比沒有K抗原的菌株毒力強，而致病性大腸桿菌的K抗原主要為B抗原，少數(shù)為L抗原。大腸桿菌平板菌落圖及革蘭氏染色顯微形態(tài)圖

大腸桿菌EMB平板菌落形態(tài)照片細菌性食物中毒三條件性致病菌食物中毒（一）大腸桿菌食物中毒2.中毒癥狀及原因病原性大腸桿菌引起食物中毒的主要癥狀是急性胃腸炎，但較沙門氏菌輕。有嘔吐、腹瀉，大便呈水樣便、軟便或粘液便，重癥有血便。腹瀉次數(shù)每日達10次以內(nèi)，常伴有發(fā)熱、頭痛等癥狀。病程較短，1-3天即可恢復(fù)。潛伏期為2-20hr，一般4-6hr。通常病原性大腸桿菌的菌數(shù)平均在107cfu/g才能引起急性胃腸炎。食物中毒的機制目前還不是十分清楚的。

細菌性食物中毒三條件性致病菌食物中毒（一）大腸桿菌