花粉生活力測(cè)定方法研究進(jìn)展

花粉生活力測(cè)定辦法研究進(jìn)展摘要:總結(jié)了花粉活力測(cè)定的染色法、離體萌發(fā)法以及田間授粉法等的原理和應(yīng)用并分析了多個(gè)辦法的優(yōu)缺點(diǎn)。核心詞:花粉花粉活力測(cè)定辦法花粉是高等植物的雄性配子體,在有性繁殖過(guò)程中起到傳遞雄性親本的遺傳信息?；ǚ鄄粌H是植物遺傳、育種、進(jìn)化、生殖的重要研究對(duì)象,也是孢粉分析、蜂群哺育、藥品制造、醫(yī)療及生理實(shí)驗(yàn)的重要材料?；ǚ刍盍κ腔ǚ酆猩L(zhǎng)、萌發(fā)、或發(fā)育的能力。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)及農(nóng)業(yè)常規(guī)雜交育種的中,研究花粉的生活力和育性是不可缺少的基礎(chǔ)性工作。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和育種工作普通會(huì)碰到花期不一致帶來(lái)的困難,為解決這一難題,保存花粉的活力成為重要手段,而在貯藏花粉之前必須先檢測(cè)花粉的活力。不同種類(lèi)植物花粉的自然壽命、適宜的貯藏方式及花粉活力適宜的測(cè)定辦法不同。因此,掌握花粉活力的檢測(cè)辦法對(duì)提高育種效率有較高的作用和意義。綜合前人的研究成果,花粉生活力的檢測(cè)辦法能夠分為四大類(lèi):①染色法;②萌發(fā)測(cè)定法;③田間授粉檢測(cè)法;④形態(tài)測(cè)定法、無(wú)機(jī)酸檢測(cè)法。1染色法1.1TTC染色法TTC即2,3,5-氯代三苯基四氮唑,它是一種氧化還原染料,水溶液無(wú)色?；驹硎荹1]:當(dāng)TTC滲入細(xì)胞后,碰到活細(xì)胞里的脫氫酶接受氫離子,由無(wú)色的氧化型變成紅色還原型不溶于水的化合物,由此來(lái)判斷花粉的生活力。具體操作環(huán)節(jié):①配制PH為7.17的磷酸緩沖液。稱(chēng)取0.832克磷酸氫二鈉和0.273克的磷酸二氫鉀溶于100ml的蒸餾水中,調(diào)節(jié)pH為7.17。②TTC溶液配制。根據(jù)不同植物稱(chēng)取0.02~1.0g的TTC溶于100ml的磷酸緩沖液中,于棕色瓶中黑暗處保存。③染色。取少量花粉置于載玻片上,加上一滴TTC溶液,用鑷子攪拌均勻,蓋上蓋玻片,然后放置于35℃的恒溫箱中染色15~20min。④鏡檢。于10×10倍鏡下觀(guān)察,凡含有活力的花粉被染成紅色,部分喪失活力的呈現(xiàn)粉紅色,無(wú)色的是的或不育的花粉粒。凌春英,肖恩等的研究[2]得出常溫、黑暗條件下用TTC染色12h可達(dá)成較好的觀(guān)察效果,并認(rèn)為T(mén)TC法是大花蕙蘭和墨蘭花粉活力測(cè)定便捷、有效的辦法。程偉[3]在研究西南樺花粉時(shí)通過(guò)與離體培養(yǎng)法比較認(rèn)為T(mén)TC法是快速檢測(cè)西南樺花粉生活力的最適宜辦法,并得出TTC的適宜pH值為7.0。胡君艷,李云,孫宇涵[4]認(rèn)為T(mén)TC法測(cè)得銀杏花粉的活力相對(duì)于I-KI法、過(guò)氧化物酶法,最靠近離體萌發(fā)法測(cè)得的花粉活力,一種較為精確的測(cè)定銀杏花粉生活力的染色法,且染色5min的效果最佳。魏佳[5]在研究百子蓮屬五個(gè)品種的花粉活力時(shí)得出TTC法不適合百蓮子屬花粉活力的檢測(cè)。另外該法還應(yīng)用于葫蘆科[6]、當(dāng)歸[7]、番木瓜[8]、連翹[9]、人心果[10]、一串紅[11]、月季[12]等花粉活力的檢測(cè)。但是該法染色后的花粉顏色差別小,有活力的花粉邊沿被染成紅色,中間呈現(xiàn)黃褐色,而無(wú)活力的花粉整個(gè)呈現(xiàn)黃褐色,在顯微鏡下不易分辨[13;14]。1.2醋酸洋紅染色法醋酸洋紅染色法的染色原理是靠花粉中的脫氫輔酶而染色,有活力的花粉被染成紅色,部分失去活力的呈現(xiàn)粉紅色,而無(wú)活力或不育的花粉無(wú)色[15;16]。邢虎成、揭雨成、周清明用醋酸洋紅對(duì)15種苧麻花粉生活力測(cè)定時(shí),發(fā)現(xiàn)只有一份的花粉活力為58%,其他的活力都在85%以上,而用離體培養(yǎng)得出萌發(fā)率最高的為50%,通過(guò)對(duì)比認(rèn)為醋酸洋紅發(fā)不適合苧麻花粉生活力的快速檢測(cè)[17]。許利彩、李海真、沈火林認(rèn)為醋酸洋紅法不適合西葫蘆花粉活力的測(cè)定[16];郭慶、王德斌等用醋酸洋紅法測(cè)定海棠藤花粉活力,所得效果不抱負(fù),可能是與海棠藤特殊的花粉塊構(gòu)造有關(guān)[15],該法在鳶尾屬花粉上效果不明顯,成果不穩(wěn)定[18]。然而該法在澳洲堅(jiān)果[19]、胡蘿卜[20]、馬鈴薯[21]等花粉生活力快速檢測(cè)上得到廣泛的應(yīng)用。2I-KI染色法I2-KI染色法的基本原理是:根據(jù)淀粉遇碘變藍(lán)的特性,根據(jù)藍(lán)色的深淺程度來(lái)判斷花粉粒中淀粉的含量,從而擬定花粉?；钚缘母叩?。但在無(wú)活力的花粉中也會(huì)存在淀粉,這就使得該法測(cè)出來(lái)的值偏高,對(duì)淀粉含量低的花粉不合用,如菊屬植物[22]。秦賀蘭、賈宗鍇等研究[23]溫室內(nèi)栽培的萬(wàn)壽菊花粉時(shí),發(fā)現(xiàn)I2-KI染色法與TTC染色法所得成果相似,綜合兩種辦法所用試劑的特點(diǎn),認(rèn)為I2-KI染色法更適合萬(wàn)壽菊花粉活力的速測(cè)。通過(guò)研究得出,該法在防風(fēng)[14]、穿龍薯蕷[13]、玉米[24]、西南樺[3]等植物花粉上的速測(cè)效果比不上其它的染色方式。另外該速測(cè)辦法也在剛竹屬[25]、水稻[26]、苜蓿[27]、辣椒[28]等的花粉速測(cè)上得到應(yīng)用。2.1過(guò)氧化物酶染色法過(guò)氧化物酶染色法又稱(chēng)聯(lián)苯胺染色法,是根據(jù)花粉中過(guò)氧化物酶的活性來(lái)判斷花粉的活力。由于有活力的花粉含有活躍的過(guò)氧化物酶,所用試劑與過(guò)氧化物酶發(fā)生氧化反應(yīng)而染色,有活力的花粉被染成紅色,無(wú)活力的花粉則呈現(xiàn)黃色或無(wú)色透明。胡君艷、李云、孫宇涵等在研究[4]銀杏花粉活力時(shí),發(fā)現(xiàn)染色界限不明顯,且染色液中的雙氧水使溶液產(chǎn)生許多小氣泡,不利于觀(guān)察計(jì)數(shù),測(cè)得成果偏低,不適合銀杏花粉生活力的檢測(cè)。王苗苗、唐燦明[29]在研究高溫逆境對(duì)棉花花粉的影響時(shí),得出的結(jié)論是,過(guò)氧化物酶法適合在非逆境下花粉活力的檢測(cè),而不適合檢測(cè)高溫逆境下的花粉活力,由于高溫下花粉內(nèi)的過(guò)氧化物酶活性減少。而在其它的研究中,則得出的結(jié)論是過(guò)氧化物酶法適合蒙古扁桃花粉[30]、臺(tái)灣愷木花粉[31]、野生櫻桃李花粉[32]的檢測(cè),該染色法優(yōu)于其它的染色法,與萌發(fā)法的成果最靠近。2.2MTT染色法MTT染色法是根據(jù)花粉粒中脫氫酶的活性判斷花粉生活力,合用試劑是四唑鹽類(lèi)染料,染料的配制辦法為:1%2,5-聯(lián)苯四唑溴化物(MTT或噻唑蘭溶于5%蔗糖[33]。鏡檢時(shí),花粉呈現(xiàn)藍(lán)色表明花粉有活力。張妍[13]等比較多個(gè)辦法測(cè)定穿龍薯蕷花粉的活力,得出MTT法是適宜于穿龍薯蕷花粉活力的檢測(cè)。蒲高忠[34]等用該法測(cè)定桂林唇柱苣苔和百壽唇柱苣苔的花粉活力,得到明顯的效果,劉拂曉[35]等應(yīng)用該法檢測(cè)新疆野杏花粉活力,也得到同樣的成果。而姜雪婷[36]等應(yīng)用多個(gè)辦法測(cè)定梨的43個(gè)品種,通過(guò)比較認(rèn)為MTT法不適合梨花粉活力的檢測(cè),測(cè)定值明顯偏高。2.3FCR染色法也叫熒光染料反映法,其基本原理是熒光染料本身不產(chǎn)生熒光,無(wú)極性,并能自由地透過(guò)完整的原生質(zhì)膜。當(dāng)此種染料進(jìn)入原生質(zhì)后,即被醋酶作用形成一種能產(chǎn)生熒光的極性物質(zhì)—熒光素。由于熒光素不能自由地出人原生質(zhì)膜,而只在細(xì)胞內(nèi)積累,因此能夠根據(jù)花粉產(chǎn)生熒光的狀況來(lái)判斷花粉的生活。國(guó)內(nèi)這首先的研究較少,左丹丹[33]等在總結(jié)植物花粉生活力檢測(cè)辦法中,得出FCR法不適合蕪菁蕓苔屬花粉生活力、橡樹(shù)花粉生活力及迷迭香花粉活力的測(cè)定。2.4FDA染色法是熒光反映法的一種,使用的熒光素為二醋酸酯,原理[1]與FCR法相似。操作方式為:(1配制FDA母液:將2mgFD人溶于1ml的丙酮中作為保存液,貯藏在冰箱中備用。(2配制FDA使用液:使用前將FDA母液用一定濃度的蔗糖液稀釋至O.01%,蔗糖濃度決定于供試花粉本身規(guī)定的滲入壓濃度,可預(yù)先實(shí)驗(yàn)擬定一種不使花粉爆裂的最低濃度,0.5M的蔗糖濃度對(duì)許多花粉是適宜的。(3將鑒定的花粉泡浸在FDA液中,(可用凹玻璃片,在開(kāi)始1小時(shí)內(nèi),對(duì)生活的花粉,熒光強(qiáng)度隨著時(shí)間直線(xiàn)增加。普通抱浸15-20分鐘。(4染色至足夠的時(shí)間后,用FDA液封片。(5鏡檢:在熒光顯微鏡下,以短藍(lán)光適宜〔激發(fā)光濾片用B(IF-490、雙分色鏡用B,阻擋光濾片用0530是適宜的〕。生活的花粉發(fā)出黃綠色的熒光,無(wú)生活力的花粉無(wú)熒光。生活力弱的花粉熒光弱?？捎梦锢砘蚧瘜W(xué)的辦法殺死的花粉作對(duì)照。許利彩[16]等曾用無(wú)機(jī)酸測(cè)西葫蘆的花粉活力,得出的結(jié)論是該法不適合西葫蘆花粉的檢測(cè)。趙元杰研究[37]成果表明,FDA染色法法用于芒花粉初始生活力測(cè)定的成果與花粉離體萌發(fā)法的測(cè)定成果是基本一致的,此辦法的分析環(huán)節(jié)簡(jiǎn)樸,效率高,合用于花粉初始生活力的大規(guī)模普查分析,但不適宜作為跟蹤測(cè)定芒花粉生活力變化的辦法。2.5其它辦法2.5.1P-苯二胺法[38]其基本原理是,通過(guò)檢測(cè)一種新的過(guò)氧化物酶的存在與否來(lái)判斷花粉生活力,有活力的花粉普通被完全染成黑色。具體操作為:(1染液的配制和保存:把一小管過(guò)氧化物酶批示劑((涉及25mgp-苯二胺雙鹽酸和50mg鄰苯二酚,Sigma390-1和200μl3%的H2O2(用pH7.4的磷酸緩沖液配制,加入到37℃預(yù)熱的50ml稀釋的Trizmal6.3緩沖液中(用Trizmal6.3濃縮液和去離子水1∶9混合。染液在冰箱中能保存15~20d,這期間若發(fā)現(xiàn)染液顏色由淺棕色變?yōu)樯钭厣蚝谏?闡明染液已失效。(2測(cè)定時(shí),取少量37℃預(yù)熱的染液滴到待測(cè)的花粉樣品上,10~15分鐘后觀(guān)察,如果花粉變黑,闡明花粉具生活力。2.5.2孔雀綠一酸性品紅一桔紅G混合試劑染色法該混合試劑將有活力的花粉染成紅色,無(wú)活力的花粉為綠色,在實(shí)驗(yàn)中將少量花粉埋入染色劑中,保持濕度,在室溫放置7—8h,再鏡檢[39]。該辦法曾用在牡丹[40]、百合[39]花粉活力的檢測(cè)上,但成果都偏高,隨著牡丹花粉貯藏時(shí)間的推移花粉活力并沒(méi)有明顯的變化,甚至80℃高溫解決,染色率也沒(méi)有明顯下降。3萌發(fā)測(cè)定法3.1離體萌發(fā)法花粉離體萌發(fā)測(cè)定花粉的活力是普遍用到的辦法,檢測(cè)效果最為精確,廣泛地應(yīng)用于多個(gè)植物中。取適量的花粉散在培養(yǎng)基上,在25℃氣溫下培養(yǎng)一段時(shí)間,然后再顯微鏡下觀(guān)察花粉的萌發(fā),一花粉管不不大于或等于花粉直徑為標(biāo)精擬定花粉的活力。慣用的培養(yǎng)基有業(yè)態(tài)和固態(tài)兩種,固態(tài)培養(yǎng)基就是多加了瓊脂,其它的成分同樣。培養(yǎng)基的基本成分為蔗糖和硼酸,蔗糖的作用是提供滲入壓和花粉管萌發(fā)時(shí)所需的能量,濃度根據(jù)不同的植物而不同,普通為10%~20%,山楂最適宜的蔗糖濃度為10%[41],桉樹(shù)的最適宜濃度是20%[42],風(fēng)信子的最濃度為15%[43]。硼酸的作用是增進(jìn)花粉管的萌發(fā),濃度不同的植物也差別較大,木麻黃的適宜硼酸濃度為250mg.kg-1[46],金銀花[47]、仙客來(lái)[48]以0.01%硼酸濃度最佳,茄子則以10mg.L為適宜濃度[49]。固體培養(yǎng)基的組合中,對(duì)不同植物來(lái)說(shuō)是不同,適合桉樹(shù)花粉萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基為20%蔗糖+6%瓊脂+0.01%[42];茄子適宜的培養(yǎng)基為O.5%瓊脂+5%蔗糖+硼酸lOmg·L-1[49];客來(lái)花粉在10%蔗糖+O.Ol%硼酸+l%瓊脂的培養(yǎng)基上萌發(fā)率最高[48]。二細(xì)胞型花粉,普通在僅含蔗糖和硼酸的基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)即可萌發(fā),但三細(xì)胞型的花粉則需加入其它的元素才干促使花粉更加好地萌發(fā),如十字花科、菊科、禾本科。在基本培養(yǎng)基中加入PEG(聚乙二烯明顯提高花粉的萌發(fā)率[50]。代光明在研究菊花花粉離體萌發(fā)的培養(yǎng)基時(shí),在基本培養(yǎng)基上加入Ca和PEG時(shí),花粉的萌發(fā)率也得到明顯地提高[51]。3.2活體萌發(fā)測(cè)定法基本原理是[52],含有花粉管的花粉粒能被錨定在柱頭上,并且不會(huì)被漂洗掉,因此能夠通過(guò)漂洗柱頭和比較漂洗前后柱頭上的花粉粒數(shù)目來(lái)推測(cè)其萌發(fā)率。操作過(guò)程為:(1將待測(cè)花粉人工授粉于柱頭上,確?；ǚ叟c柱頭充足接觸,并把授粉的柱頭與外界隔離以免被污染。(2一段時(shí)間后(以具體物種而定,將柱頭取下并小心置于1%的醋酸結(jié)晶紫水溶液內(nèi)。此環(huán)節(jié)的目的是使花粉的外壁著上深紫色以易于與淺色的柱頭區(qū)別開(kāi)來(lái)。(3用解剖鏡對(duì)指定柱頭上的花粉粒記數(shù)。(4將該柱頭用水漂洗幾次后,再對(duì)其上剩余的花粉粒記數(shù)。根據(jù)公式漂洗后花粉粒數(shù)目/漂洗前花粉粒數(shù)目×100%可得出萌發(fā)率。與其它辦法比較，此辦法最為直接可靠，王金祥、陳良碧[53]在研究本科植物花粉活力是時(shí)就用了此辦法。但是只適合于感受性柱頭，并且柱頭的表面性質(zhì)對(duì)所測(cè)的試樣也有限制，測(cè)得結(jié)果偏低。4田間授粉檢測(cè)法基本原理[54]是根據(jù)果實(shí)和種子的形成狀況來(lái)判斷花粉生活力。將新鮮花粉與貯藏的花粉同時(shí)授給有關(guān)的植物，觀(guān)察并比較貯藏前后的結(jié)實(shí)率。孫文耕[54]在李花粉貯藏性與授粉效果的研究中，得出田間授粉的坐果率較低，新制的花粉的做過(guò)濾與貯藏的花粉存在明顯差別。張照坤[55]用田間授粉得出紫薇劃分的生活力，同時(shí)也驗(yàn)證長(zhǎng)短雄蕊的花藥都含有使雌蕊受精的能力。該辦法較為精確和可靠，不僅能夠得出花粉的活力，并且還能夠判斷出柱頭可授性，但是其費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不利于生產(chǎn)，并且還受到田間氣候、環(huán)境條件及母本植株性狀的影響，測(cè)定成果明顯其它辦法[54,55]。5形態(tài)測(cè)定法形態(tài)測(cè)定法的基本原理是根據(jù)花粉本身的形狀來(lái)判斷花粉生活力。該法即使簡(jiǎn)樸，但測(cè)定有活力的花粉與實(shí)際值相差太大，且重復(fù)之間相差也比較明顯，普通不采用。苗青[56]等觀(guān)察文冠果的花粉形態(tài)得出，可與花粉和敗育花粉的大小相稱(chēng)，表面都有大小不等的疣狀突起，萌發(fā)溝內(nèi)有復(fù)飾物，如蓮花狀，不同的是可育花粉極面觀(guān)可見(jiàn)3個(gè)萌發(fā)溝，貫穿兩極，為圓形，而敗育花粉的表面有凹陷，萌發(fā)溝之間有壓痕。6無(wú)機(jī)酸檢測(cè)法也稱(chēng)瞬時(shí)花粉管法，基本原理是，由于酸對(duì)花粉粒質(zhì)膜的刺激作用，使質(zhì)膜變得非常脆弱，通透性也增大，以致大量地吸取H+，使內(nèi)壓快速升高并造成質(zhì)膜膨脹，最后活性花粉的胞質(zhì)內(nèi)含物就會(huì)噴射而出，形成“瞬時(shí)花粉管”。此法首選的無(wú)機(jī)酸為硝酸，38,52]38,52另首先是硫酸，硝酸的抱負(fù)濃度為0.8mol/L，硫酸的濃度為14.4%[38,52。該辦法是在體外產(chǎn)生花粉管，但不是真正的花粉管。用該法檢查花粉的活力時(shí)，在解決好后5到10min觀(guān)察有活力的花粉。因花粉吸水后，萌發(fā)孔也會(huì)膨脹，因此不以判斷與否含有活力，所以極少用無(wú)機(jī)酸檢測(cè)花粉活力，周莉花等用此辦法檢測(cè)臘梅花粉的活力得到同樣的結(jié)論[57]，闡明無(wú)機(jī)酸法不適合臘梅花粉活力的檢測(cè)。汪妮等[58]在研究韭菜花粉測(cè)定辦法及袁德義等[59]研究比較油茶花粉生活力檢測(cè)辦法時(shí)，也因花粉吸水后也能觀(guān)察到萌發(fā)孔膨脹外突的現(xiàn)象，而認(rèn)為無(wú)機(jī)酸不適合這兩種植物花粉生活力的測(cè)定。楊秀蓮等[60]用此法檢測(cè)桂花花粉的活力時(shí)，沒(méi)有花粉管的萌發(fā)，因此此法也不適宜用于桂花花粉活力的檢測(cè)。7總結(jié)總體上，染色法簡(jiǎn)樸、快速能夠在一定程度上直接反映花粉的活力，但受花粉的特性影響較大，不能直接體現(xiàn)出花粉的萌發(fā)率。因此，不同植物用不同適宜的染色法來(lái)檢測(cè)花粉的活力。發(fā)芽測(cè)定法是最靠近花粉的實(shí)際活力，并且觀(guān)察指標(biāo)明顯，易于分辨花粉的活力，在實(shí)際應(yīng)用中以該法最多。用離體培養(yǎng)法測(cè)定花粉活力時(shí)，需要注意的是，不同植物的花粉對(duì)培養(yǎng)基的配方不同，某些植物還需要在基本的培養(yǎng)基中加入除硼以外616163]的礦質(zhì)元素及其它的物質(zhì)，花粉才干夠更加好地萌發(fā)[61-63。田間授粉法即使與實(shí)際生產(chǎn)最為靠近，反映最后的結(jié)實(shí)率，但其時(shí)間周期長(zhǎng)，工作量大，而其易受到天氣條件、時(shí)間地點(diǎn)的影響，且不利于生產(chǎn)，該法在實(shí)際應(yīng)用中極少采用。形態(tài)鑒定法即使簡(jiǎn)樸，但測(cè)得值與實(shí)際花粉活力相差太大，各重復(fù)間也存在著較大差別，也極少采用。無(wú)機(jī)酸法是靠通過(guò)無(wú)機(jī)酸解決后，花粉會(huì)出現(xiàn)萌發(fā)孔有膨脹外突起的現(xiàn)象來(lái)來(lái)判斷花粉與否有活力，但花粉吸水后也會(huì)出現(xiàn)此現(xiàn)象，采用無(wú)機(jī)酸不判斷花粉與否真正含有活力。參考文獻(xiàn)[1]胡適宜.植物胚胎學(xué)實(shí)驗(yàn)辦法(一花粉生活力的測(cè)定[J].植物學(xué)通報(bào).1993.10(2[2]凌春英,肖恩,嚴(yán)冬瑾等.大花蕙蘭和墨蘭花粉活力測(cè)定及貯藏研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)..38(5[3]程偉.西南樺花期物候、生殖構(gòu)件和花粉特性的研究[D].廣西大學(xué).25-28[4]胡君艷,李云,孫宇涵.銀杏花粉生活力測(cè)定及貯藏辦法的優(yōu)化[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)..24(5[5]魏佳.百蓮子屬五個(gè)品種開(kāi)花生物學(xué)特性的研究[D].東北林業(yè)大學(xué).20-22[6]盛金.西葫蘆不同自交系低溫下花粉活力與耐冷性的關(guān)系[D].山東農(nóng)業(yè)大學(xué).20-22[7]梁守翠,漆燕玲,李玉萍等.當(dāng)歸開(kāi)花授粉特性和繁育系統(tǒng)的研究[J].農(nóng)業(yè)科學(xué)通訊..8[8]孫德權(quán).番木瓜花粉生活力及其貯藏性研究[J].福建果樹(shù)..2[9]鐵軍,金山.,茹文明等.連翹花粉活力和柱頭可授性研究[J].山西大學(xué)學(xué)報(bào)..31(4[10]文亞峰,謝碧霞,潘曉芳.人心果花粉育性的研究[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)..30(3[11]胡國(guó)富,李成雁,袁強(qiáng)等.一串紅Salvia+splendens+KerGawl花粉活性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)..36(30[12]王其剛,張顥,蹇洪英等.月季云粉、云玫的花粉活力和柱頭可授性研究[J].江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),32(3[13]張妍,楊發(fā)君,田義新.穿龍薯蕷花粉活力及柱頭可授性測(cè)定辦法研[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)．.38(5[14]楊發(fā)君,張妍,張建等.防風(fēng)花粉活力測(cè)定辦法的比較及柱頭可授性的研究[J].人參研究..2[15]郭慶,王德斌,王定康等.海棠藤花粉活力的測(cè)定辦法比較[J].昆明學(xué)院學(xué)報(bào).,31(3[16]許利彩,李海真,沈火林.西葫蘆花粉生活力測(cè)定辦法及最佳授粉時(shí)間的研究[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)..8[17]邢虎成.揭雨成.周清明等.苧麻花粉生活力測(cè)定辦法的研究[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào).,26(17[18]許玉鳳,韓靜,海風(fēng)等.鳶尾屬植物花粉活力和柱頭可授性的研究[J]北方園藝.16[19]林玉虹,陳顯國(guó),周少霞等.澳洲堅(jiān)果花粉活力與柱頭可授性研究[J].中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)..3[20]武枯,劉霞,張光星.不同溫度對(duì)胡蘿卜花粉活力的影響[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào)..25(24[21]李飛,李標(biāo),孫偉等.馬鈴薯親本的花粉活力研究初報(bào)[J]貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)..37(12[22]趙宏波,陳發(fā)棣,房偉民等.菊屬植物花粉生活力檢測(cè)辦法的比較[J].浙江林學(xué)院學(xué)報(bào)..4(9[23]秦賀蘭,賈宗鍇,閆東艷.南非萬(wàn)壽菊溫室栽培花粉活力和柱頭可授性研究[J]河北林業(yè)科技..3[24]王艷哲,崔彥宏,張麗華等.玉米花粉活力測(cè)定辦法的比較研究[J].玉米科學(xué)..18(3[25]林樹(shù)燕,丁雨龍.剛竹屬3個(gè)竹種的開(kāi)花生物學(xué)特性[J].林業(yè)科學(xué)開(kāi)發(fā)..21(5[26]張彬,芮雯奕,鄭建初等.水稻開(kāi)花期花粉活力和結(jié)實(shí)率對(duì)高溫的響應(yīng)特性[J]作物學(xué)報(bào)..33(7[27]姜華,畢玉芬.紫花首?；ǚ刍盍椭^可授性的研究[J].草業(yè)科學(xué)..26(9[28]嚴(yán)崢.影響辣椒花粉活力和結(jié)實(shí)率的光溫條件[D]湖南農(nóng)業(yè)大學(xué).14-17[29]王苗苗,唐燦明.高溫脅迫后的棉花花粉活力測(cè)定辦法[J]江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),,26(2[30]紅雨,方海濤,那仁.瀕危植物蒙古扁桃花粉活力和柱頭可授性研究[J].廣西植物..26(6[31]王旭軍,吳際友,程勇.臺(tái)灣愷木花粉生活力測(cè)定辦法初探[J].浙江林業(yè)科技..27(5[32]廖康,李會(huì)芳,許正.野生櫻桃李花粉活力與授粉結(jié)實(shí)特性初報(bào)[J]新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)..45(3[33]左丹丹,明軍,劉春等.植物花粉生活力檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)..35(16[34]蒲高忠,潘玉梅,林春蕊等.桂林唇柱苣苔和百壽唇柱苣苔的開(kāi)花動(dòng)態(tài)及花粉活力和柱頭可授性的比較[J].廣西植物..28(3[35]劉拂曉,劉萍,梁鳳麗等.新疆野杏花部綜合特性與繁育系統(tǒng)初步研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué).47(4[36]姜雪婷,杜玉虎,張紹鈴等.梨43個(gè)品種花粉生活力及4種測(cè)定辦法的比較[J].果樹(shù)學(xué)報(bào).,23(2[37]趙元杰.芒繁育體系的研究[D].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué).34-35[38]王欽麗,盧龍斗,吳小琴.花粉的保存及其生活力測(cè)定[J].植物學(xué)通報(bào).,19(3[39]劉春,穆鼎,明軍.百合種間雜交受精前障礙的研究[J].園藝學(xué)報(bào).,33(3[40]玉國(guó),張延國(guó),周番等.牡丹花粉貯藏與活力檢測(cè)[J].[41]王玉霞,王穎,李芳東等.不同種仁率山楂品種花粉量及花粉活力的測(cè)[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué),2[42]王偉,徐建民,陸釗華等.不同貯藏方式