谷氨酸發(fā)酵過程控制-谷氨酸棒桿菌的種子無菌檢測

谷氨酸發(fā)酵條件控制-

谷氨酸棒桿菌搖瓶種子無菌檢測

一、谷氨酸棒桿菌一級種子質(zhì)量要求種齡：12h，pH值：6.4±0.1光密度：凈增OD值0.5以上殘?zhí)牵?.5％以下無菌檢查：(-)噬菌體檢查：(-)鏡檢：菌體生長均勻、粗壯，排列整齊革蘭氏陽性反應(yīng)。二、種子質(zhì)量檢查種子質(zhì)量的最終指標(biāo)是考察其在發(fā)酵罐中所表現(xiàn)出來的生產(chǎn)能力。因此首先必須保證生產(chǎn)菌種的穩(wěn)定性，其次是提供種子培養(yǎng)的適宜環(huán)境保證無雜菌侵入，以獲得優(yōu)良種子。因此在生產(chǎn)過程中通常進(jìn)行以下兩項檢查：（1）菌種穩(wěn)定性的檢查（2）無（雜菌）檢查種子無雜菌檢查的意義：發(fā)酵過程通常是微生物純種培養(yǎng)過程，培養(yǎng)過程中只允許特定的微生物生長，一旦發(fā)酵過程有其他微生物存在，就視為染菌，染菌嚴(yán)重會影響目的菌的生長，導(dǎo)致發(fā)酵失敗。無雜菌檢查方法：顯微鏡檢查法平板劃線培養(yǎng)檢查法肉湯培養(yǎng)檢查法

1、顯微鏡觀察法

對于細(xì)菌，通常用革蘭氏染色法，染色后在高倍顯微鏡下觀察。對于霉菌、酵母發(fā)酵，先用低倍鏡觀察生產(chǎn)菌的特征，然后再用高倍鏡觀察有否雜菌存在。優(yōu)點：簡便、快速，能及時發(fā)現(xiàn)雜菌缺點：不易檢查早期雜菌2、平板劃線檢查法操作過程:倒平板→空培養(yǎng)→待測樣品劃線→培養(yǎng)觀察優(yōu)點：能檢出更少的雜菌，即靈敏度高缺點：需要較長時間的培養(yǎng)（一般要過夜），操作較繁瑣。3、酚紅肉湯培養(yǎng)檢查法操作步驟：無菌肉湯培養(yǎng)基空培養(yǎng)→接入種子→培養(yǎng)過夜優(yōu)點：能檢出更少的雜菌，即結(jié)果較為準(zhǔn)確缺點：需要較長時間的培養(yǎng)（一般要過夜），操作較繁瑣。請閱讀引導(dǎo)文，并回答以下問題：1、革蘭氏染色原理？2、革蘭氏染色的操作步驟？革蘭氏染色的原理：革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要是肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成的，在染色過程中，當(dāng)用乙醇處理時，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，通透性降低，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被保留在細(xì)胞內(nèi)而不易著色，因此，呈現(xiàn)藍(lán)紫色；革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁中肽聚糖含量低，而脂類物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇處理時，脂類物質(zhì)溶解，細(xì)胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上番紅的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。

革蘭氏染色步驟：初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個步驟。1）涂片固定。2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。3）自來水沖洗。4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。5）水洗，用吸水紙吸去水分。6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動進(jìn)