月季組培實(shí)驗(yàn)報(bào)告

月季快速繁殖實(shí)驗(yàn)報(bào)告月季介紹月季花(學(xué)名:RosachinensisJacq.)被稱為花中皇后，又稱“月月紅”,是常綠、半常綠低矮灌木，四季開花.-般為紅色.或粉色、偶有白色和黃色.可作為觀賞植物，也可作為藥用植物，亦稱月季。有三個(gè)自然變種,當(dāng)代月季花型多樣,有單瓣和重瓣，尚有高心卷邊等優(yōu)美花型;其色彩艷麗、豐富,不僅有紅、粉黃、白等單色，尚有混色、銀邊等品種;多數(shù)品種有芳香。月季的品種繁多，世界上已有近萬種，中國(guó)也有千種以上。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握月季快繁體系:①母株的選擇②外植體消毒與接種③誘導(dǎo)培養(yǎng)④生根培養(yǎng)⑤.馴化移栽的操作流程2.掌握無菌操作的植物組織培養(yǎng)辦法;3.通過配備ms培養(yǎng)基母液，掌握母液的配備和保存辦法;4.理解植物細(xì)胞通過分裂、增殖、分化、發(fā)育,最后長(zhǎng)成完整再生植株的過程,加深對(duì)植物細(xì)胞的全能性的理解。二、實(shí)驗(yàn)原理(一)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)是把植物的器官，組織以至，單個(gè)細(xì)胞，應(yīng)用無菌操作使其在人工條件下，能夠繼續(xù)生長(zhǎng)，甚至分化發(fā)育成--完整植株的過程。植物的組織在培養(yǎng)條件下，原來已經(jīng)分化停止生長(zhǎng)的細(xì)胞，又能重新分裂，形成沒有組織構(gòu)造的細(xì)胞團(tuán),即愈傷組織。這-過程稱為"脫分化作用”,已經(jīng)“脫分化”的愈傷組織，在一定條件下,又能重新分化形成輸導(dǎo)系統(tǒng)以及根和芽等組織和器官，這一過程稱“再分化作用”。(二)植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性即是每個(gè)植物的本細(xì)胞或性細(xì)胞都含有該植物的全套遺傳基因,在一定培養(yǎng)條件下每個(gè)細(xì)胞都可發(fā)育成一種與母體一-樣的植株。(三)組織的分化外植體誘導(dǎo)出愈傷組織后，通過繼代培養(yǎng)，能夠在愈傷組織內(nèi)部形成一類分生組織即含有分生能力的小細(xì)胞團(tuán)，然后，再分化成不同的器官原基。有些狀況下，外植體不經(jīng)愈傷組織而直接誘導(dǎo)出芽、根。(四)培養(yǎng)基的構(gòu)成培養(yǎng)基中各成分的比例及濃度與細(xì)胞或組織的生長(zhǎng)或分化所需要的最佳條件相近,似成功地使用該培養(yǎng)基進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件。營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基-般由無機(jī)營(yíng)養(yǎng)、碳源和能源、維生素、植物激素(生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑)和涉及有機(jī)氮、酸和復(fù)雜物質(zhì)的添加劑構(gòu)成。(1)誘導(dǎo)培養(yǎng):MS+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L。(2)增殖培養(yǎng):MS+6-BA1mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L。(3)生根培養(yǎng):1/4MS+IBA0.05mg/L+2.5g/L活性炭+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L。三、實(shí)驗(yàn)器材:高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、烘箱、培養(yǎng)室鑷子、記號(hào)筆、橡皮筋、玻璃器皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、剪刀、酒精燈、噴霧器等。四、實(shí)驗(yàn)材料:月季五、實(shí)驗(yàn)藥品:藥品、70%酒精、0.1%升汞、ms培養(yǎng)基、蒸餾水、naoh、84消毒液、蔗糖、瓊脂等。六、實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié).(一)母株的選擇月季組培外植體普通采用帶芽莖段。枝條中部的腋芽萌發(fā)較頂部和基部時(shí)間早，且中部的腋芽長(zhǎng)勢(shì)好，增殖系數(shù)高，另首先是基部，再次是頂部。另外，天氣晴好時(shí)取材初代培養(yǎng)的成功率要比陰雨天要高。(二)外植體解決(1)采回的枝條切去葉，再剝?nèi)ジ皆谇o上的葉柄及皮刺，先整段用洗衣粉水認(rèn)真刷洗，再用自來水沖洗，帥擦干后，放置在小木板上,用刀切成2-3厘米-段,每段最少-個(gè)側(cè)芽,裝入燒杯中流水沖洗30min后，放在超凈工作臺(tái)上.(2)70%酒精30s-0.1%升汞6min-無菌水2min(3次)（三）培養(yǎng)基母液的配制(四)培養(yǎng)基的配制以配制1L的ms培養(yǎng)基為例進(jìn)行以下操作:(1)取1|的大燒杯，加入適量的蒸餾水在電磁爐上加熱至沸騰;(2)分別取(三)中配制的8種母液放入小燒杯中，然后加入，邊加邊攪拌;(3)稱取30g蔗糖加入，邊加邊攪拌;(4)稱取8g瓊脂加入，邊加邊攪拌，知之瓊脂粉溶解;(5)定容至1|,加入激素母液，用naoh調(diào)ph6.0左右;(6)將培養(yǎng)基分別分裝于洗好的三角瓶中，塞上棉塞包上牛皮紙用繩子扎緊;(7)放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右;(8)滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，平放在實(shí)驗(yàn)臺(tái).上令其冷卻凝固。(五)高壓蒸汽滅菌鍋的使用辦法具體操作環(huán)節(jié):(1)高壓鍋放水至平把架;(2)把包扎好的培養(yǎng)基裝入高壓鍋;(3)蓋上熱壓鍋蓋,.上緊螺帽(注意對(duì)角擰緊螺帽)關(guān).上氣閥和安全閥;(4)然后接通電源;(5)壓力計(jì)升至0.05mpa時(shí)，打開放氣閥,排除泠空氣(此步很重要);.(6)排除冷空氣后，關(guān)閉放氣閥，待壓力升到0.11mpa位置時(shí)，開始計(jì)算滅菌時(shí)間,具體辦法:當(dāng)壓力鍋指針升至0.12mpa時(shí),關(guān)閉電源，待指針下降至0.11mpa時(shí)接通電源，不停重復(fù)此操作過程，維持20分鐘;(7)滅菌時(shí)間達(dá)成20分鐘后，除去電源，打開放氣閥(注意要逐步放氣)（六)接種①取材:將采集的月季莖段沖洗干凈，分裝到燒杯中，放入超凈工作臺(tái);先用70%酒精浸沒并輕搖15s進(jìn)行欲消毒;倒出酒精，加入0.1%二氯化汞浸沒;倒凈二氯化汞。用無菌水沖洗3次，將廢液倒棄備用。②解下培養(yǎng)瓶.上包頭紙的線繩，并將培養(yǎng)瓶整潔地排列在接種臺(tái)的左側(cè)，然后用70%的酒精棉球從內(nèi)向外擦接種臺(tái)面。③在酒精燈下用用鑷子在消毒瓶?jī)?nèi)取.出材料置于培養(yǎng)皿內(nèi)的無菌濾紙上吸干水分，右手持鑷子左手拿滅過菌的解剖刀快速地將莖段切成剪成每段2~3cm最少有1個(gè)側(cè)芽，用鑷子將外植體快速地在酒精上接入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。系好線繩，移出凈化臺(tái)或接種箱,寫好標(biāo)簽，外植體的名稱、種類、接種日期、接種人等，移入培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)。七、實(shí)驗(yàn)成果1.誘導(dǎo)培養(yǎng)誘導(dǎo)培養(yǎng):MS+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L。誘導(dǎo)芽的分化添加不同濃度的BA和NAA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行起始培養(yǎng)，增加適量NAA有利離體側(cè)芽分化，但濃度過高會(huì)僅誘導(dǎo)大量愈傷組織，不利于側(cè)芽的直接分化和生長(zhǎng)。因此要選擇適宜的濃度比例進(jìn)行培養(yǎng),讓芽更加好的分化。10月26號(hào)11月02號(hào)失敗因素分析：取材母株瘦弱應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)目的適宜選用材料,選擇原則:易于誘導(dǎo)、帶菌少。要選用植物組織內(nèi)部無菌的材料。這首先要從強(qiáng)健的植株上取材料，不要取有傷口的或有病蟲的材料。另首先要在晴天，最佳是中午或下午取材料，決不要在雨天、陰天或露水未干時(shí)取材料。由于強(qiáng)健的植株和晴天光合呼吸旺盛的組織，有本身消毒作用，這種組織普通是無菌的。培養(yǎng)材料的消毒從外界或室內(nèi)選用的植物材料，都不同程度地帶有多個(gè)微生物。這些污染源一-旦帶人培養(yǎng)基，便會(huì)造成培養(yǎng)基污染。因此,植物材料必須經(jīng)嚴(yán)格的表面滅菌解決，再.經(jīng)無菌操作手續(xù)接到培養(yǎng)基上。重新取材重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)芽的分化添加不同濃度的BA和NAA的MS培養(yǎng)基上進(jìn)行起始培養(yǎng)，增加適量NAA有利離體側(cè)芽分化，但濃度過高會(huì)僅誘導(dǎo)大量愈傷組織，不利于側(cè)芽的直接分化和生長(zhǎng)。因此要選擇適宜的濃度比例進(jìn)行培養(yǎng),讓芽更加好的分化。11月16日11月23日繼代增殖將誘導(dǎo)培養(yǎng)基上已經(jīng)萌發(fā)的嫩芽轉(zhuǎn)入附加6-BA、NAA等激素的MS培養(yǎng)基中，進(jìn)行增殖繼代。低濃度的6一BA有助于不定芽的增殖，濃度過高則克制不定芽增殖，適量NA.A有助于芽和葉生長(zhǎng),但濃度過高誘導(dǎo)產(chǎn)生大量愈傷組織，不利于側(cè)芽的直接分化和生長(zhǎng)。在NAA濃度相似而BA濃度不同的培養(yǎng)基中，隨BA濃度的升高，芽苗的增殖系數(shù)也對(duì)應(yīng)提高。在BA濃度相似而NAA濃度不同的培養(yǎng)基中，隨NAA濃度升高,小芽生長(zhǎng)速度加緊，繼代所需時(shí)間對(duì)增殖系數(shù)也有一定的影響。12月03號(hào)12月15日培養(yǎng)物的壯苗生根與試管苗移栽誘導(dǎo)外植體獲得的芽需要進(jìn)一步培養(yǎng)增殖，才干發(fā)揮快速繁殖的優(yōu)勢(shì)。當(dāng)材料增殖到一定數(shù)量后，還需要進(jìn)行壯苗與生根。生根培養(yǎng)生根要將原來培養(yǎng)基中的大量元素減半(既1/2MS)，并去除BA進(jìn)行根的誘導(dǎo),多數(shù)實(shí)驗(yàn)采用的培養(yǎng)基為1/2MS(大量元素減半)。由于無菌芽苗在分化與增殖培養(yǎng)基中只誘導(dǎo)地上部分，既不停地分枝增殖，曾多次出現(xiàn)現(xiàn)蕾、開花現(xiàn)象，但均不，易生根。生根時(shí)，只需用生長(zhǎng)素IBA即可,IBA濃度為0.5mg/L對(duì)生根是較為適宜的濃度，而不必向在誘導(dǎo)植物芽的分化時(shí)必須按一定比例配比細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素混合使用移栽生根苗移栽時(shí)間的選擇很重要，過早或過晚都不利于再生苗的成活。鍛煉時(shí)間與移栽成活率有關(guān)，煉苗7d以上，成活率達(dá)成95%。影響移栽成活率的重要因素有3個(gè):濕度、溫度以及基質(zhì)種類和帶菌量移栽邁進(jìn)行短期的開瓶煉苗，能夠增加幼苗對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力，但在開瓶期間往往容易滋生雜菌，反而不利于幼苗的生長(zhǎng)。采用將再生苗直接移栽入栽培基質(zhì)的辦法，獲得了較好的效果。這樣操作，不僅省去煉苗的麻煩，并且減少了污染，提高了成活率。八、注意事項(xiàng)配制母液1、配制母液時(shí)注意藥品只能出不能進(jìn)。2、制作標(biāo)簽時(shí)只能能用鉛筆寫，避免油性筆筆跡在高壓滅菌后含糊不清。培養(yǎng)基的制備與滅菌1、配制培養(yǎng)基前先大致預(yù)計(jì)一下藥品數(shù)量，不夠時(shí)提前配制。2、三角瓶滅菌時(shí)注意要放干凈冷空氣。3、加的藥品種類較多，切忌加錯(cuò)。4、注意把三角瓶用密封完好。5、滅完菌的三角瓶勿動(dòng)，等待培養(yǎng)基冷卻凝固。6、瓊脂不可加太快，以防加太快瓊脂結(jié)塊。無菌植株的建立1升汞有劇毒，操作要小心。2接種時(shí)瓶口一-定要在酒精燈火焰上方，瓶口要朝下以減少污染率。注意:實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)入接種室接種之前，應(yīng)先接種前一定要用新潔爾滅等消毒水擦拭，70%~75%酒精進(jìn)行噴灑殺菌降塵，另首先一盞酒精燈也是必不可少的，不管是開母苗之前還是接種過程或是開關(guān)子瓶培養(yǎng)基,都應(yīng)當(dāng)在酒精燈上操作。操作過程中全部的動(dòng)作都應(yīng)盡量的小幅度，特別是不能橫掃全部滅過菌的東西，如:消過毒的鑷子、手術(shù)刀、培養(yǎng)皿等;接苗是手指不能接觸到瓶口，如果鑷子不小心碰到瓶口或臺(tái)面那就不要猶豫，直接換掉;分切的整個(gè)過程動(dòng)作要快，時(shí)間越長(zhǎng)越容易污染。九、實(shí)驗(yàn)成果分析在含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及植物生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)離體植物組織(器官或細(xì)胞)并誘導(dǎo)使其長(zhǎng)成完整植株的技術(shù)。植物的組織培養(yǎng)是根據(jù)植物細(xì)胞含有全能性這個(gè)理，論，近幾十年來發(fā)展起來的一項(xiàng)無性繁殖的新技術(shù)。植物的組織培養(yǎng)廣義又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織.器官或細(xì)胞，原生質(zhì)體等，通過無菌操作，在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)含有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其它產(chǎn)品的技術(shù)。狹義是指組培指用植物各部分組織，如形成層薄壁組織.葉肉組織.胚乳等進(jìn)行培養(yǎng)獲得再生植株，也指在培養(yǎng)過程中從各器官上產(chǎn)生愈傷組織的培養(yǎng)，愈傷組織再通過再分化形成再生植物。植物組織培養(yǎng)不僅僅局限于培養(yǎng)基的培養(yǎng)，還包含有試管苗的移栽技術(shù)。通過組織培養(yǎng)得到的植物體的特點(diǎn):組織培養(yǎng)得到的植物體的遺