三種提取方法對生物檢材dna檢出率的影響

三種提取方法對生物檢材dna檢出率的影響

清潔證書是生物證書中的一種。由于其微觀性和完整性，很容易被嫌疑人忽視。如果對現(xiàn)場調(diào)查的檢測和正確提取，可以顯著提高現(xiàn)場調(diào)查的質(zhì)量。本次研究以現(xiàn)場勘查中最常見的手指擦拭痕跡為研究對象,以光滑非滲透性客體為承痕客體,采用紗布擦拭法、棉簽二步法和脫落細胞提取器法提取,比較三種提取方法在接觸類生物檢材提取效果上的優(yōu)劣。一、材料和方法(一)多次多次解剖所使用的網(wǎng)格化表面痕跡赤手擦拭痕跡60處。承痕客體均選擇光滑非滲透性客體(辦公桌桌面),每次制樣前均使用一次性毛巾將表面反復擦拭干凈。所有樣本的制樣人為同一人,一處擦拭痕跡由制樣人的一只手指在客體上擦拭,每處痕跡均反復擦拭四次。每20處擦拭痕跡為一組,每組用一種方法提取。所有參與實驗人員均佩戴手套、口罩、頭套等防護用具。(二)給你看看1.培養(yǎng)成棉布的黏合劑用潔凈剪刀剪取0.3cm×0.3cm面積大小潔凈紗布,鑷子夾住蘸取少量純凈水,用定性濾紙吸附掉多余水分,使紗布具有粘附力。用該紗布在遺留有擦拭痕跡處反復擦拭后裝入1.5ml離心管內(nèi)備檢。2.棉花棉紗的施工將一支干凈棉簽用純凈水浸潤,用鑷子夾取棉簽上少量棉紗,采用另一支干燥、潔凈的棉簽上吸附掉多余水分,使棉紗具有粘附力。用該棉紗在遺留有擦拭痕跡處反復擦拭,放入1.5ml離心管內(nèi)。再用鑷子夾取少量干燥棉紗,在已經(jīng)擦拭過的地方再次進行反復擦拭,再將該棉紗放入同一離心管內(nèi)備檢。3.提取機構(gòu)提取遠離細胞(三)提取和檢測dna1.chelex-100/l的溶液采用CheleX-100進行DNA提取。將擦拭物置于1.5ml離心管中,加入5%CheleX-10060μl和10g/L蛋白酶K5μl,加樣槍頭混勻,置于56℃1h,期間震蕩1次;100℃放置10min,10000g離心3min,上清4℃保存?zhèn)溆谩?.pcr擴增實驗采用對PowerPlex16HS(Promega公司)試劑盒進行PCR擴增。擴增反應體系為10μl體系(Sample4μl、MasterMix2μl、PrimerPairMix1μl、H2O3μl)。采用GeneAmp?PCRSystem9700熱循環(huán)儀進行PCR擴增,共32個循環(huán)。擴增產(chǎn)物4℃保存?zhèn)溆谩?.電泳(四)統(tǒng)計方法采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學分析,Kruskal-Wallis秩和檢驗進行多組間非參數(shù)比較。二、種提取方法的顯著性比較辦公桌桌面上擦拭性生物檢材三種提取方法DNA檢測結(jié)果主要表現(xiàn)為出現(xiàn)完整DNA分型、部分STR分型、混合STR分型以及無效圖譜幾種類型(圖1-3)。kruskal-Wallis秩和檢驗顯示三種提取方法具有顯著性差異(P=0.009),棉簽二步法效果最好。三種提取方法的結(jié)果見表1。三、現(xiàn)場檢材標準的修訂隨著DNA技術的不斷完善,生物物證在刑偵破案中認定犯罪、分析作案過程、指明偵查方向和劃定偵查范圍等方面的作用越來越顯得重要。在現(xiàn)場勘查中,指紋、足跡等傳統(tǒng)痕跡物證已經(jīng)越來越不容易提取到,并且隨著犯罪分子對DNA檢驗技術有了一定了解,一些肉眼可見的血跡、煙頭等物證可能會被破壞。在案件的現(xiàn)場勘查中,常常會發(fā)現(xiàn)犯罪嫌疑人遺留下一些攀爬、擦劃、擦拭等痕跡,在這些痕跡中往往都會含有犯罪分子的脫落細胞,成功提取這些痕跡里的犯罪分子脫落細胞可以為提高現(xiàn)場勘查質(zhì)量以及為偵查、破案增添一個重要途徑。此類物證的特點是:1.承痕客體往往較大或比較固定,難以直接原物提取到實驗室進行檢驗;2.受現(xiàn)場條件和現(xiàn)場保護措施等因素制約,檢材容易受到污染;3.受犯罪分子觸碰時間、接觸力度和皮膚特質(zhì)等因素影響,物證中含有DNA物質(zhì)的數(shù)量差別也會很大;4.時間越長,接觸類痕跡中的DNA物質(zhì)會部分降解導致提取量減少。所以,如何在現(xiàn)場勘查過程中,第一時間對承痕客體上的DNA物質(zhì)進行最大限度的有效富集并獲得有價值的DNA圖譜,是接觸類生物物證在案偵工作中發(fā)揮作用的關鍵所在。本實驗中接觸性生物檢材經(jīng)過三種不同的提取方法提取,在檢出完整STR分型方面,使用棉簽二步法和脫落細胞提取器的檢驗效果優(yōu)于紗布擦拭法;在檢出部分STR分型及混合STR分型方面,使用棉簽二步法的效果明顯優(yōu)于其他兩種方法。在實際案偵工作中,能夠檢出部分STR分型及混合STR分型,也能為偵查破案,特別是劃定或縮小偵查范圍提供很大的支撐。在本次實驗中,使用棉簽二步法在第一次擦拭后,在短暫的時間范圍內(nèi)(約10秒),肉眼可見承痕客體表面仍舊殘留有液體,此時客體表面仍殘留有生物物證沒有被提取到,棉簽二步法的第二次提取可以將該殘留物質(zhì)粘附提取。而使用脫落細胞提取器,由于本次實驗采用的擦拭痕跡面積比提取儀的粘面面積大,在粘取多次以后,膠面不再具有粘性,影響了提取檢驗的效果。但是,如果膠面恰好粘附到比較集中的DNA物質(zhì),則在檢驗效果上有非常好的表現(xiàn)。使用脫落細胞提取儀的優(yōu)點在于提取材料規(guī)范成熟,操作簡單易學,提取后保護到位,缺點是使用成本較高,提取范圍較小。在本次實驗中,針對光滑非滲透性客體上的接觸類生物物證,使用棉簽二步法提取優(yōu)勢比較明顯。該方法的優(yōu)點在于提取材料容易獲得,成本低,選擇提取的范圍容易掌握,操作步驟比較簡單,檢出率較高。但該法對操作手法有一定要求,如棉紗量、沾水量以及擦拭時的力量大小等。鑒于本次實驗樣本量的限制,對于實驗的結(jié)