第七章 經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù) 黑白般

第七章

經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)1經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)一.沉淀反應(yīng)二.凝集反應(yīng)三.補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)四.中和反應(yīng)2經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)一.沉淀反應(yīng)二.凝集反應(yīng)三.補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)四.中和反應(yīng)3沉淀反應(yīng)

可溶性抗原與相應(yīng)抗體在液相或凝膠中特異性結(jié)合后，形成的免疫復(fù)合物在一定條件下出現(xiàn)的蛋白質(zhì)析出現(xiàn)象。

4沉淀反應(yīng)原理沉淀原（precipitinogen）沉淀素（precipitin）5沉淀反應(yīng)的種類

1．溶液中沉淀反應(yīng)

2．凝膠中沉淀反應(yīng)6溶液中沉淀反應(yīng)是指在清徹透明的液體中，呈溶解狀態(tài)的抗原與抗體在試管內(nèi)或凹玻片上混勻，可凝聚成為肉眼可見(jiàn)的絮狀或顆粒狀的不溶性沉淀物。7絮狀沉淀試驗(yàn)康氏反應(yīng)（Kahn‘stest）:心肌提取的類脂質(zhì)抗原+反應(yīng)素（Aegagin）敏感性高，特異性差，易出現(xiàn)假陽(yáng)性。(1991年首批淘汰)性病研究實(shí)驗(yàn)室法(venerealdiseaseresearchlaboratory，VDRL)心擬脂及卵磷酯+反應(yīng)素（Aegagin）不需加熱的血清反應(yīng)素試驗(yàn)(unheatedserumreagin)心擬脂及卵磷酯+氯化膽堿+反應(yīng)素（Aegagin）8反應(yīng)最適比測(cè)定（1）抗原稀釋法（Dean-Webb法）（2）抗體稀釋法（Ramon法）（3）方陣法或棋盤格滴定法（checkerboardtitration）9環(huán)狀沉淀試驗(yàn)

（ringprecipitationtest）Ascoli于1902年建立用于檢查獸類內(nèi)臟、毛皮浸液等標(biāo)本中的炭疽桿菌抗原10免疫比濁法

（immunoturbidimetry）優(yōu)點(diǎn)：校正曲線穩(wěn)定，簡(jiǎn)便快速，易于自動(dòng)化，無(wú)放射性核素污染缺點(diǎn)：特異性、靈敏度稍差11免疫比濁法的分類（1）透射比濁法（transmissionturbidimetry）（2）散射比濁法（nephelometry）（3）免疫膠乳濁度測(cè)定法（immunolatexturbidimetry）（4）速率抑制免疫比濁法（rateinhibitionimmunoturbidimetry）12免疫沉淀技術(shù)

（Immunoprecipitationassay）13免疫共沉淀技術(shù)

（Co-Immunoprecipitationassay）14GSTPULLDOWN15小G蛋白結(jié)合活性檢測(cè)16免疫共沉淀的局限性（1）難以檢測(cè)低親和力和短暫的相互作用（2）不能夠確切分辨第三種蛋白的橋聯(lián)作用（3）靈敏度不如親和色譜高（4）需對(duì)未知蛋白的相關(guān)信息有一定了解17染色質(zhì)免疫共沉淀18RNA免疫沉淀在生理狀態(tài)下對(duì)結(jié)合在RNA上的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫沉淀，然后通過(guò)基因芯片或者其它手段檢測(cè)目的RNA的含量。19免疫沉淀中抗體的選擇20免疫共沉淀技術(shù)的應(yīng)用21單相免疫擴(kuò)散試驗(yàn)

（singleimmunodiffusion）22雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)

（doubleimmunodiffusion）23免疫電泳

（immunoelectrophoresis）24對(duì)流免疫電泳

（counterimmunoelectrophoresis）25火箭免疫電泳

（rocketimmunoelectrophoresis）26交叉免疫電泳

（crossedimmunoelectrophoresis）27免疫固定電泳

（immunofixationelectrophoresis）首先將蛋白質(zhì)抗原進(jìn)行電泳分離，電泳后直接將抗體加于蛋白質(zhì)區(qū)帶表面，抗體與對(duì)應(yīng)的抗原就會(huì)直接結(jié)合，形成的復(fù)合物嵌于固相支持物中。28免疫印漬技術(shù)

（immunoblotting）29經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)一.沉淀反應(yīng)二.凝集反應(yīng)三.補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)四.中和反應(yīng)30凝集反應(yīng)

（agglutination）

顆粒型抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在下，抗原與抗體充分反應(yīng)相互聚集，形成肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)塊。凝集原（agglutinogen）凝集素（agglutinin）31凝集反應(yīng)特點(diǎn)1．凝集反應(yīng)中抗原顆粒較大抗原，長(zhǎng)期靜置或離心沉淀可自然下沉２．凝集反應(yīng)中凝集塊主要由抗原形成，而在沉淀反應(yīng)中，沉淀物主要由抗體形成３．凝集反應(yīng)：需稀釋免疫血清中的抗體，使抗體分子不致于過(guò)多；沉淀反應(yīng)：為了不使抗原過(guò)多則需稀釋抗原32直接凝集反應(yīng)

（directagglutination）肥達(dá)氏反應(yīng)（Widalreaction）：一種試管凝集反應(yīng)。用已知的傷寒桿菌O、H抗原和甲、乙型副傷寒桿菌H抗原，與病人血清作定量凝集試驗(yàn)，以測(cè)定患者血清中無(wú)相應(yīng)抗體存在，作為傷寒、副傷寒診斷的參考。33血型檢測(cè)

細(xì)胞膜表面血清中A型：A抗原抗B抗體B型：B抗原抗A抗體AB型：A和B抗原無(wú)抗A和抗B抗體O型：無(wú)A和B抗原有抗A和抗B抗體34間接凝集反應(yīng)

（indirectagglutination）35反應(yīng)類型（1）正向間接凝集反應(yīng)（forwardindirectagglutination）（2）反向間接凝集反應(yīng)（reverseindirectagglutination