營養(yǎng)飼料分析實驗指導(dǎo)

實驗一飼料中吸附水的測定（烘干法）一、原理試樣在105±2℃烘箱、一個大氣壓下烘干，直至恒重，逸失的重量為水分。二、適用范圍本方法適用于測定配合飼料和單一飼料中水分的含量，但用作飼料的奶制品、動植物油脂及礦物質(zhì)除外。三、儀器設(shè)備1.實驗室用樣品粉碎機或研缽。2.分樣篩，孔徑0.45mm（40目）。3.分析天平，感量0.0001g。4.電熱式恒溫干燥箱（烘箱），可控溫度在105±2℃5.鋁盒（或稱量瓶），直徑40mm以上，高25mm以下。6.干燥器，用變色硅膠或氯化鈣作干燥劑。四、試樣的選取與制備1.選取有代表性的試樣，其原始樣量在1000g以上。2.用四分法將原始樣品縮至500g，風(fēng)干后粉碎至40目，再用四分法縮至200g，裝入密封容器，置陰涼干燥處保存。五、測定方法1.空鋁盒烘干至恒重（W0）潔凈鋁盒在105±2℃烘箱中烘1h，取出，在干燥器中冷卻30min，稱重（準(zhǔn)確至0.0001g）；再烘干30min，同樣冷卻、稱重，直至兩次稱重之差小于0.0005g為恒重。2.稱樣（W）用已恒重的鋁盒稱取兩份平行試樣，每份2g左右（含水重0.1g以上，樣品厚度4mm以下），準(zhǔn)確至0.0001g，平鋪于鋁盒中。3.鋁盒+樣品烘干至恒重（W1）將稱好試樣的鋁盒開蓋置于105±2℃烘箱中烘3h，取出，蓋好鋁盒蓋，在干燥器中冷卻30min，稱重。再同樣烘干1h，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001g為恒重。六、結(jié)果計算1.計算公式2.重復(fù)性每個試樣至少取兩個平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。兩個平行樣測定值相差不超過0.2%為合格。七、注意事項1.進(jìn)行恒溫計時應(yīng)以達(dá)到設(shè)定溫度開始，而不以接通電源算起。2.某些含脂肪高的樣品，烘干時間長反而會增重，為脂肪氧化所致，應(yīng)以增重前稱量值為準(zhǔn)。3.含糖分高、易分解或易焦化試樣，應(yīng)使用減壓干燥法（70℃，600mm4.多汁鮮樣去除初水分后為風(fēng)干物質(zhì)，風(fēng)干物質(zhì)去除吸附水后為絕干物質(zhì)。5.計算時，取恒重中的小數(shù)值進(jìn)行計算。下同。八、其他除本節(jié)述及水分測定方法外，尚有水分測定儀等儀器可對水分含量進(jìn)行快速測定。實驗二飼料中粗灰分的測定（灼燒法）一、原理試樣在550℃充分灼燒去除有機物后所得的殘渣為粗灰分。殘渣中主要是氧化物、鹽類等礦物質(zhì)，亦包括混入飼料中的砂石、泥土等，故稱粗灰分。二、適用范圍本方法適用于配合飼料及各種單一飼料中粗灰分的測定。三、儀器設(shè)備1.實驗室用樣品粉碎機或研缽。2.分樣篩，孔徑0.45mm（40目）。3.分析天平，感量0.0001g。4.高溫電爐，可控溫度在550±20℃5.瓷坩堝，Φ30mm。6.干燥器，用變色硅膠或氯化鈣作干燥劑。四、試樣的選取與制備選取有代表性的試樣，粉碎至40目，用四分法縮減至200g，于密封容器中保存防止成分變化和變質(zhì)。五、測定步驟1.空坩堝灼燒至恒重（W0）將干凈坩堝放入高溫電爐，在550±20℃下灼燒30min，取出，在空氣中冷卻約1min，然后移入干燥器冷卻30min，稱重。再同樣灼燒，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.0005g為恒重。2.稱樣（W）在已恒重的空坩堝中稱入2g左右試樣，準(zhǔn)確至0.0001g。3.坩堝+試樣灼燒至恒重（W1）將稱好試樣的坩堝放入高溫電爐中，先在300℃下炭化20min左右，然后溫度升至550±20℃下灼燒3h，取出，在空氣中冷卻約1min，移入干燥器冷卻30min，稱重。再同樣灼燒1h，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001g為恒重。六、結(jié)果計算1.計算公式2.重復(fù)性每個試樣至少取兩個平行樣測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。粗灰分含量≥5%時，允許相對偏差為1%；粗灰分含量＜5%時，允許相對偏差為5%。七、注意事項1.試樣第一次高溫灼燒前應(yīng)進(jìn)行炭化，以使燃燒氧化完全，但炭化過程不應(yīng)太快，以防試樣飛濺。2.灼燒殘渣顏色與試樣中各元素含量有關(guān)，如含鐵高時為紅棕色。但有明顯黑色炭粒時，為炭化不完全，應(yīng)延長灼燒時間。3.為避免坩堝蓋混淆，需在瓷坩堝上作標(biāo)記，可用FeCl3溶液處理，方法為：取0.5%FeCl3溶液30ml，加數(shù)滴0.1mol/LAgNO3溶液（或鋼筆水），混均，用細(xì)筆尖蘸此溶液在瓷坩堝上作標(biāo)記，然后將其置于550℃實驗三飼料中粗脂肪的測定（浸提法）一、原理在索氏（Soxhlet）脂肪提取器中用乙醚提取試樣，稱提取物的重量，其中除脂肪外，還有有機酸、磷脂、脂溶性維生素、葉綠素等，因而測定結(jié)果稱粗脂肪或乙醚提取物。二、適用范圍本方法適用于各種配合飼料和單一飼料。三、儀器設(shè)備1.實驗室用樣品粉碎機或研缽。2.分樣篩，孔徑0.45mm（40目）。3.分析天平，感量0.0001g。4.電熱式恒溫水浴鍋，室溫～100℃5.電熱式恒溫烘箱（烘箱），可控溫度在105±2℃6.鋁盒（或稱量瓶），直徑40mm以上，高25mm以下。7.干燥器，用變色硅膠或氯化鈣作干燥劑。8.定性濾紙，中速，Φ12.5cm，脫脂。9.索氏脂肪提取器，100或150ml。四、試劑乙醚（GB12591-90），分析純。五、試樣的選取和制備選取有代表性的試樣，用四分法將試樣縮減至500g，粉碎至40目，再用四分法縮減至200g，于密封容器中保存防止成分變化和變質(zhì)。六、測定步驟1.稱樣（W）稱取2g左右試樣，準(zhǔn)確至0.0001g，用濾紙包好，并以脫脂棉線系牢，再用鉛筆于濾紙包上標(biāo)記待放入的鋁盒號，然后將濾紙包放入相應(yīng)鋁盒中。2.試樣+濾紙包+鋁盒烘干至恒重（W1）將以上鋁盒開蓋置于105±2℃烘箱中烘6h，取出，蓋好鋁盒蓋，在干燥器中冷卻30min，稱重。再同樣烘干1h，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001g為恒重。3.乙醚浸提將恒重的濾紙包放入索氏提取器的提脂腔中（注意濾紙包不能超過虹吸管上端），加入乙醚，乙醚加量以全部浸泡濾紙包為宜，裝好裝置，在60℃～75℃的水浴上加熱，使乙醚回流，控制乙醚回流次數(shù)為每小時約10次，共回流約50～70次（以檢查提取腔流出的乙醚在濾紙上揮發(fā)后不留下油跡為浸提終點）。4.浸提后，試樣+濾紙包+鋁盒再烘干至恒重（W2）取出濾紙包，放回相應(yīng)鋁盒中，在室溫通風(fēng)處使乙醚揮發(fā)掉，然后開蓋置于105±2℃烘箱中烘6h，取出，蓋好鋁盒蓋，在干燥器中冷卻30min，稱重。再同樣烘干1h，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001g為恒重。七、結(jié)果計算1.計算公式2.重復(fù)性每個試樣取兩個平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。粗脂肪含量≥10%時，允許相對偏差為3%；粗脂肪含量＜10%時，允許相對偏差為5%。八、注意事項1.浸提后的濾紙包不要立即放入105±2℃2.用過的乙醚不要丟棄，可通過回流回收重復(fù)使用。九、其他除本節(jié)所述飼料脂肪測定方法外，亦可借助脂肪測定儀進(jìn)行脂肪含量的快速測定。實驗四飼料中粗蛋白質(zhì)的測定（凱氏定氮蒸餾法）一、原理各種飼料的有機物質(zhì)在還原性催化劑（如CuSO4或Se粉）及Na2SO4（防止暴沸）下，用濃硫酸進(jìn)行消化作用，使蛋白質(zhì)和其它有機態(tài)氮都轉(zhuǎn)變?yōu)镹H4+，并與H2SO4化合成(NH4)2SO4；而非含氮物質(zhì)，則以CO2↑、H2O↑、SO2↑狀態(tài)逸出。消化液在濃堿作用下進(jìn)行蒸餾，釋放出氨氣，氨氣由硼酸溶液吸收并生成四硼酸銨，然后以甲基紅—溴甲酚綠為指示劑，用HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.1mol/L）滴定，求出氮的含量，根據(jù)不同的飼料再乘以一定的系數(shù)（通常以6.25計算），即為粗蛋白質(zhì)的含量。主要化學(xué)反應(yīng)如下：二、適用范圍本方法適用于配合飼料和各種單一飼料。三、儀器設(shè)備1.實驗室用樣品粉碎機或研缽。2.分樣篩，孔徑0.45mm（40目）。3.分析天平，感量0.0001g。4.消煮爐或電爐。5.消化管，100ml。6.凱氏半微量水蒸氣蒸餾裝置（或常量直接蒸餾式）7.容量瓶，100ml。8.錐形瓶，150或250ml。9.酸式滴定管，25或50ml。10.移液管，5或10ml。四、試劑1.濃硫酸（GB625-89），化學(xué)純。2.硫酸銅（GB665-78），化學(xué)純。3.硫酸鈉（HG3-123-76），化學(xué)純。或硫酸鉀（HG3-920-76），化學(xué)純。4.氫氧化鈉（GB629-81），分析純。40g溶于100ml蒸餾水配成40%溶液。5.硼酸（GB628-93），分析純。2g溶于100ml蒸餾水配成2%溶液。6.混合指示劑。甲基紅（HG3-958-76）0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠（HG3-1220-79）0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存，三月內(nèi)有效。7.0.05mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1）配制：4.2ml鹽酸（GB622-89，分析純）加蒸餾水定容至1000ml，搖勻即得。2）標(biāo)定①無水碳酸鈉標(biāo)定精密稱取在300℃干燥至恒重的基準(zhǔn)無水碳酸鈉0.1g，準(zhǔn)確至0.0001g，加蒸餾水50ml使溶解，加甲基紅—溴甲酚綠混合指示劑10滴，用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)榘导t色，煮沸2min，冷卻后繼續(xù)滴定至溶液再呈暗紫色為終點。同時做空白試驗。根據(jù)下式計算HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度：式中，W—基準(zhǔn)無水碳酸鈉的稱取量（g）；V—滴定時消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）；V0—空白試驗滴定時消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）。②硼砂標(biāo)定稱取0.1g干燥的四硼酸鈉（即硼砂Na2B4O7·10H2O，GB632-78，分析純），準(zhǔn)確至0.0001g，置于250ml錐形瓶中，加100ml蒸餾水溶解，加甲基紅指示劑5～6滴，用0.05mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由黃變橙色為止。根據(jù)下式計算HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度：式中，W—四硼酸鈉稱取量（g）；V—滴定消耗HCl溶液體積（ml）。每次標(biāo)定至少取3份平行樣進(jìn)行操作，計算結(jié)果的相對偏差不得超過0.2%，否則需重新標(biāo)定，以其算術(shù)平均值作為標(biāo)定結(jié)果。8.蔗糖（HG3-1001-76），分析純。9.硫酸銨（GB1396-78），分析純。五、試樣的選取與制備取具有代表性試樣，粉碎至40目，用四分法縮減至200g，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化或變質(zhì)。六、測定步驟1.消化稱取0.2g左右試樣（含氮量5～80mg）準(zhǔn)確至0.0001g，無損失地移入消化管中，加入硫酸銅0.2g，硫酸鈉3g，與試樣混合均勻，再加濃硫酸10ml，置于消煮爐上小心加熱，待樣品焦化，泡沫消失，再加強火力（410℃），至溶液澄清則消化完畢。將試樣消化液冷卻，無損失地轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，冷卻后用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，則為試樣分解液。2.蒸餾取2%硼酸溶液20ml至錐形瓶中作為反應(yīng)吸收液，并加混合指示劑2滴，將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入該液面下。準(zhǔn)確移取試樣分解液10ml注入蒸餾裝置的反應(yīng)腔中，用少量蒸餾水沖洗進(jìn)樣入口，塞好玻璃塞，并在入口處加水密封好。再在堿液入口緩慢加入10～20ml40%氫氧化鈉溶液，亦使之流入反應(yīng)腔中，并把堿液入口封存好。進(jìn)行蒸餾。以錐形瓶中溶液變藍(lán)綠色開始計時3min，然后將冷凝管末端離開錐形瓶液面，再蒸餾1min，用少量蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液亦流入吸收液中。3.滴定用硼酸吸收氨后，立即用0.05mol/L的HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行滴定，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛壹t色為終點。4.空白測定稱取蔗糖0.01g，以代替試樣，按上述測定步驟進(jìn)行空白測定，消耗0.05mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積應(yīng)不得超過0.3ml。七、結(jié)果計算1.計算公式式中：V1—試樣滴定所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）；V0—空白滴定所需鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）；C—鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（mol/L）；W—試樣重（g）；V—試樣分解液總體積（ml）；V'—試樣分解液蒸餾用體積（ml）；0.0140—每ml鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于氮的g數(shù)；6.25—氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。2.重復(fù)性每個試樣至少取兩個平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在25%以上時，允許相對偏差≤1%；當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在10%～25%時，允許相對偏差≤2%；當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在10%以下時，允許相對偏差≤3%。3.測定步驟的檢驗稱取0.2g硫酸銨，準(zhǔn)確至0.0001g，代替試樣，按測定步驟進(jìn)行操作，并按上述公式計算（不乘系數(shù)6.25），測得硫酸銨含氮量為（21.19±0.20）%為合格。否則應(yīng)檢查加堿量、蒸餾和滴定等步驟是否正確。八、注意事項1.本方法不能區(qū)別蛋白氮和非蛋白氮。在測定結(jié)果中除蛋白質(zhì)外，還有氨基酸、酰胺、銨鹽等，故以粗蛋白質(zhì)表示。2.消化過程中，硫酸銅為催化劑，硫酸鈉起提高沸點的作用。3.蒸餾時，蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器內(nèi)的水應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此溶液為橙紅色，以防止水中氨態(tài)氮的逸失影響測值。4.每次蒸餾結(jié)束后，應(yīng)用蒸汽將蒸餾裝置反應(yīng)腔中殘液洗凈。5.試樣中硝酸鹽和亞硝酸鹽含量將直接影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。據(jù)化學(xué)理論與實際測定證實有如下反應(yīng)：故本法在消化過程中，試樣中的硝酸根(NO3-)可還原為亞硝酸根(NO2-)，而NO2-則可與銨離子(NH4+)生成氮氣(N2)逸出，從而使測值偏低。九、其他除本節(jié)介紹飼料粗蛋白質(zhì)測定方法外，有條件者可通過定氮儀進(jìn)行粗蛋白質(zhì)的快速測定。實驗五飼料中粗纖維的測定（酸堿處理法）一、原理用固定濃度的酸和堿，在特定條件下消煮樣品以除去粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和無氮浸出物，再經(jīng)高溫灼燒扣除礦物質(zhì)的量，所余量為粗纖維。它不是一個確切的化學(xué)實體，只是在公認(rèn)強制規(guī)定條件下測出的概略養(yǎng)分。其中以纖維素為主，還有少量半纖維素和木質(zhì)素。二、適用范圍本方法適用于配合飼料和各種單一飼料。三、儀器設(shè)備1.實驗室用樣品粉碎機或研缽。2.分樣篩，孔徑0.45mm（40目）。3.分析天平，感量0.0001g。4.電熱式恒溫干燥箱（烘箱），可控溫度在105±2℃5.高溫電爐，可控溫度在550±20℃6.瓷坩堝，Φ30mm。7.消煮器（六聯(lián)電爐），配有冷凝球的高型燒杯（800ml）或有冷凝管的錐形瓶。8.干燥器，用變色硅膠或氯化鈣作干燥劑。9.過濾網(wǎng)，200目不銹鋼網(wǎng)。10.定量濾紙，中速，Φ12cm。四、試劑1.硫酸（GB625-89），分析純，配成5%硫酸溶液。2.氫氧化鈉（GB629-81），分析純，配成5%氫氧化鈉溶液。五、試樣的選取與制備取具有代表性試樣，粉碎至40目，用四分法縮減至200g，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化或變質(zhì)。六、測定步驟1.空坩堝灼燒至恒重（W0）將干凈坩堝放入高溫電爐，在550±20℃下灼燒30min，取出，在空氣中冷卻約1min，然后移入干燥器冷卻30min，稱重。再同樣灼燒，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.0005g為恒重。2.坩堝+濾紙烘干至恒重（W1）在已恒重的坩堝中放入一張定量濾紙，然后開蓋置于105±2℃烘箱中烘6h，取出，蓋好坩堝蓋，在干燥器中冷卻30min，稱重。再同樣烘干1h，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001g為恒重。3.稱樣（W）稱取2g左右樣品，準(zhǔn)確至0.0001g，放入干凈的高型燒杯中。4.酸堿消煮將高型燒杯置于消煮器上，加50ml5%的硫酸溶液，繼續(xù)加入沸蒸餾水至200ml刻線處，放好冷凝球，立即加熱，使其在2min內(nèi)沸騰，進(jìn)行酸消煮，保持微沸30±1min，趁熱過濾，將殘渣轉(zhuǎn)移至不銹鋼濾網(wǎng)上，用熱蒸餾水沖洗殘渣至中性（pH試紙沾取濾液顏色不變則可）。將殘渣放回原高型燒杯中，加50ml5%的氫氧化鈉溶液，繼續(xù)加入沸蒸餾水至200ml刻線處，放好冷凝球，立即加熱，使其在2min內(nèi)沸騰，進(jìn)行堿消煮，保持微沸30±1min，趁熱過濾，將殘渣轉(zhuǎn)移至不銹鋼濾網(wǎng)上，用熱蒸餾水沖洗殘渣至中性（pH試紙沾取濾液顏色不變則可）。5.殘渣+濾紙+坩堝烘干至恒重（W2）將酸堿消煮殘渣過濾至已恒重的濾紙上，放回原坩堝中，開蓋置于105±2℃烘箱中烘6h，取出，蓋好坩堝蓋，在干燥器中冷卻30min，稱重。再同樣烘干1h，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.001g為恒重。6.殘渣+濾紙+坩堝灼燒至恒重（W3）將已烘干至恒重的殘渣+濾紙+坩堝再置于高溫電爐中550±20℃下灼燒30min，取出，在空氣中冷卻約1min，然后移入干燥器冷卻30min，稱重。再同樣灼燒，冷卻，稱重，直至兩次稱重之差小于0.0005g為恒重。七、結(jié)果計算1.計算公式2.重復(fù)性每個試樣至少應(yīng)取兩個平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。粗纖維含量≥10%時，允許相對偏差為4%；粗纖維含量＜10%時，允許相差（絕對值）為0.4。八、注意事項1.試樣含脂肪小于1%時可不脫脂，含脂肪1%～10%時建議脫脂，含脂肪在10%以上時必須脫脂，或用測定脂肪后的試樣殘渣。2.進(jìn)行酸煮和堿煮過程中，硫酸和氫氧化鈉溶液濃度實際均為1.25%，相當(dāng)于0.125mol/L的H2SO4和0.313mol/L的NaOH。3.在酸煮后和堿煮后沖洗至中性過程中，最好用熱蒸餾水，宜于過濾。4.定量濾紙與定性濾紙的主要差異在于粗灰分含量不同，定量濾紙粗灰分含量在0.01%，可忽略不計，而定性濾紙粗灰分含量為0.15%左右。九、其他除本節(jié)介紹飼料中粗纖維含量測定方法外，亦可通過纖維測定儀進(jìn)行粗纖維的快速測定。附：飼料中NDF、ADF的快速測定一、原理植物性飼料（如一般飼料、牧草和粗飼料）經(jīng)中性洗滌劑（3%十二烷基硫酸鈉）分解，大部分細(xì)胞內(nèi)容物溶解于洗滌劑中，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白質(zhì)，統(tǒng)稱為中性洗滌劑溶解物（NDS），而不溶解的殘渣為中性洗滌纖維（NDF），這部分主要是細(xì)胞壁部分，如纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、硅酸鹽和極少量的蛋白質(zhì)。酸性洗滌劑可將中性洗滌纖維（NDF）中各組分進(jìn)一步分解。植物性飼料可溶于酸性洗滌劑的部分稱為酸性洗滌劑溶解物（ADS），主要有中性洗滌劑溶解物（NDS）和半纖維素，剩余的殘渣稱為酸性洗滌纖維（ADF），其中含有纖維素、木質(zhì)素和硅酸鹽。此外，由中性洗滌纖維（NDF）與酸性洗滌纖維（ADF）值之差即可得到飼料中的半纖維素含量。酸性洗滌纖維經(jīng)72%硫酸的消化，則纖維素被溶解，其殘渣為木質(zhì)素和硅酸鹽，所以從酸性洗滌纖維（ADF）值中減去72%硫酸消化后殘渣部分則為飼料中纖維素的含量。將經(jīng)72%硫酸消化后的殘渣灰化，灰分則為飼料中硅酸鹽的含量，而在灰化中逸出的部分即為酸性洗滌木質(zhì)素（ADL）的含量。上述可用圖2-1表示。植物性飼料植物性飼料中性洗滌溶解物NDS（蛋白質(zhì)、脂肪、淀粉、糖）中性洗滌纖維NDF（半纖維素、纖維素、木質(zhì)素、硅酸鹽）中性洗滌纖維NDF（纖維素、木質(zhì)素、硅酸鹽）酸性洗滌溶解物ADS（半纖維素）殘渣（木質(zhì)素、硅酸鹽）溶解物（纖維素）燒盡（逸出）酸性洗滌木質(zhì)素ADL殘渣（灰分，即硅酸鹽）72%硫酸500℃，2h，圖2-1VanSoest分析法示意圖二、適用范圍本方法適用于各種植物性飼料。三、儀器設(shè)備1.分析天平，感量0.0001g。2.電熱式恒溫干燥箱（烘箱），可控溫度在105±2℃3.高溫電爐，可控溫度在550±20℃4.六聯(lián)調(diào)溫電爐。5.冷凝器或冷凝裝置，2套。6.高型燒杯，600ml。7.抽濾瓶，500ml，2個。8.真空泵。9.干燥器，用變色硅膠或氯化鈣作干燥劑。10.玻璃坩堝，40ml，2個。11.坩堝鉗，長柄、短柄。12.表面皿。13.燒杯，500ml。14.容量瓶，1000ml。15.量筒，100ml。16.滴管。17.洗瓶，500ml。18.長玻棒，膠頭。19.橡皮管，壁厚0.5～0.7cm。20.藥勺。四、試劑1.中性洗滌劑（3%十二烷基硫酸鈉）。準(zhǔn)確稱取18.6g乙二胺四乙酸二鈉（EDTA，C10H14N2O8Na2·2H2O，化學(xué)純）和6.8g硼砂（Na2B4O7·10H2O，GB632-78，分析純）一同放入1000ml刻度燒杯中，加入少量蒸餾水，加熱溶解后，再加入30g十二烷基硫酸鈉（C12H25NaO4S，化學(xué)純）和10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，化學(xué)純）；稱取4.56g無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4，化學(xué)純）置于另一燒杯中，加少量蒸餾水微微加熱溶解后，傾入第一個燒杯中，在容量瓶中稀釋至1000ml，此溶液pH在6.9～7.1（pH一般不需要調(diào)整）。2.1.00mol/L硫酸。取約27.87ml濃硫酸（H2SO4，化學(xué)純，96%，比重1.84）慢慢加入已裝有500ml蒸餾水的燒杯中，冷卻后注入1000ml容量瓶內(nèi)定容。（如需標(biāo)定，以1.6g基準(zhǔn)無水碳酸鈉參見第二章第四節(jié)HCl標(biāo)定方法進(jìn)行）。3.酸性洗滌劑（2%十六烷三甲基溴化銨）稱取20g十六烷三甲基溴化銨（CTAB，化學(xué)純）溶于1000ml1.00mol/L硫酸溶液中，攪拌溶解，必要時過濾。4.無水亞硫酸鈉，Na2SO3，化學(xué)純。5.丙酮，CH3COCH3，化學(xué)純。6.十氫化萘，C10H18，化學(xué)純。五、測定方法1.稱取1g左右樣品（磨碎并通過1mm篩孔）置于高型燒杯中，加入中性或酸性洗滌劑100ml，在高型燒杯上裝置球形冷凝管。2.將高型燒杯置于調(diào)溫電爐上加熱，要求在5～10min內(nèi)煮沸，回流1h（調(diào)節(jié)電爐溫度，使溶液保持在微沸狀態(tài)，防止泡沫上升），注意經(jīng)常搖動燒杯，使燒杯內(nèi)樣品與溶液充分混合和接觸。3.回流結(jié)束后，取下高型燒杯，將燒杯中溶液緩慢倒入鋪有干燥并稱重后的定量濾紙的漏斗上，以抽濾裝置抽濾，注意調(diào)節(jié)抽氣速度，防止濾紙破裂。4.關(guān)閉抽濾裝置，將高型燒杯中的樣品殘渣全部倒在濾紙上，并用熱蒸餾水（＞90℃5.用丙酮沖洗殘渣至流下的丙酮液呈無色為止。6.將殘渣用濾紙包好，置于105±2℃六、結(jié)果計算1.計算公式2.重復(fù)性每個試樣至少應(yīng)取兩個平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。中（酸）性洗滌纖維含量≥10%時，允許相對偏差為4%；中（酸）性洗滌纖維含量＜10%時，允許相差（絕對值）為0.4。實驗六飼料中無氮浸出物的計算一、原理飼料中無氮浸出物主要包括淀粉和糖，以及一些半纖維素、木質(zhì)素、有機酸等。因這些成分十分復(fù)雜，無法一一測定，故一般采用的飼料分析方案中，無氮浸出物（NFE）是根據(jù)間接計算法求得。即在100中減去水分、粗灰分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維等的百分?jǐn)?shù)，所得之差即為無氮浸出物的百分含量。由于不進(jìn)行直接測定，其它養(yǎng)分的測值準(zhǔn)確與否都會影響無氮浸出物的結(jié)果，因而只能概括說明飼料中這一部分養(yǎng)分的含量。二、計算公式實驗七飼料中鈣含量的測定（滴定法）一、原理用強酸將試樣中的有機物破壞，鈣變成溶于水的離子，用過量草酸銨使Ca2+全部生成草酸鈣沉淀，再以氨水洗去游離的草酸根，最后用高錳酸鉀滴定與鈣結(jié)合的草酸根間接測定鈣的含量。主要化學(xué)反應(yīng)如下：二、適用范圍本方法適用于各種混合飼料（配合飼料、濃縮飼料及預(yù)混合飼料等）和單一飼料。三、儀器設(shè)備1.實驗室用樣品粉碎機或研缽。2.分樣篩，孔徑0.45mm（40目）。3.分析天平，感量0.0001g。4.高溫電爐，可控溫度在550±20℃5.瓷坩堝，Φ30mm。6.容量瓶，100ml。7.滴定管，酸式，25或50ml。8.玻璃漏斗，Φ6cm。9.定量濾紙，中速，Φ7～9cm。10.移液管，10ml和20ml。11.錐形瓶（或燒杯），250ml。12.凱氏燒瓶，250或500ml。四、試劑1.鹽酸（GB622-89），分析純，1:1水溶液。2.硝酸（GB626-89），分析純。3.硫酸（GB625-89），分析純，1:3水溶液。4.氨水（GB631-77），分析純，1:1水溶液和1:50水溶液。5.草酸銨（HG3-976-81），分析純，4.2%水溶液。6.甲基紅指示劑，甲基紅（HG3-958-76），分析純，0.1g溶于100ml95%乙醇中。7.0.05mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液1）配制稱取高錳酸鉀（GB643-88，分析純）約1.6g，溶于1000ml蒸餾水中，煮沸10min，冷卻靜置1～2天，過濾保存于棕色瓶中。2）標(biāo)定稱取草酸鈉基準(zhǔn)物（GB1289-77，105±2℃烘干2h，存于干燥器中）0.1g，準(zhǔn)確至0.0001g，溶于50ml水中，再加1:3硫酸溶液10ml，將此溶液加熱至75℃～85℃，用配制的高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定。溶液呈現(xiàn)粉紅色且1min內(nèi)不褪色為終點。要求滴定結(jié)束時，溶液溫度在60℃以上。同時做試劑空白試驗。高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（C）計算公式如下：式中，m—基準(zhǔn)草酸鈉（Na2C2O4）的克數(shù)（g）；0.0670—1ml高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)于基準(zhǔn)草酸鈉的克數(shù)；V—滴定時消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）；V0—試劑空白試驗時消耗高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積（ml）。每次標(biāo)定至少取3份平行樣進(jìn)行操作，計算結(jié)果的相對偏差不得超過0.2%，否則需重新標(biāo)定，以其算術(shù)平均值作為標(biāo)定結(jié)果。8.高氯酸（GB623-77），分析純。五、試樣的選取與制備取具有代表性試樣，粉碎至40目，用四分法縮減至200g，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化或變質(zhì)。六、測定步驟1.試樣分解液的制備（1）干法稱取試樣2g左右于坩堝中，準(zhǔn)確至0.0001g，在高溫電爐中300℃小心炭化20min，再升高溫度在550±20℃下灼燒3h（或測定粗灰分后繼續(xù)進(jìn)行）。在盛灰坩堝中加入1:1鹽酸溶液10ml和濃硝酸5～6滴，攪拌溶解10min，轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。（2）濕法（用于無機物或液體飼料）稱取試樣2～5g于凱氏燒瓶中，準(zhǔn)確至0.0001g。加入硝酸30ml，加熱煮沸，至二氧化氮黃煙逸盡，冷卻后加入70%～72%高氯酸10ml，小心煮沸至溶液無色，不得蒸干（否則易爆炸！危險?。。?。冷卻后加蒸餾水50ml，并煮沸驅(qū)除二氧化氮，冷卻后轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。2.鈣沉淀的生成準(zhǔn)確移取10～20ml試樣分解液于錐形瓶中，加蒸餾水100ml和甲基紅指示劑2滴，并滴加1:1氨水溶液使變橙色，再逐滴加1:1鹽酸溶液使剛好變紅（此時pH為2.5～3.0），小心煮沸，趁熱加入草酸銨溶液10ml，并不斷攪拌，若溶液變橙色，則滴加鹽酸使再變紅色。放置過夜使草酸鈣沉淀陳化。3.鈣沉淀的洗滌將鈣沉淀用定量濾紙過濾，并用1:50氨水溶液洗沉淀6～8次（氨水量應(yīng)浸沒沉淀并全部濾凈為洗滌1次），使無游離草酸根離子（接濾液數(shù)ml，加硫酸溶液數(shù)滴，加熱至80℃，再加高錳酸鉀溶液1滴，呈微紅色且半分鐘不褪色，則證明無草酸根離子）。4.高錳酸鉀滴定將沉淀和濾紙轉(zhuǎn)入原錐形瓶，加1:3硫酸溶液10ml，蒸餾水50ml，加熱至75℃～85℃，用0.05mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液呈粉紅色且半分鐘不褪色為終點。同時進(jìn)行空白溶液測定。七、結(jié)果計算1.計算公式式中，V—試樣測定時0.05mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定用體積（ml）；V0—空白測定時0.05mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定用體積（ml）；C—高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（mol/L）；W—試樣重（g）；V'—移取試樣分解液體積（ml）；40/2—鈣的mol數(shù)。2.重復(fù)性每個試樣至少取兩個平行樣進(jìn)行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。含鈣量在1%以下時，允許相對偏差10%；含鈣量在1%～5%時，允許相對偏差5%；含鈣量在5%以上時，允許相對偏差3%。八、注意事項1.高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度不穩(wěn)定，應(yīng)至少每月標(biāo)定一次。2.每種濾紙的空白值不同，消耗高錳酸鉀溶液體積也不一樣，因此，至少每盒濾紙應(yīng)做一次空白溶液測定。九、其他除本法外，還有氮磷鈣測定儀可對飼料中鈣含量進(jìn)行快速測定。實驗八飼料中總磷含量的測定（比色法）一、原理用強酸