葡萄籽提取物對(duì)人體抗氧化作用的研究

葡萄籽提取物對(duì)人體抗氧化作用的研究

1材料和方法1.1《葡萄籽提取物膠囊》,反應(yīng)總劑量為5.10用于葡萄籽提取物1號(hào)和2號(hào)的公司。兩者的包裝、外觀、顏色和口感基本相同。其中之一是葡萄籽提取物膠囊，另一個(gè)是一種安慰劑。推薦劑量如下：口服2次，每次2次。1.2受試者選擇1.2.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的包含受試者性別不限。年齡45～65歲,身體健康狀況良好,無(wú)明顯腦、心、肝、肺、腎、血液疾患,無(wú)長(zhǎng)期服藥史的自愿受試者并保證配合。1.2.2短期服用與受試功能相關(guān)的物品妊娠或哺乳期婦女;對(duì)保健食品過(guò)敏者;合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病患者;短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)的物品,影響到對(duì)結(jié)果判斷者;不符合納入標(biāo)準(zhǔn),未按規(guī)定食用受試樣品,無(wú)法判定功效或資料不全影響功效或安全性判定者。1.3藥物代謝和gsh-px水平采用自身和組間兩種對(duì)照設(shè)計(jì)。按受試者血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)水平隨機(jī)分為葡萄籽提取物軟膠囊試食組和安慰劑對(duì)照組。并盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如年齡、性別等,進(jìn)行均衡性檢驗(yàn),以保證組間的可比性,按雙盲法進(jìn)行試食試驗(yàn)。1.4分組及給藥時(shí)間將符合納入標(biāo)準(zhǔn)并保證配合試驗(yàn)的自愿受試者,按照1.3隨機(jī)分為受試組和對(duì)照組。受試組與對(duì)照組按推薦劑量服用樣品或安慰劑,連續(xù)180d。試驗(yàn)期間不改變?cè)瓉?lái)的飲食習(xí)慣,正常飲食。1.5觀察指標(biāo)各項(xiàng)觀察指標(biāo)于試食試驗(yàn)開(kāi)始及結(jié)束時(shí)各測(cè)定1次。1.5.1血常規(guī)和生化檢查1)一般體格檢查:試驗(yàn)前詳細(xì)詢問(wèn)受試者健康狀況,了解受試者的精神、睡眠、飲食、大小便等情況,并測(cè)定體重、血壓、心率。對(duì)所有受試者進(jìn)行常規(guī)體格檢查及必要的實(shí)驗(yàn)室檢查。2)血常規(guī):紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白含量測(cè)定等。3)尿常規(guī):pH值、白細(xì)胞、尿糖等。4)糞便常規(guī):顏色、蟲(chóng)卵、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、膿細(xì)胞等。5)生化檢測(cè):血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、血糖(GLU)測(cè)定。6)心電圖、腹部B超、胸透等檢查。7)不良反應(yīng)觀察。1.5.2超氧化物歧化酶檢測(cè)1)過(guò)氧化脂質(zhì)含量觀察試驗(yàn)前后MDA的變化及MDA下降率。MDA下降率=(試驗(yàn)前MDA-試驗(yàn)后MDA)/試驗(yàn)前MDA×100%。2)超氧化物歧化酶:觀察試驗(yàn)前后SOD的變化及SOD的升高率。SOD升高率=(試驗(yàn)后SOD-試驗(yàn)前SOD)/試驗(yàn)前SOD×100%。3)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶:觀察試驗(yàn)前后GSH-Px的變化及GSH-Px的升高率。GSH-Px升高率=(試驗(yàn)后GSH-Px-試驗(yàn)前GSH-Px)/試驗(yàn)前GSH-Px×100%。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理指標(biāo)1)各功效觀察指標(biāo)試驗(yàn)前后自身比較和試食后組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,方可判定該指標(biāo)陽(yáng)性。2)過(guò)氧化脂質(zhì)含量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中任一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性,可判定受試樣品具有抗氧化功能作用。1.7身對(duì)照資料均數(shù)和檢驗(yàn)資料結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)(xˉ±s)表示,自身配對(duì)資料采用配對(duì)t檢驗(yàn),試驗(yàn)組和對(duì)照組之間在方差齊性的前提下,均數(shù)比較采用成組t檢驗(yàn),否則進(jìn)行變量轉(zhuǎn)化后滿足方差齊性后采用t檢驗(yàn),如果方差仍然不齊,采用秩和檢驗(yàn)。2結(jié)果雙盲法觀察結(jié)束揭曉:服食1號(hào)者為葡萄籽提取物軟膠囊,服食2號(hào)者為安慰劑。2.1資料不全或無(wú)法判斷效果被篩除的社會(huì)原因初始試驗(yàn)人群試驗(yàn)組53例,對(duì)照組53例,經(jīng)過(guò)180d試驗(yàn)后,試驗(yàn)組有2例受試者因資料不全或無(wú)法判斷效果被篩除,對(duì)照組有3例受試者因資料不全或無(wú)法判斷效果被篩除。最后有效試驗(yàn)人群試驗(yàn)組51例,對(duì)照組50例。試食前后,受試者精神、睡眠、飲食、大小便狀況未見(jiàn)異常。2.2營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)檢測(cè)2.2.1體重、血壓、心率、尿常規(guī)、大便常規(guī)、血常規(guī)及生化檢測(cè)見(jiàn)表1、表2。食用受試物180d后,試食組和對(duì)照組體重、血壓、心率、血常規(guī)、尿常規(guī)、大便常規(guī)及生化指標(biāo)均未見(jiàn)明顯異常改變,提示葡萄籽提取物軟膠囊對(duì)機(jī)體健康無(wú)明顯損害。2.2.2心電圖、腹部B超、胸透檢查,均未見(jiàn)明顯異常。2.2.3試食期間未見(jiàn)與樣品相關(guān)的不良反應(yīng)。2.3兩組血清sod活力比較試食試驗(yàn)前后血清MDA、SOD、GSH-Px水平變化情況見(jiàn)表3、表4。試驗(yàn)前,對(duì)照組和試食組血清MDA、SOD、GSH-Px水平比較,P均>0.05,提示兩組之間具有可比性。試驗(yàn)后試食組血清SOD活力與對(duì)照組試食后及自身試驗(yàn)前比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。試食后試食組血清GSH-Px、MDA與對(duì)照組及自身試驗(yàn)前比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。試驗(yàn)組血清SOD較試驗(yàn)前升高17.41%,血清MDA較試驗(yàn)前降低5.91%,血清GSH-Px活力較試驗(yàn)前升高7.37%。3葡萄籽提取物抗氧化作用機(jī)體氧化反應(yīng)中產(chǎn)生的有害化合物,具有強(qiáng)氧化性,可損害機(jī)體的組織和細(xì)胞,進(jìn)而引起慢性疾病及衰老效應(yīng)。人體氧化反應(yīng)中產(chǎn)生的自由基,它們既可以幫助傳遞維持生命活力的能量,也可以被用來(lái)殺滅細(xì)菌和寄生蟲(chóng),還能參與排除毒素。受控的自由基對(duì)人體是有益的。但當(dāng)人體中的自由基超過(guò)一定的量,并失去控制時(shí),這種自由基就會(huì)給我們的生命帶來(lái)傷害。自由基對(duì)人體的損害主要有三個(gè)方面:1)使細(xì)胞膜被破壞;2)使血清抗蛋白酶失去活性;3)損傷基因?qū)е录?xì)胞變異的出現(xiàn)和蓄積。過(guò)氧化物歧化酶(SOD)是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶,廣泛分布于各種生物體內(nèi),SOD具有特殊的生理活性,是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)。SOD在生物體內(nèi)的水平高低意味著衰老與死亡的直觀指標(biāo);它可對(duì)抗與阻斷因氧自由基對(duì)細(xì)胞造成的損害,并及時(shí)修復(fù)受損細(xì)胞,復(fù)原因自由基造成的對(duì)細(xì)胞傷害。自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng),氧化終產(chǎn)物為丙二醛(MDA),會(huì)引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合,且具有細(xì)胞毒性。葡萄籽提取物含有原花青素等抗氧化物質(zhì),原花青素是一種良好的氧游離基清除劑和脂質(zhì)過(guò)氧化抑制劑,可有效清除超氧陰離子自由基和羥基自由基,也參與磷脂、花生四烯酸的新陳代謝和蛋白質(zhì)磷酸化,保護(hù)脂質(zhì)不發(fā)生過(guò)氧化損傷,多項(xiàng)研究證實(shí)其具有抗氧化作用。前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)表明葡萄籽提取物可使老齡小鼠MDA含量顯著降低,SOD活性明顯增強(qiáng),具有抗氧化作用。本人體試食實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,葡萄籽提