第九章血脂及血漿脂蛋白檢驗

第九章血脂及血漿脂蛋白檢驗第一節(jié)概述第二節(jié)血清總膽固醇測定第三節(jié)血清三脂酰甘油測定第四節(jié)血清高密度脂蛋白膽固醇測定第五節(jié)血清低密度脂蛋白膽固醇測定第六節(jié)血清載脂蛋白A1和B測定第七節(jié)血清脂蛋白電泳分析第八節(jié)血清脂蛋白（a）測定本章內(nèi)容概要第一節(jié)概述血脂及血漿脂蛋白脂蛋白代謝紊亂一、血脂及血漿脂蛋白

血脂：是指血漿中脂類的總稱。屬于中性脂肪（甘油三酯和膽固醇）和類脂（磷脂、糖脂、固醇、類固醇）的總稱定義：

脂蛋白：脂類難溶于水，正常血漿脂類物質(zhì)與蛋白質(zhì)結(jié)合成脂蛋白的形式存在。（一）血漿脂蛋白的分類超速離心法：根據(jù)脂蛋白在一定密度的介質(zhì)中漂浮速率不同而進行分離的方法。

電泳分離法：根據(jù)不同密度的脂蛋白所含蛋白質(zhì)的表面電荷不同，利用電泳將其分離，并與血漿蛋白質(zhì)的遷移率比較以判斷其部位。

分離方法超速離心法：乳糜微粒（chylomicron,CM）極低密度脂蛋白（verylowdensitylipoprotein,VLDL）中間密度脂蛋白（intermediatedensitylipoprotein,IDL）低密度脂蛋白（lowdensitylipoprotein，LDL）高密度脂蛋白（highdensitylipoprotein，HDL）脂蛋白（a）（lipoprotein(a),Lp(a)）

乳糜微粒、前-

、

和

四條脂蛋白區(qū)帶

電泳法（二）血漿脂蛋白的組成組成：

蛋白質(zhì)、三脂酰甘油、磷脂（PL）、游離膽固醇（FC）及膽固醇酯（CE）等成分組成。其中蛋白質(zhì)部分稱為載脂蛋白（Apo）AⅠApoAAⅡAⅢB48ApoB載脂蛋白（a）B100CⅠApoCCⅡCⅢApoD

近年來，還發(fā)現(xiàn)了Lp（a）脂蛋白分類1.乳糜微粒CM顆粒最大，脂類含量高達98%，密度極低。由小腸粘膜細胞在吸收食物脂類（主要是甘油三酯）時合成，經(jīng)乳糜導(dǎo)管，胸導(dǎo)管到血液。主要功能為運輸外源性甘油三酯。2.極低密度脂蛋白vldl主要在肝臟利用脂肪酸和葡萄糖合成。若食物攝取過量糖或體內(nèi)脂肪動用過多，均可導(dǎo)致血vldl增高。vldl中脂類占85%-90%，其密度也很低。主要功能為vLdL是運輸內(nèi)源性甘油三酯。3.低密度脂蛋白LdL的結(jié)構(gòu)大致可分為三層：內(nèi)層、中層、外層。游離膽固醇分布于三層之中。4.高密度脂蛋白HBL是一組不均一的脂蛋白HBL主要由肝合成，小腸也可合成，HBL按密度大小又可分為HBL1、HBL2和HBL3。HBL1又稱為HBLc，僅在攝取高膽固醇膳食后才在血中出現(xiàn)，健康人血漿中主要含HBL2和HBL3。HBL主要是將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運到肝進行代謝。5.脂蛋白（a）lp(a)核心部分由甘油三酯、磷脂、膽固醇、膽固醇酯等脂質(zhì)和載脂蛋白b100組成，結(jié)構(gòu)類似LdL。lp(a)含有兩類載脂蛋白，即apoB100和apo(a)lp(a)是動脈粥樣硬化性疾病的一項獨立危險因子。

（三）血漿脂蛋白的結(jié)構(gòu)與功能結(jié)構(gòu)：大致為球形顆粒，由兩大部分組成即疏水性的內(nèi)核和親水性的外殼（圖10-1）。內(nèi)核由不同量的CE與TG組成表層由載脂蛋白、PL及FC組成FC及PL的極性基團向外露在血漿中，載脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中，而親水部分突出于脂蛋白顆粒的表面。血漿脂蛋白的結(jié)構(gòu)與載脂蛋白的功能有密切的聯(lián)系脂蛋白的蛋白部分稱為載脂蛋白(Apo)載脂蛋白定義：種類：按1972年Alaupovic建議的命名方法，用英文字母順序編碼，分為ApoA、B、C、D、E、F、G、H、J等。由于氨基酸組成的差異，每一型又可分若干亞型。功能：

①維持脂蛋白的結(jié)構(gòu)例如：ApoAⅠ、ApoCⅠ、ApoE②調(diào)節(jié)脂蛋白代謝的關(guān)鍵酶例如：ApoAⅠ、ApoCⅠ能激活磷脂酰膽堿膽固醇脂?；D(zhuǎn)移酶（LCAT）促進膽固醇的酯化，ApoCⅡ激活脂蛋白脂肪酶（LPL），促進CM和VLDL中三脂酰甘油降解③識別脂蛋白受體例如：ApoE能識別肝細胞CM殘余顆粒受體ApoB100識別LDL受體脂蛋白受體定義：脂蛋白受體是一類位于細胞膜上的糖蛋白。它能以高度的親和方式與相應(yīng)的脂蛋白配體作用，從而介導(dǎo)細胞對脂蛋白的攝取與代謝，進一步調(diào)節(jié)細胞外脂蛋白的水平。脂蛋白與脂蛋白受體的作用：

不僅是運送細胞所必需的脂蛋白，也能消除血和外周組織中具有潛在致動脈粥樣硬化的脂蛋白。種類：

已有很多種，主要有LDL受體、殘粒受體及清道夫受體。LDL受體：

不僅能識別ApoB100、ApoE，在細胞結(jié)合、攝取和降解LDL及其它含ApoB100的脂蛋白過程中起中介作用，對維持細胞和全身膽固醇平衡起重要作用。各種脂蛋白受體功能殘粒受體：

能識別ApoE，是清除血液循環(huán)中CM殘粒和β-VLDL殘粒的主要受體，它也能結(jié)合含ApoE的HDL。

清道夫受體：

主要存在于巨噬細胞表面,介導(dǎo)修飾LDL(包括氧化LDL和

-VLDL)從血液循環(huán)中清除。

二、血漿脂蛋白代謝紊亂血漿脂蛋白代謝分類：外源性代謝途徑：指食物中攝入的膽固醇和甘油三酯在小腸中合成CM及CM代謝的過程。內(nèi)源性代謝途徑：指肝臟合成VLDL，然后轉(zhuǎn)變?yōu)镮DL和LDL

并被肝臟或其它器官代謝的過程膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運：HDL參與將膽固醇從外周組織運輸?shù)礁闻K的過程。

脂蛋白代謝紊亂（一）高脂蛋白血癥定義：

高脂血癥是指血漿中膽固醇或和甘油三酯水平升高。血漿脂類以血漿脂蛋白形式存在，因此，高脂血癥一定時會導(dǎo)致高脂蛋白血癥。

分型：

1．表型分型法

主要是基于各種血漿脂蛋白升高的程度不同而進行分型。該分類法不包括病因?qū)W，故稱表型分類。

（1）Ⅰ型高脂蛋白血癥又稱家族性高乳糜微粒血癥（2）Ⅱa型高脂白血癥（3）Ⅱb型高脂蛋白血癥（4）Ⅲ型高脂蛋白血癥（5）Ⅳ型高脂蛋白血癥（6）Ⅴ型高脂蛋白血癥高脂蛋白血癥表型分型法甘油三酯及膽固醇危險水平的劃分標準2．按是否繼發(fā)于全身性疾病分類

繼發(fā)性高脂血癥：

原發(fā)性高脂血癥：

繼發(fā)性者由一些全身性疾病引起血脂異常，如糖尿病、腎病綜合征、腎功能衰竭、甲狀腺功能減退癥、肝膽疾病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、肥胖癥、飲酒等。此外，某些藥物如β-受體阻斷劑、降壓藥等也可引起血脂異常。

在排除繼發(fā)性高脂血癥后，可診斷為原發(fā)性。已知部分原發(fā)性高脂血癥由先天性基因缺陷所致3．高脂血癥的基因分型法

家族性高脂血癥的臨床特征常用名基因缺陷臨床特征表型分類家族性高膽固醇血癥LDL受體缺陷以膽固醇升高為主，可伴輕度甘油三酯升高，LDL明顯增加，可有肌腱黃色瘤，多有冠心病和高脂血癥家族史。ⅡaⅡb家族性ApoB100缺陷癥ApoB100缺陷同上同上家族性混合型高脂血癥不清楚膽固醇和甘油三酯均升高，VLDL和LDL都增加，無黃色瘤，家族成員中有不同型高脂蛋白血癥，有冠心病家族史。Ⅱb家族性異常β脂蛋白血癥ApoE異常膽固醇和甘油三酯均升高，乳糜微粒和VLDL殘粒以及IDL明顯增加，可有掌皺黃色瘤，多為ApoE2（2/2）表型。Ⅲ家族性高甘油三酯血癥不清楚以甘油三酯升高為主，可有輕度膽固醇升高，VLDL明顯增加。Ⅳ低脂蛋白血癥1．家族性低β-脂蛋白血癥2．β-脂蛋白缺乏血癥3．家族性低α-脂蛋白血癥第二節(jié)血清膽固醇測定簡介膽固醇是人體內(nèi)重要的脂類成分，具有重要的生理功能。

游離膽固醇30%

血清總膽固醇（TC）

膽固醇酯70%血漿膽固醇↑引起動脈粥樣硬化，形成堵塞性血管疾病。

血清（漿）總膽固醇測定一、比色法二、酶法三、氣相色譜法四、高效液相色譜法五、同位素-稀釋質(zhì)譜法酶測定法特點：

常規(guī)測定中現(xiàn)已廣泛應(yīng)用酶法，酶法具有特異性好，精密度和靈敏度。由于操作簡便，試劑無腐蝕性，特別適用于自動生化分析，目前已成為測定膽固醇的主要方法。原理

膽固醇酯＋H2O膽固醇＋游離脂肪酸膽固醇＋O2膽烷-4-烯-3-酮＋H2O2H2O2＋4氨基安替比林＋酚醌亞胺＋4H2O

試劑與器材1、酶應(yīng)用液2、參考血清3、器材試管、刻度吸管、微量加樣器、分光光度計、恒溫水浴箱實驗操作取3支試管，按下表操作加入物（ml）測定管標準管空白管待測血清0.02——參考血清—0.02—蒸餾水----0.02酶應(yīng)用液2.002.002.00混勻，置于37℃水浴箱，放置15分鐘，以空白管調(diào)零點，在510nm波長處進行比色，分別讀取各管的吸光度。計算

測定管吸光度血清膽固醇（mmol/L）=------------------

×

參考膽固醇濃度（mmol/L）

標準管吸光度參考范圍3.10~5.70mmol/L評價：主要缺點是：優(yōu)點：本法靈敏度高、準確度高、精密度好，線性范圍寬。本法具有氧化酶反應(yīng)途徑的共同缺陷，易受到一些還原性物質(zhì)如尿酸、膽紅素、維生素C和谷胱甘肽等的干擾。影響TC水平的因素①年齡與性別；②長期的高膽固醇、高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使TC增高；③遺傳因素；④其它：如缺少運動、腦力勞動、精神緊張等可能使TC升高。【臨床意義】病理性高TC血癥：見于脂肪肝、肝臟腫瘤、甲狀腺功能亢進嚴重糖尿病、動脈粥樣硬化等。病理性低TC血癥：見于肝臟疾病如急性肝壞死、肝硬化，甲狀腺功能亢進，惡性貧血、溶血性貧血營養(yǎng)不良等第三節(jié)血清三脂酰甘油測定簡介三酰酯甘油（TG）是由一分子甘油和三分子脂肪酸組成。每一分子三酰酯甘油含有2~3種不同的脂肪酸。血清（漿）甘油三酯的測定方法氣相層析高效液相層析紅外分光光度法散射比濁法化學(xué)法酶法基本操作：（一）化學(xué)法分溶抽提-乙酰丙酮顯色法1、抽提：關(guān)鍵是選用合適的抽提劑，既要使甘油三酯提取完全，又要消除磷脂、游離甘油和葡萄糖等干擾物質(zhì)的影響。2、皂化：甘油三酯水解生成甘油，這一步大都采用KOH作皂化劑3、氧化：過碘酸在酸性溶液中將甘油氧化成甲醛和甲酸4、顯色：甲醛的定量主要有兩種方法：①甲醛與變色酸(4，5-二羥-2，7-萘二磺酸)在硫酸溶液中加熱生成紫色化合物②甲醛與乙酰丙酮在銨離子(NH4+)存在下生成黃色的二乙酰二氫二甲基吡啶實踐步驟加入物（ml）

測定管

對照管

空白管

血清

0.02--

標準液-

0.02-蒸餾水--0.02

抽提液2.52.52.50.04mol/LH2SO40.50.50.5加H2SO4時邊加邊搖，使其充分混勻，靜置分層后分別準確吸取上清液于另外3支試管中上清液0.30.30.3造化劑1.01.01.0

混勻，在56℃恒溫水浴箱中保溫5min氧化劑1.01.01.0顯色劑1.01.01.0混勻后，置60℃水浴20min，取出冷卻。用分光光度計在波長415nm處，空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。計算

測定管吸光度血清三酰酯甘油（mmol/L）=-----------------

×

標準液濃度（mmol/L）

標準管吸光度參考范圍0.56~1.70mmol/L注意事項1.每加一次試劑需搖勻。2.皂化、氧化與顯色的溫度和時間對吸光度均有影響，因此，每批標本都需要做標準管。3.以血漿作標本時，應(yīng)注意抗凝劑的影響，通常用EDTA-Na2.4.標本應(yīng)及時分離，無論血清、血漿。(二)酶法磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP法）原理

TG+3H2OLPL

甘油+3脂肪酸

甘油+ATPGK

磷酸甘油+ADP

磷酸甘油+O2

GPO

磷酸二羥丙酮+H2O2

2

H2O2+4-AAP+4-氯酚POD

紅色醌類化合物

+4H2OGOP、4-AAP、4-氯酚三者合稱PAP，故本法稱GPO-PAP法試劑與器材1、三酰酯甘油測定酶試劑2、三酰酯甘油水溶性標準液3、器材試管、刻度吸管、微量加樣器、分光光度計、

37℃恒溫水浴箱。實驗操作取3支試管，按下表操作加入物（ml）測定管標準管空白管血清0.01——標準液—0.01—蒸餾水----0.01酶試劑1.001.00

1.00混勻后，置37℃水浴15min，用分光光度計在波長500nm處，空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。計算

測定管吸光度血清三酰酯甘油（mmol/L）=-----------------

×

標準液濃度（mmol/L）

標準管吸光度參考范圍0.56~1.70mmol/L注意事項1、標本必須新鮮，4℃放置不宜超過3天，時間過長，游離甘油升高。2、需用空腹血清作標本。3、>11.1mmol/L,需做稀釋。臨床意義

TG隨年齡增長而上升趨勢，體重超標往往偏高。正常成人空腹脂肪餐（脂肪1g/kg體重）后，2~4h內(nèi)血清混濁程度及TG值高峰，8h后恢復(fù)正常。脂肪清除率較差者，清除時間延長。病理性升高見于原發(fā)性高脂血癥、動脈粥樣硬化、脂肪肝、其他肝病、糖尿病、腎病綜合癥、胰腺炎、甲功能減退、妊娠等。病理性降低見于原發(fā)性b脂蛋白缺乏癥，肝功能嚴重低下、甲功能亢進、腎上腺皮質(zhì)功能減退等。第四節(jié)血清高密度脂蛋白膽固醇測定概述血清高密度脂蛋白（HDL）是密度最大的脂蛋白，由蛋白質(zhì)、磷脂、膽固醇及其酯、三酯酰甘油組成。HDL中主要脂類是磷脂，以磷脂酰膽堿最多，膽固醇是HDL中含量占第二位的脂類，酯化和游離的膽固醇之比約3：1HDL所含的蛋白質(zhì)主要是ApoAⅠ和ApoAⅡ，其中以ApoAⅠ更重要。注意：雖然磷脂部分比膽固醇含量多，但測定膽固醇比測定磷脂更容易，故常以測定HDL-C含量代表HDL水平。高密度脂蛋白測定

超速離心法凝膠過濾層析法免疫化學(xué)法電泳法沉淀法臨床實驗室常用：沉淀法中的林鎢酸-鎂法林鎢酸-鎂法原理用磷鎢酸與鎂離子作沉淀劑，選擇性沉淀LDL和VLDL（主要含ApoB），上清液中只含HDL，測定上清液中膽固醇含量。試劑與器材1、沉淀劑2、酶試劑3、參考血清4、器材試管、刻度吸管、微量加樣器、分光光度計、

37℃恒溫水浴箱。實驗操作HDL的提取于小離心管中加血清200uI和沉淀劑200uI，混勻，室溫（20℃，不得高于30℃）放置15min，然后3000rpm離心15min。取3支試管，按下表操作加入物（ml）測定管標準管空白管上清液0.050——定值血清—0.025—蒸餾水--0.0250.050酶試劑2.002.002.00混勻，置于37℃水浴箱，放置15min，以空白管調(diào)零點，在500nm波長處進行比色，分別讀取各管的吸光度。計算

測定管吸光度HDL-C（mmol/L）=-----------------×

定值血清膽固醇濃度（mmol/L）

標準管吸光度參考范圍成人男性

1.16~1.42mmol/L成人女性1.29~1.55mmol/L注意事項血清嚴重混濁時IDL和VLDL沉淀不完全，此時用生理鹽水將血清做1：1稀釋后再行沉淀，測定結(jié)果乘以2。血清中高膽紅素、維生素C、溶血都會有影響?！九R床意義】

HDL-C與冠心病發(fā)病呈負相關(guān)HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危險因素HDL-C大于1.55mmol/L被認為是冠心病的“負”危險因素

HDL-C下降多見于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。HDL-C增高往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸煙可使HDL-C下降，適量飲酒、長期體力勞動和運動會使HDL-C升高。第五節(jié)血清低密度脂蛋白膽固醇測定概述低密度脂蛋白（LDL）由極低密度脂蛋白（VLDL）在血漿中轉(zhuǎn)變而來，是空腹血漿中含量最多的脂蛋白，約占脂蛋白總量的1/2以上。LDL中的膽固醇占血漿膽固醇總量的60%~70%,其中膽固醇酯占4/5，故有血漿低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）之稱。測定方法LDL-C測定沒有決定性方法。目前多采用聚乙烯硫酸（PVS）沉淀法聚乙烯硫酸（PVS）沉淀法空腹血清中主要含有HDL、LDL、VLDL。用聚乙烯硫酸鹽-聚乙二醇甲醚選擇性地沉淀LDL，離心后上清液中韓HDL、VLD測定出上清液HDL-C和VLDL-C總和。同時測定血清總膽固醇含量。

LDL-C=TC-（HDL-C+VLDL-C）實驗操作LDL分離于小離心管中加血清200uI和沉淀劑100uI，混勻，室溫（20℃，不得高于30℃）放置15min，然后3000rpm離心15min，取上清液與血清同時測定膽固醇。取3支試管，按下表操作加入物（ml）標準管測定管1測定管2空白管標準液0.03--——上清液--0.03--—血清----0.03--蒸餾水--酶試劑2.00--2.00--2.000.032.00混勻，置于37℃水浴箱，放置5分鐘，以空白管調(diào)零點，在500nm波長處進行比色，分別讀取各管的吸光度。計算

測定管1吸光度上清血清膽固醇濃度=-----------------------×

膽固醇標準液濃度

標準管吸光度

測定管2吸光度總膽固醇濃度=-----------------------×

膽固醇標準液濃度

標準管吸光度上清LDL-C=TC-上清液膽固醇濃度

參考范圍40歲以上成人2.70~3.10mmol/L合適水平<3.36mmol/L危險水平>4.41mmol/L【臨床意義】

LDL-C水平與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān)LDL-C增高是動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險因素由于TC水平同時也受HDL-C水平的影響，所以最好以LDL-C代替TC作為冠心病危險因素指標。臨床上以LDL-C水平作高脂蛋白血癥的治療決策及其需要達到的治療目標。第六節(jié)血清載脂蛋白A1和B測定簡介ApoAⅠ

是HDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白約占HDL蛋白總量的64%ApoB100

是LDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白約占LDL蛋白總量的95%因此，ApoAⅠ和ApoB100可以直接反映HDL和LDL的含量。血清載脂蛋白測定免疫化學(xué)法：單向免疫擴散（RID）電免疫分析（如火箭電泳法）放射免疫分析（RIA）酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）免疫濁度法等早期目前：目前比較適合于臨床實驗室的是免疫濁度法，包括免疫散射比濁法（INA）和免疫透射比濁法（ITA）。免疫