增生平對(duì)二甲基苯致金黃地鼠口腔癌的阻斷作用

增生平對(duì)二甲基苯致金黃地鼠口腔癌的阻斷作用

口腔粘膜酪氨酸酶是國際公認(rèn)的腫瘤前化療。目前,對(duì)口腔白斑尚無特效治療措施,特別是對(duì)多發(fā)和大面積的病損主要是對(duì)病人進(jìn)行追蹤觀察,發(fā)現(xiàn)癌變傾向即進(jìn)行手術(shù)切除。增生平是由山豆根、拳參、敗醬草、白鮮皮、夏枯草和黃藥子等多味中藥組成的抗癌藥,大量基礎(chǔ)研究表明,增生平對(duì)上皮發(fā)生的腫瘤有明顯的抑制作用,臨床研究表明該藥對(duì)食管癌前病變有明顯的阻斷作用。本研究利用二甲基苯丙蒽(dimethyl-benzanthracene,DMBA)誘發(fā)的金黃地鼠口腔癌模型,觀察增生平對(duì)口腔癌的預(yù)防效果,并以口腔癌前病變口腔粘膜白斑患者為觀察對(duì)象觀察增生平對(duì)口腔白斑的治療效果。材料和方法1.觀察指標(biāo)與方法誘發(fā)的金黃色地鼠口腔癌預(yù)防作用的研究:50只雄性金黃地鼠,隨機(jī)分為3組,增生平組和DMBA組各20只。DMBA組僅涂0.5%DMBA丙酮液,每周3次,共涂6周;增生平組DMBA處理后,每天給地鼠灌胃6.0g/kg劑量的增生平,治療10周;陰性對(duì)照組10只,涂丙酮液,每周3次,共涂6周。肉眼觀察頰囊粘膜變化。結(jié)束后處死動(dòng)物,計(jì)數(shù)口腔腫瘤數(shù)目,并量取每個(gè)瘤體的長、寬、高直徑,以其平均值作為瘤的半徑,計(jì)算平均瘤負(fù)荷(平均瘤負(fù)荷=平均瘤數(shù)目×平均瘤體積,瘤體積=4/3(πr3)和抑制率(抑制率=對(duì)照組平均瘤數(shù)目-治療組平均瘤數(shù)目/對(duì)照組平均瘤數(shù)目),并取口腔粘膜進(jìn)行顯微鏡下觀察,觀察指標(biāo):①病理觀察:切片進(jìn)行常規(guī)HE染色,光鏡觀察,病理診斷標(biāo)準(zhǔn)參照WHO1978年公布的12條標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定,將病理改變分為單純?cè)錾?異常增生和癌變。②組織微核檢測(cè):切片采用Feuglen染色,在×100倍油鏡下進(jìn)行口腔上皮細(xì)胞微核觀察。每張切片計(jì)數(shù)500個(gè)上皮細(xì)胞,共計(jì)1000個(gè)細(xì)胞中的含微核的細(xì)胞數(shù),微核發(fā)生率以千分率表示。③銀染核仁組織區(qū)(argentumsNucleolarOrganizerRegions,AgNoR)測(cè)定:將2張石蠟切片,根據(jù)Ploton改良銀染法,進(jìn)行染色,用MPIAS-500型多功能圖象分析儀分析。計(jì)數(shù)細(xì)胞核的平均AgNORs顆粒數(shù)目。④細(xì)胞增殖抗原(ProliferationCellNuclearAntigen,PCNA)測(cè)定:方法用免疫組化ABC法。結(jié)果PCNA陽性細(xì)胞為細(xì)胞核染成棕黃色,PCNA標(biāo)記指數(shù)以每100個(gè)細(xì)胞中的PCNA陽性細(xì)胞數(shù)表示。2.觀察方法及結(jié)果1989~2001年來我院門診就診的口腔粘膜白斑患者為對(duì)象。共112名患者,男性69名,女性43名,年齡最大71歲,最小29歲,平均46歲。發(fā)病最長20年,最短3個(gè)月。治療前首先磨除過銳的牙尖和去除不良修復(fù)體,排除修復(fù)體相關(guān)疾病和可能的局部刺激因素。吸煙的患者要求戒煙3個(gè)月到半年,白色斑塊仍不消退者,再診斷為白斑,作為觀察對(duì)象。病理診斷分為單純?cè)錾?、輕度異常增生和中度異常增生。重度異常增生不作為觀察對(duì)象。根據(jù)患者的年齡、性別、發(fā)病時(shí)間、發(fā)病部位、吸煙情況、臨床和病理分型隨機(jī)分為2組。治療組和對(duì)照組分別為59例和53例。治療組試驗(yàn)對(duì)象服用增生平片,每次4片,每日3次,治療8-12個(gè)月,對(duì)照組定期觀察。治療前后觀察以下指標(biāo):①臨床觀察:試驗(yàn)前后,詳細(xì)記錄患者白斑病損大小及數(shù)目。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)將臨床觀察效果分為顯效、好轉(zhuǎn)、無變化和惡化。顯效:臨床檢查病變消退,停藥觀察3個(gè)月到半年未復(fù)發(fā);好轉(zhuǎn):白色病變縮小1/3以上,顏色變淺;無變化:白色病變范圍及顏色同前;惡化:病變范圍擴(kuò)大出現(xiàn)糜爛或結(jié)節(jié)。2組結(jié)果比較用χ2檢驗(yàn)。②AgNOR和PCNA檢測(cè):試驗(yàn)前取試驗(yàn)對(duì)象口腔病損區(qū)粘膜組織和試驗(yàn)結(jié)束后再次取相應(yīng)部位的病理組織進(jìn)行AgNOR數(shù)目和PCNA增殖指數(shù)檢測(cè),方法和判定標(biāo)準(zhǔn)同動(dòng)物試驗(yàn)。結(jié)果1.可降低口腔癌的發(fā)生率實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),增生平組瘤數(shù)目和瘤負(fù)荷顯著低于陽性對(duì)照組,其抑制率分別為44.6%和67.9%,實(shí)驗(yàn)組癌變率為55.0%,顯著低于陽性對(duì)照組動(dòng)物癌變率95.0%(見表1,2)癌變抑制率(抑制率=對(duì)照組癌變率-治療組癌變率/對(duì)照組癌變率)為42.1%。結(jié)果表明,增生平可降低口腔癌的發(fā)生率,對(duì)口腔癌有預(yù)防作用。表3可見,DMBA組細(xì)胞微核發(fā)生率、AgNOR數(shù)目和PCNA標(biāo)記指數(shù)顯著高于陰性對(duì)照組,說明DMBA可引起組織細(xì)胞DNA損傷,給予增生平組,其細(xì)胞微核發(fā)生率顯著低于DMBA組,說明增生平可保護(hù)DMBA誘發(fā)的細(xì)胞DNA損傷。陽性組顯著高于陰性對(duì)照組,說明其DMBA可引起組織粘膜細(xì)胞增殖,而增生平可抑制其細(xì)胞增殖。2.變的發(fā)展說見表4,增生平可改善口腔白斑的臨床癥狀,延緩口腔癌前病變的發(fā)展。治療8~12個(gè)月療效觀察,見表5。部分患者組織病理AgNOR數(shù)目和PCNA增殖指數(shù)明顯降低,而對(duì)照組在試驗(yàn)前后AgNOR數(shù)目和PCNA增殖指數(shù)均無顯著變化。藥水生植物口腔癌的發(fā)病率和死亡率在近幾年不斷增加,尤其是在年輕男性中。2004年美國預(yù)計(jì)大約有28260個(gè)新發(fā)病例和7230個(gè)死亡病例?？谇话装呤浅Ｒ姷目谇话┣安∽?目前,尚無特效治療方法,特別是對(duì)多發(fā)和大面積的病損。傳統(tǒng)中醫(yī)藥學(xué)中,并無口腔白斑及口腔癌前病變的病名,但根據(jù)臨床表現(xiàn)和該病的發(fā)展趨勢(shì),中醫(yī)多認(rèn)為此病由火毒熏蒸、濕熱郁結(jié)、瘀血阻絡(luò),或肺胃積熱、外感邪毒,內(nèi)外合邪,熏蒸于上,致使口腔發(fā)白。增生平由山豆根、拳參、敗醬草、白鮮皮、夏枯草和黃藥子等多味中藥組成。該方以山豆根清胃火,消腫利咽為君藥。拳參涼血、活血而消腫。夏枯草清郁熱,軟堅(jiān)散結(jié),二藥為臣。敗醬草清熱、化瘀散結(jié)。白鮮皮清熱。黃藥子散結(jié)化痰消腫,為佐使。六藥共奏清熱解毒、化瘀散結(jié)之功。根據(jù)抗癌藥理實(shí)驗(yàn)及歷代醫(yī)書評(píng)議,組成增生平的各味中藥,均具有一定的抗癌作用。本研究動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明,用DMBA誘發(fā)金黃色地鼠口腔癌模型的同時(shí)灌喂給予增生平,實(shí)驗(yàn)組瘤負(fù)荷的抑制率和癌變率明顯低于DMBA模型組,證明增生平可以減少DMBA誘發(fā)的金黃色地鼠口腔癌的發(fā)生,具有一定的抗癌作用。在對(duì)口腔白斑的臨床治療中,證明增生平對(duì)口腔白斑有一定的臨床療效,有效率為67.8%,且未見明顯副作用。說明增生平可以作為口腔白斑保守治療的藥物選擇。關(guān)于增生平的防癌機(jī)制,目前研究報(bào)道較少,體外實(shí)驗(yàn)證明,增生平片具有抗致突和抗促癌作用。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證明:增生平可明顯提高機(jī)體的細(xì)胞和體液免疫功能。本研究對(duì)增生平的防癌機(jī)理進(jìn)行了進(jìn)一步探討。微核、AgNOR及PCNA與組織細(xì)胞損傷和增殖有關(guān),在組織癌變的早期,這些標(biāo)志物均有不同程度的增高。抑制這些標(biāo)志物,則可使細(xì)胞癌變的可能性降低。本研究在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中通過對(duì)微核、AgNOR及PCNA標(biāo)志物的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)給予增生平降低了細(xì)胞微核發(fā)生率和AgNOR數(shù)目和PCNA標(biāo)記指數(shù),說明增生平可保護(hù)DMBA誘發(fā)的細(xì)胞DNA損傷,并可抑制細(xì)胞增殖,是增生平預(yù)防口