臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)十八 尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)(二)

實(shí)驗(yàn)十八尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢測(cè)(二)目的要求：1.熟悉尿液標(biāo)本細(xì)菌學(xué)檢測(cè)的基本程序；2.掌握尿液標(biāo)本細(xì)菌定量檢測(cè)的方法和臨床意義；3.掌握尿液標(biāo)本細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定的方法和臨床意義。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1.普通瓊脂平板菌落記數(shù)（每人作）2.培養(yǎng)物的革蘭涂片染色鏡檢（每人作）3.培養(yǎng)物觸酶實(shí)驗(yàn)、氧化酶、血漿凝固酶試驗(yàn)（小組作）4.培養(yǎng)物接種KIA、MIU（接種大腸埃希菌者作）細(xì)菌定量接種（接種環(huán)法）菌落計(jì)數(shù)菌落特征觀察、革蘭染色鏡檢觸酶試驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)G+CG-b觸酶（+）凝固酶（+）凝固酶（—）金葡菌表葡菌大腸埃希菌綠膿桿菌氧化酶試驗(yàn)陰性（腸桿菌）陽性KIAMIUOF試驗(yàn)具體的方法與步驟：1.普通瓊脂平板菌落記數(shù)（每人作）計(jì)數(shù)自己接種環(huán)定量的細(xì)菌數(shù)量（10ul）每毫升細(xì)菌數(shù)=菌落數(shù)X100（個(gè)/ml)

報(bào)告方式：

a有菌落，報(bào)告每毫升尿液細(xì)菌數(shù)為XX；

b無菌落，在延長(zhǎng)24h，仍無菌落生長(zhǎng)，則報(bào)告“普通需氧培養(yǎng)48h無細(xì)菌生長(zhǎng)”。2.菌落特征、革蘭染色觀察（每人作）：細(xì)菌名稱菌落特征革蘭染色特征金黃色葡萄球菌菌落中等偏大、圓、凸、光滑黃色色素G+C,葡萄狀或散在排列表皮葡萄球菌菌落中等偏小、圓、凸、光滑、灰白色或檸檬色G+C,葡萄狀或散在排列大腸埃希菌菌落中等偏小、圓、凸、光滑、灰白色G-b，散在排列銅綠假單胞菌（綠膿桿菌）菌落大小不一、邊緣不齊、扁平、常融合菌落，藍(lán)綠色G-b，長(zhǎng)短不一，桿狀或球桿狀，散在排列3.培養(yǎng)物觸酶實(shí)驗(yàn)、氧化酶、血漿凝固酶試驗(yàn)（小組作）細(xì)菌名稱觸酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)金黃色葡萄球菌

+

+/表皮葡萄球菌

+

_/大腸埃希菌//

_銅綠假單胞菌（綠膿桿菌）//

+觸酶試驗(yàn)（過氧化氫酶試驗(yàn)，玻片法）

原理：具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫（新鮮配制）生成水和新生態(tài)氧，繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。1.細(xì)菌1環(huán)2.滴加1滴或2-3環(huán)過氧化氫金葡表葡血漿凝固酶試驗(yàn)（玻片法）：原理：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的結(jié)合凝固酶（即凝聚因子）是一種結(jié)合于菌體細(xì)胞壁的酶，它相當(dāng)于纖維蛋白原受體，直接結(jié)合血漿中纖維蛋白原，而使連接纖維蛋白原的葡萄球菌凝集成塊。2：表葡金葡金葡1環(huán)1環(huán)1環(huán)1：兔血漿3-5環(huán)兔血漿3-5環(huán)生理鹽水氧化酶試驗(yàn)（濾紙法）原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生氧化酶（或稱細(xì)胞色素氧化酶），是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶。作氧化酶試驗(yàn)時(shí)，此酶首先使細(xì)胞色素C氧化，然后氧化型細(xì)胞色素C再使鹽酸二甲基對(duì)苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。方法：取白色潔凈濾紙沾取菌落。加1%鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液一滴，陽性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深。如用鹽酸四甲基對(duì)苯二胺為藍(lán)色4.培養(yǎng)物接種KIA、MIU（疑似大腸埃希菌者作）KIA試驗(yàn)（克氏雙糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試驗(yàn)）：下層接種針穿刺接種，上層劃線接種MIU試驗(yàn)（動(dòng)力/靛基質(zhì)/尿素