臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)九 結(jié)核桿菌的檢驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)九結(jié)核桿菌的檢驗(yàn)p95

目的要求：1.掌握結(jié)核分枝桿菌的形態(tài)與染色性特征；2.掌握結(jié)核分枝桿菌的菌落特征；3.掌握肺結(jié)核患者痰標(biāo)本抗酸染色檢查的方法及臨床意義實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1.錄像：結(jié)核病的防治

2.肺結(jié)核患者痰標(biāo)本抗酸染色鏡檢（每人作）

3.結(jié)核分枝桿菌菌落形態(tài)觀察（示教）1抗酸染色鏡檢分枝桿菌（每人作）標(biāo)本：0.01ml痰直接涂片10x10mm；或者0.1ml痰20x15mm厚膜涂片制片：涂片——自然干燥——火焰固定傳統(tǒng)的抗酸染色：

A初染：石碳酸復(fù)紅，加溫染色3-5min，以冒氣為度，防干燥，持續(xù)5-8分鐘，稍冷水洗。（缺點(diǎn)：污染環(huán)境）

B褪色：3%鹽酸酒精脫色（<10min)1-3min,水洗無(wú)紅色退下，甩干。

C復(fù)染：呂氏美蘭0.5-1min，水洗，干后鏡檢環(huán)?？顾崛旧ǎ?/p>

1.標(biāo)本充分搖勻，取3-5環(huán)不涂開(kāi)；

2.涂片標(biāo)本自然干燥，火焰固定；

3.滴加試劑一（復(fù)紅液）約2-3滴，隨即滴加試劑二（增色液）約2-3滴，室溫混合1分鐘（勿超時(shí)），水洗30秒，甩干。

4.滴加美蘭復(fù)染液3滴染色2分鐘，水洗1分鐘，自然干燥。滴加香柏油，油鏡觀察。結(jié)果觀察：背景藍(lán)色。結(jié)核分枝桿菌抗酸染色陽(yáng)性，紅色，細(xì)長(zhǎng)略彎，偶見(jiàn)條索狀，可成團(tuán)、成堆狀排列。結(jié)核分枝桿菌抗酸染色：細(xì)菌染成紅色，背景為藍(lán)色痰鏡檢（10X100）結(jié)果按下列標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告：

-:仔細(xì)觀察至少300個(gè)視野未發(fā)現(xiàn)抗酸菌

±:300個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-2條抗酸菌（全部涂膜鏡檢三遍）

+：100個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌（全部涂膜鏡檢三遍）

++：10個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌

+++：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條抗酸菌

++++：每個(gè)視野內(nèi)發(fā)現(xiàn)1-9條以上抗酸菌2結(jié)核分枝桿菌菌落形態(tài)觀察（示教）培養(yǎng)基：羅氏固體培養(yǎng)基（Lowenstein-Jensen，L-J），內(nèi)含蛋黃、甘油、馬鈴薯、無(wú)機(jī)鹽和孔雀綠等。菌落特征：2～4周可見(jiàn)菌落生長(zhǎng)。菌落干燥、粗糙呈顆粒、結(jié)節(jié)或花菜狀，乳白色或米黃色，不透明。

結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告——

斜面上生長(zhǎng)的菌落在20個(gè)以下，應(yīng)報(bào)告菌落數(shù)；若多余20個(gè)菌落數(shù)以“+”標(biāo)示，具體報(bào)告見(jiàn)下：

+：斜面上生長(zhǎng)20個(gè)菌落以上，占斜面的1/4以下

++：斜面上菌落生長(zhǎng)面積占斜面的1/4—1/2

+++:斜面上菌落生長(zhǎng)面積占斜面的1/2—3/4