PCR質(zhì)量手冊簡要概述

PCR質(zhì)量手冊簡要概述文獻(xiàn)編號 前言某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢查實驗室建于12月。實驗室的設(shè)立、設(shè)備及人員配備均嚴(yán)格按照部、省臨床基因診療實驗室規(guī)范化原則結(jié)合本身條件而建立。各項管理制度、質(zhì)量確保體系以及基本操作規(guī)定和原則操作程序均已制訂。某某省某某醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增檢查實驗室將面對全省衛(wèi)生系統(tǒng),開展臨床基因診療實驗和有關(guān)知識的培訓(xùn)工作,使被培訓(xùn)人員掌握臨床基因診療基礎(chǔ)理論知識、實驗室管理和質(zhì)量確保方法、規(guī)范化操作辦法以及理解基因診療領(lǐng)域的進(jìn)展。同時還將開展基因(重要是遺傳基因方面)的臨床檢測及科學(xué)研究工作,為我省臨床基因診療事業(yè)的發(fā)展做出一份奉獻(xiàn)。質(zhì)量方針臨床基因擴(kuò)增檢查實驗室是嚴(yán)格按照部、省臨床基因擴(kuò)增實驗室規(guī)范化原則進(jìn)行管理與操作,始終遵照:以病人為中心以質(zhì)量為核心以科學(xué)為根據(jù)編制: 日期: 審批: 日期: 文獻(xiàn)編號 版本 第二版崗位職責(zé)1．實驗室負(fù)責(zé)人崗位職責(zé)擬定質(zhì)量方針,編制質(zhì)量手冊,并組織人員學(xué)習(xí),統(tǒng)一思想。負(fù)責(zé)實驗室全方面質(zhì)量,涉及試劑盒的質(zhì)量檢查;操作的質(zhì)量檢查;質(zhì)量控制(室內(nèi)室間質(zhì)評)的成果檢查;實驗成果的核對、質(zhì)檢和簽發(fā)報告;擬定人員培訓(xùn)計劃;安排日常工作,確保及時發(fā)出質(zhì)量合格的報告。定時審核和評審質(zhì)量手冊的運(yùn)行狀況。對實驗室對內(nèi)外發(fā)出的報告負(fù)責(zé),并以簽名簽字形式表達(dá)。2．技術(shù)人員崗位職責(zé)準(zhǔn)時消毒、清潔實驗室,并統(tǒng)計簽字。檢查儀器設(shè)備的維護(hù)狀況,統(tǒng)計使用狀況并簽字。按質(zhì)量手冊規(guī)定的原則操作程序(SOP)操作實驗,并填寫報告簽字。按規(guī)定進(jìn)行實驗的自主質(zhì)控工作(每次實驗必須有室內(nèi)質(zhì)控方法),并做好統(tǒng)計簽字。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻(xiàn)編號 版本 第二版人員培訓(xùn)及成果人員構(gòu)成及技術(shù)檔案本室有工作人員2人,其中1名中級,1名初級。2．培訓(xùn)統(tǒng)計及專業(yè)文章發(fā)表狀況編制: 日期: 審批: 日期: 文獻(xiàn)編號 版本 第二版實驗室設(shè)施環(huán)境及規(guī)章制度1、實驗室分區(qū)管理平面圖:見圖示1。2、實驗室基本設(shè)施:分隔和面積:實驗室嚴(yán)格按照原則,分隔為三個獨(dú)立的工作室:試劑準(zhǔn)備室、樣品解決室、基因擴(kuò)增室。工作流程:從試劑準(zhǔn)備→樣品解決→基因擴(kuò)增,工作人員只能單向流動。進(jìn)入下一區(qū)域,必須更換工作服、手套。通風(fēng):各室空氣流通性良好。照明:室內(nèi)有良好的照明度。環(huán)境:干凈、無菌;各室均配有紫外消毒設(shè)備。各室的儀器、實驗和文具用品以及清潔物品均屬于各室專用。3、實驗室消毒隔離及污物解決:見實驗室廢棄物解決的原則操作程序。4、實驗室規(guī)章制度:4.1總則4.1.1進(jìn)入基因診療實驗室的任何工作人員都必須恪守實驗室規(guī)則;非工作人員未經(jīng)允許不得入內(nèi),特別不得為找人而逆向誤入PCR實驗室,以免造成不應(yīng)有的污染。臨床基因診療實驗室分試劑準(zhǔn)備、樣品解決、基因擴(kuò)增室三個室,各室擁有專用的儀器設(shè)備及實驗物品(含加樣器、試管架、吸頭、統(tǒng)計紙、筆、甚至清潔用品等),不得混用,須貼上不同顏色標(biāo)簽予以區(qū)別;試劑準(zhǔn)備室為白色標(biāo)記、樣品制備室為藍(lán)色標(biāo)記、擴(kuò)增室為綠色標(biāo)記。臨床基因診療實驗室工作人員應(yīng)含有醫(yī)學(xué)檢查、微生物學(xué)檢查基本知識、大中專以上學(xué)歷、并受過PCR實驗的基本知識和技能培訓(xùn)。4.2.1進(jìn)入實驗室的工作人員必須恪守實驗室的唯一流向的規(guī)定,嚴(yán)禁反向流動。4.2.2進(jìn)入實驗室,必須更換本室有顏色標(biāo)記的工作服(含帽和鞋)。勤換洗工作服。4.2.3接受樣品時應(yīng)檢查樣品與否符合規(guī)定、貼上標(biāo)簽并做好登記。4.2.4實驗室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR實驗原則操作程序進(jìn)行,涉及實驗室擦洗、臺面消毒,離心管、吸頭的無菌滅活準(zhǔn)備,儀器使用和廢棄物解決等。4.2.5進(jìn)入PCR實驗室后區(qū)的物品不許帶進(jìn)PCR實驗室前區(qū)。4.2.6任何實驗操作涉及儀器使用等狀況均須做好統(tǒng)計。4.2.7檢測成果報告應(yīng)完整(涉及:檢查項目、靶核酸類型及成果等),并經(jīng)專業(yè)負(fù)責(zé)人審核簽字后方可發(fā)出。4.2.8每天實驗開始前,結(jié)束后均應(yīng)按規(guī)定清潔、消毒地面和實驗臺面。4.2.9保持臨床基因診療實驗室內(nèi)空氣唯一流向和空氣流通。4.2.10定時校準(zhǔn)和維修PCR儀、離心機(jī)、水浴箱、冰箱等儀器、設(shè)備。4.2.11實驗室內(nèi)不得從事與實驗無關(guān)事宜如聊天、飲食、吸煙等;室內(nèi)禁用電電扇。4.2.12每天下班前解決好廢棄物品,關(guān)好水、電和門窗。4.3試劑準(zhǔn)備室4.3.1實驗人員進(jìn)入該室須穿本室專用白色工作服。實驗中須戴手套。4.3.2每天實驗開始前,清潔實驗臺并應(yīng)打開紫外線燈消毒30分鐘。4.3.3取出當(dāng)天實驗需配制和使用的試劑,其它試劑要立刻收好,放回冰箱內(nèi)。4.3.4實驗中使用的離心管、吸頭等應(yīng)通過滅活無菌解決,(應(yīng)在消毒的使用期內(nèi))。4.3.5其它室的用品不得帶入本室。4.3.6每次實驗都有統(tǒng)計;且使用本室專用的、帶有本室標(biāo)記的統(tǒng)計本、紙筆。4.3.7實驗完畢后要整頓、清潔工作臺面。4.4樣品準(zhǔn)備室4.4.1實驗人員進(jìn)入該室須穿本室專用蘭色工作服。實驗中須戴手套,手套需常更換。4.4.2每天實驗開始前,清潔實驗室和實驗臺,并應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.4.3樣品的接受,登記,保存和提取按原則操作程序及試劑盒規(guī)定進(jìn)行。4.4.4使用本室專用的,經(jīng)滅菌解決的加樣器和帶濾心的吸頭。4.4.5做好實驗統(tǒng)計,并使用本室專用的統(tǒng)計本和筆。4.4.6PCR擴(kuò)增后區(qū)的物品不得帶入本室。4.4.7實驗完畢清潔實驗室和實驗臺,并打開紫外燈消毒。4.5基因擴(kuò)增室4.5.1實驗人員進(jìn)入該室須穿本室專用綠色工作服．實驗中須戴手套,手套需常更換。4.5.2每天實驗開始前,清潔實驗室和實驗臺,并應(yīng)打開紫外燈消毒30分鐘。4.5.3使用本室專用的,經(jīng)滅菌解決的加樣器和帶濾心的吸頭。4.5.4需在此進(jìn)行操作的,如巢式擴(kuò)增,第一次擴(kuò)增的模板必須在本室內(nèi)從反映管中取出,并加入另一只反映管中,此操作不可返回擴(kuò)增前區(qū)進(jìn)行。4.5.5非全封閉操作(即須啟動反映管),應(yīng)打開排電扇24小時排氣,保持室內(nèi)負(fù)壓狀態(tài)。4.5.6做好實驗統(tǒng)計,且使用本室專用的統(tǒng)計本和筆。4.5.7PCR擴(kuò)增室的物品不得帶入擴(kuò)增前區(qū)。4.5.8實驗完畢清潔實驗室和實驗臺,并打開紫外燈消毒。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻(xiàn)編號 版本 第二版儀器設(shè)備和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)儀器設(shè)備的配備1.1試劑準(zhǔn)備室內(nèi)配備的設(shè)備:紫外燈、普通高速臺式離心機(jī)、旋渦振蕩器、一套持續(xù)可調(diào)式移液槍和無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、多個規(guī)格的無菌備用的離心管、PCR反映管和玻璃器皿、實驗臺及本室專用的文具、紙張;本室專用的白色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.2樣品制備室內(nèi)配備的設(shè)備:紫外燈、臺式高速冷凍離心機(jī)、旋渦振蕩器、恒溫水浴鍋、二套持續(xù)可調(diào)式移液槍、無菌過濾咀型移液器槍頭、冰箱、多個規(guī)格的無菌備用的離心管和玻璃器皿、實驗臺及本室專用的樣品登記本、文具、紙張;本室專用的藍(lán)色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。1.3基因擴(kuò)增室內(nèi)配備的設(shè)備:紫外燈、PCR擴(kuò)增儀、實驗臺及本室專用的文具、紙張;本室專用的綠色隔離服、一次性手套、污物桶及清潔用品。儀器設(shè)備的使用、維護(hù)及校準(zhǔn)見儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)原則操作程序。儀器設(shè)備的統(tǒng)計和標(biāo)記全部有關(guān)基因診療實驗室儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)的操作均統(tǒng)計備案。校準(zhǔn)后的儀器貼上標(biāo)記,闡明校準(zhǔn)日期和狀態(tài)。原則物質(zhì)陽性、陰性對照:來源于對應(yīng)的檢測試劑盒。室內(nèi)質(zhì)控物、室間質(zhì)評物:來源于衛(wèi)生部和省臨檢中心。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻(xiàn)編號 版本 第二版校準(zhǔn)移液器、擴(kuò)增儀、離心機(jī)等對檢測成果有效性、精確性有影響的檢查設(shè)備,投入使用前必須進(jìn)行校準(zhǔn),并每年校準(zhǔn)1次。參加衛(wèi)生部組織的室間質(zhì)評。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻(xiàn)編號 版本 第二版檢驗方法檢查項目及辦法項目:乙型肝炎病毒DNA定量檢測、丙型肝炎病毒RNA定量檢測辦法:TaqMan熒光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量檢測TaqMan熒光定量PCR法丙型肝炎病毒RNA定量檢測操作手冊儀器使用、維護(hù)及校準(zhǔn)原則操作程序樣品采集、保存及運(yùn)輸原則操作程序?qū)嶒炦^程原則操作程序(涉及:試劑準(zhǔn)備、樣品制備、基因擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測SOP)各檢測項目的準(zhǔn)操作程序?qū)嶒炇蚁炯拔畚锝鉀Q原則操作程序質(zhì)量確保方法室內(nèi)質(zhì)控3．1核酸提取質(zhì)控在核酸提取中,帶一份弱陽性質(zhì)控樣本和一份陰性質(zhì)控樣本(基質(zhì)與待測樣本相似),分別鑒定核酸提取的有效性和核酸提取過程中與否發(fā)生污染。3．2核酸擴(kuò)增質(zhì)控靶核酸為DNA:帶一份弱陽性靶DNA質(zhì)控和一份陰性質(zhì)控,以鑒定DNA擴(kuò)增的有效性;靶核酸為RNA:一份弱陽性cDNA質(zhì)控、一份弱陽性RNA質(zhì)控和一份陰性對照以鑒定轉(zhuǎn)錄和DNA擴(kuò)增的有效性3．3產(chǎn)物檢測質(zhì)控一份靶DNA或已稀釋的擴(kuò)增靶DNA陽性質(zhì)控、一份陰性質(zhì)控以及一份試劑空白質(zhì)控與待測的擴(kuò)增樣本同時檢測,以鑒定產(chǎn)物檢測中核酸雜交及顯色測定的有效性。室間質(zhì)控參加由衛(wèi)生部臨床檢查中心組織的全國臨床基因擴(kuò)增項目的室間質(zhì)量評價。編制: 日期: 審批: 日期: 文獻(xiàn)編號 版本 第二版樣品處置1．樣本的標(biāo)記:標(biāo)記由三部分構(gòu)成--標(biāo)本采集日期、該檢測批次的標(biāo)本序號和標(biāo)本類型,三部分間無間隔符號,例如:02080101B分別表達(dá)年、月、日、序號和血液標(biāo)本,序號(01-99),整個標(biāo)記為8-11位;2．樣本的采集、保存和運(yùn)輸:見樣品采集、保存及運(yùn)輸原則操作程序。3．樣本的接受、統(tǒng)計:樣品接受后,立刻貼上本室設(shè)計的樣品標(biāo)記,并在接受標(biāo)本統(tǒng)計表上按規(guī)定進(jìn)行登記。無簽、遲送的樣品、樣品量局限性、溶血的樣品及其它未按規(guī)定采集的樣品,回絕接受并統(tǒng)計于拒收標(biāo)本記錄表。4．樣本的解決:見樣品制備原則操作程序編制: 日期: 審批: 日期: 文獻(xiàn)編號 版本 第二版報告涉及下列信息:實驗室名稱檢測項目(如丙型肝炎病毒RNA定量檢測)樣本接受和檢查日期病人的信息(姓名、性別、年紀(jì)、門診或住院病區(qū)及床號)檢查辦法(如TaqMan熒光定量PCR檢測法)成果定性××檢測項目檢測陰性或陽性定量××檢測項目檢測