化學品毒性鑒定技術規(guī)范

化學品毒性鑒定技術規(guī)范6月

目錄一、總則………………3二、實驗辦法（一）第一階段實驗…………………151、急性吸入毒性實驗……………162、急性經皮毒性實驗……………203、急性經口毒性實驗……………234、急性眼刺激性/腐蝕性實驗……………………265、皮膚刺激性/腐蝕性實驗………326、皮膚變態(tài)反映實驗（皮膚致敏實驗）………36（二）第二階段實驗………………541、鼠傷寒沙門氏菌回復突變實驗（Ames實驗）………………552、體外哺乳動物細胞染色體畸變實驗…………623、體內哺乳動物骨髓細胞染色體畸變實驗……684、體內哺乳動物骨髓嗜多染紅細胞微核實驗…………………755、哺乳動物精原細胞/初級精母細胞染色體畸變實驗，或…79精子畸形實驗…………………876、嚙齒類動物顯性致死實驗……………………907、免疫毒性評價實驗辦法………958、亞急性吸入（14/28天）毒性實驗…………1049、亞急性經皮（21/28天）毒性實驗…………11010、亞急性經口（28天）毒性實驗……………115（三）第三階段實驗………………1211、亞慢性吸入毒性實驗…………1222、亞慢性經皮毒性實驗…………1263、亞慢性經口毒性實驗…………1304、致畸實驗………………………1365、兩代繁殖毒性實驗……………1426、遲發(fā)性神經毒性實驗…………147（四）第四階段實驗………………1531、慢性吸入毒性實驗……………1542、慢性經皮毒性實驗……………1603、慢性經口毒性實驗……………1664、致癌實驗，或…………………172慢性毒性/致癌性合并實驗………………1805、毒物代謝動力學實驗………1896、接觸人群調查與觀察（參考國內外有關專著或教科書）（五）參考實驗……………………1961、皮膚變態(tài)反映實驗-局部淋巴結法…………1972、大腸桿菌回復突變實驗………2023、酵母菌基因突變實驗………2104、體外哺乳動物細胞正向基因突變實驗……2145、果蠅伴性隱性致死實驗………2206、枯草桿菌基因重組實驗………2247、體外哺乳動物細胞程序外DNA合成（UDS）實驗……………2328、體內哺乳動物外周血細胞微核實驗…………2389、體外哺乳動物姊妹染色單體交換（SCE）實驗………………24410、體內哺乳動物骨髓細胞姊妹染色體交換（SCE）實驗……25011、繁殖/生長發(fā)育毒性篩選實驗………………25612、亞急性毒性合并繁殖/發(fā)育毒性篩選實驗…………………26213、一代繁殖實驗………………26914、神經毒性篩選組合實驗……………………274總則GeneralPrinciples

1根據(jù)根據(jù)《中華人民共和國職業(yè)病防治法》、《作業(yè)場合使用有毒物品勞動保護條例》、《危險化學品安全管理條例》、《職業(yè)衛(wèi)生技術服務機構管理方法》、《化學品毒性鑒定管理規(guī)范》制訂本規(guī)范。2范疇本規(guī)范規(guī)定了化學品毒性鑒定的毒理學檢測程序、項目和辦法，合用于化學品毒性鑒定和評價。3規(guī)范性引用文獻GB14924-實驗動物與飼料原則GB14925-實驗動物環(huán)境及設施OECDGuidelineforTestingofChemicals(1981~)USACodeofFederalRegulations,Title40,Volume28USEPAOPPTSHealthEffectsTestGuidelines(1996~)4術語解釋化學品（Chemicals）：本規(guī)范所稱化學品，系指工業(yè)用和民用的化學原料、中間體、產品等單分子化合物、聚合物以及不同化學物構成的混合劑與產品。不涉及法律、法規(guī)已有規(guī)定的食品、食品添加劑、化妝品、藥品等。急性吸入毒性（AcuteInhalationToxicity）：實驗動物短時間（24h內）持續(xù)吸入一種可吸入性受試樣品后，在短期內出現(xiàn)的健康損害效應。半數(shù)致死濃度MedianLethalConcentration，LC50）：指在內經呼吸道吸入受試樣品引發(fā)受試動物發(fā)生死亡概率為50%的濃度。以單位體積空氣中受試樣品的質量(mg/m3)來表達。急性經皮毒性（AcuteDermalToxicity）：實驗動物短時間（24h內）經皮膚接觸受試樣品后，在短期內出現(xiàn)的健康損害效應。急性經口毒性（AcuteOralToxicity）：一次或在24h內多次經口予以實驗動物受試樣品后，動物在短期內出現(xiàn)的健康損害效應。半數(shù)致死劑量（MedianLethalDose，LD50）：在一定時間內經口或經皮予以受試樣品后，使受試動物發(fā)生死亡概率為50%的劑量。以單位體重接受受試樣品的質量(mg/kgbw或g/kgbw)來表達。皮膚刺激性（DermalIrritation）：皮膚涂敷受試樣品后局部產生的可逆性炎性變化。皮膚腐蝕性（DermalCorrosion）：皮膚涂敷受試樣品后局部引發(fā)的不可逆組織損傷。眼刺激性（EyeIrritation）：眼球表面接觸受試樣品后產生的可逆性炎性變化。眼腐蝕性（EyeCorrosion）：眼球表面接觸受試樣品后引發(fā)的不可逆性組織損傷。皮膚致敏（過敏性接觸性皮炎）(SkinSensitization，AllergicContactDermatitis)：皮膚對一種物質產生的免疫源性皮膚反映。對于人類這種反映可能以瘙癢、紅斑、丘疹、水皰、融合水皰為特性。動物的反映不同，可能只見到皮膚紅斑和水腫。亞急性經口毒性（SubacuteOralToxicity）：實驗動物在14～28天內，每日經口接觸受試樣品后所引發(fā)的健康損害效應。亞急性經皮毒性（SubacuteDermalToxicity）：實驗動物在14～28天內，每日經皮接觸受試樣品后所引發(fā)的健康損害效應。亞急性吸入毒性（SubacuteInhalationToxicity）：實驗動物在14～28天內，每日經呼吸道接觸受試樣品后所引發(fā)的健康損害效應。致突變性（Mutagenicity）：受試樣品引發(fā)原核或真核細胞、或實驗動物遺傳物質發(fā)生構造和/或數(shù)量變化的效應。免疫毒性（Immunotoxicity）：受試樣品引發(fā)機體免疫功效克制或異常增強的效應。神經毒性（Neurotoxicity）：受試樣品對神經系統(tǒng)功效或構造的損害效應。亞慢性經口毒性（SubchronicOralToxicity）：實驗動物在其部分生存期（不超出10%壽命期）內，每日經口接觸受試樣品后所引發(fā)的健康損害效應。亞慢性經皮毒性（SubchronicDermalToxicity）：實驗動物在其部分生存期（不超出10%壽命期）內，每日經皮接觸受試樣品后所引發(fā)的健康損害效應。亞慢性吸入毒性（SubchronicInhalationToxicity）：實驗動物在其部分生存期（不超出10%壽命期）內，每日經呼吸道接觸受試樣品后所引發(fā)的健康損害效應。蓄積毒性（CumulativeToxicity）：受試樣品在體內蓄積引發(fā)的有害效應，蓄積有兩種形式：（1）物質蓄積，即長久重復接觸受試樣品時，由于吸取速度超出消除速度造成的該物質在體內逐步增多；（2）功效蓄積，即受試樣品即使在體內的代謝和排出速度較快，但其造成的損傷恢復慢，在前一次的損傷未恢復前又發(fā)生新的損傷，如此殘留損傷的累積稱為功效蓄積。致畸性（Teratogenicity）：受試樣品在胚胎發(fā)育期引發(fā)胎仔永久性構造和功效異常的效應。生殖毒性（ReproductionToxicity）：受試樣品對親代繁殖功效或能力的影響和/或對子代生長發(fā)育的損害效應。生長發(fā)育毒性（DevelopmentalToxicity）：妊娠動物接觸受試樣品而引發(fā)的子代在出生以前、圍產期和出生后來所顯現(xiàn)出的機體缺點或功效障礙。無可見有害作用水平（NoObservedAdverseEffectLevel，NOAEL）：在規(guī)定的實驗條件下，用現(xiàn)有的技術手段或檢測指標未觀察到任何與受試樣品有關的毒性作用的最大染毒劑量或濃度。最低可見有害作用水平（LowestObservedAdverseEffectLevel，LOAEL）：在規(guī)定的實驗條件下，受試樣品引發(fā)實驗動物形態(tài)、功效、生長發(fā)育等發(fā)生有害變化的最低染毒劑量或濃度。慢性毒性（ChronicToxicity）：實驗動物在其正常生命期的大部分時間內接觸受試樣品所引發(fā)的健康損害效應。致癌作用（Carcinogenesis）：受試樣品引發(fā)腫瘤發(fā)生率和/或類型增加、潛伏期縮短的效應。基線劑量（BenchmarkDose,BMD）：由于NOAEL和LOAEL都是實驗中的具體劑量值，易受每組樣本含量大小和組間距寬窄等因素影響，故設定基線劑量，可選擇ED1（概率為1%的受試個體出現(xiàn)效應的劑量），或選擇ED5（概率為5%的受試個體出現(xiàn)效應的劑量）或ED10（概率為10%的受試個體出現(xiàn)效應的劑量）的95%可信限下限。毒物代謝動力學（Toxicokinetics）：定量研究毒物在體內吸取、分布、生物轉化、排泄等過程隨時間變化的動態(tài)規(guī)律的學科。安全系數(shù)（SafetyFactor，SF）：在以動物實驗數(shù)據(jù)外推到人，或以小范疇人群調查成果判斷所評價的化學品對大范疇人群的有害作用時，為排除所涉及的不擬定因素而設定的系數(shù)，用于制訂化學品控制原則，以確保接觸人群的安全。危險性參考劑量（RiskReferenceDose，RfD）：危險度達成可接受程度的劑量。危險性參考濃度（RiskReferenceConcentration，RfC）：危險度達成可接受程度的濃度。日允許攝入量（AcceptableDailyIntake，ADI）：終身每日攝入化學物而不引發(fā)可檢出的健康損害效應的劑量，普通以mg/kgbw.d表達。（致癌物的）實際安全劑量（VisualSafeDose，VSD）：化學品引發(fā)致癌率有99%的把握低于10-6的劑量水平。職業(yè)接觸限值（OccupationalExposureLimit，OEL）：是職業(yè)性有害因素的接觸限制量值，指勞動者在職業(yè)活動過程中長久重復接觸對機體不引發(fā)急性或慢性有害健康影響的允許接觸水平。最高允許濃度（MaximalAllowableConcentration，MAC）：指工作地點、在一種工作日內、任何時間均不應超出的有毒化學物的濃度。5化學品毒性鑒定程序和辦法化學品毒性鑒定分為4個階段（1）第一階段（急性毒性實驗、眼刺激實驗和皮膚刺激實驗）重要是急性毒性參數(shù)的測定和理解受試樣品對皮膚、粘膜的刺激性以及致敏性，為毒性分級和標簽管理提供根據(jù)。同時，可理解受試樣品對機體造成急性損害的可能性和嚴重程度，并為第二階段各項實驗的劑量設計提供根據(jù)。在測定LD50時，普通規(guī)定用兩種動物，染毒途徑應涉及全部人體可能的接觸途徑。急性吸入毒性實驗急性經皮毒性實驗急性經口毒性實驗急性眼刺激性/腐蝕性實驗皮膚刺激性/腐蝕性實驗皮膚變態(tài)反映實驗（皮膚致敏實驗）（2）第二階段（亞急性毒性實驗和致突變實驗）重要是理解受試樣品的亞急性毒性和遺傳毒性，為第三階段各項實驗劑量設計和觀察指標的選擇提供根據(jù)，并對受試樣品的致癌性進行預測。鼠傷寒沙門氏菌回復突變實驗（Ames實驗）體外哺乳動物細胞染色體畸變實驗體內哺乳動物骨髓細胞染色體畸變實驗體內哺乳動物骨髓嗜多染紅細胞微核實驗哺乳動物精原細胞/初級精母細胞染色體畸變實驗，或精子畸形實驗嚙齒類動物顯性致死實驗免疫毒性評價實驗辦法亞急性吸入（14/28天）毒性實驗亞急性經皮（21/28天）毒性實驗亞急性經口（28天）毒性實驗（3）第三階段（亞慢性毒性實驗、致畸實驗、繁殖實驗）通過亞慢性實驗進一步擬定多次重復染毒的毒作用性質和靶器官，初步擬定NOAEL或LOAEL，為第四階段各項實驗的劑量設計和觀察指標的選擇提供根據(jù)；通過致畸實驗判斷受試樣品的胚胎毒性及其與否有致畸性。通過繁殖實驗，可判斷受試樣品對生殖過程的損害作用。通過遲發(fā)性神經毒性實驗，可判斷受試樣品與否含有遲發(fā)性神經毒作用。亞慢性吸入毒性實驗亞慢性經皮毒性實驗亞慢性經口毒性實驗致畸實驗兩代繁殖毒性實驗遲發(fā)性神經毒性實驗（4）第四階段（慢性毒性實驗和致癌實驗）通過慢性毒性實驗可擬定受試樣品的NOAEL和LOAEL，為推算受試樣品的安全接觸限值提供根據(jù)。通過致癌實驗能夠擬定受試樣品對受試實驗動物的致癌性。通過代謝動力學實驗能夠理解受試樣品的吸取、分布、代謝和排泄特點，理解蓄積毒性作用及其可能的靶器官和毒作用機理。慢性吸入毒性實驗慢性經皮毒性實驗慢性經口毒性實驗致癌實驗或慢性毒性實驗合并致癌實驗毒物代謝動力學實驗參考辦法皮膚變態(tài)反映實驗-局部淋巴結法大腸桿菌回復突變實驗酵母菌基因突變實驗體外哺乳動物細胞正向基因突變實驗果蠅伴性隱性致死實驗枯草桿菌基因重組實驗體外哺乳動物細胞程序外DNA合成（UDS）實驗體內哺乳動物外周血細胞微核實驗體外哺乳動物姊妹染色單體交換（SCE）實驗體內哺乳動物骨髓細胞姊妹染色體交換（SCE）實驗繁殖/生長發(fā)育毒性篩選實驗亞急性毒性合并繁殖/發(fā)育毒性篩選實驗一代繁殖實驗神經毒性篩選組合實驗6化學品毒性鑒定項目的選擇原則6.1實驗項目的選擇應當根據(jù)化學品的理化特性，特別是通過對其化學構造與活性關系進行初步分析，并盡量理解其使用范疇、生產或使用過程、人體接觸狀況和現(xiàn)有文獻資料，根據(jù)具體狀況選擇系統(tǒng)的或補充的毒性實驗。在化學品毒性鑒定過程中，根據(jù)各階段的實驗成果，有針對性地取舍進一步實驗的項目和觀察指標，以完善對該化學品所做出的毒性鑒定資料的科學性和可靠性。6.2受試樣品的染毒途徑應與人體可能接觸的途徑一致，對人體有可能通過呼吸道、皮膚和消化道三種途徑接觸的化學品，應進行吸入、經皮和經口三種染毒途徑的各項實驗；常溫下呈氣態(tài)的化學品普通不進行經口染毒途徑的各項實驗；20℃蒸氣壓≤1×10-2Pa的非粉末狀化學品普通不需進行吸入染毒途徑的各項實驗。6.3對有可能與皮膚或眼睛接觸的化學品，應進行皮膚或眼刺激性實驗；如化學品的pH≤2或≥11，則不必進行皮膚和粘膜的刺激實驗，并認為其對皮膚和眼有腐蝕作用。6.4對有可能與皮膚重復接觸的化學品，應進行皮膚致敏實驗；經皮毒性屬高毒以及對皮膚有腐蝕作用的化學品則不進行皮膚致敏實驗。6.5我國首創(chuàng)或根據(jù)國內外文獻報道初次生產的化學品，原則上需進行4個階段的毒理學實驗。首先必須做急性毒性實驗、亞急性毒性實驗、亞慢性毒性實驗、三項致突變實驗（涉及基因水平和染色體水平的體外、體內實驗）、致畸實驗和繁殖實驗。根據(jù)實驗成果，判斷與否需繼續(xù)做其它實驗項目。6.6引進國外的生產技術，生產國外已登記生產和同意應用的化學品，如國內的生產單位能證明所生產化學品的理化性質、純度、重要雜質成分及含量均與國外同類化學品一致時，可先進行第一階段和兩項致突變實驗（涉及基因水平和染色體水平兩種類型的實驗）。如實驗成果與國外同類化學品一致，可不繼續(xù)進行第三階段和第四階段實驗。6.7與國內已獲同意生產的化學品屬同類化學品的，如國內的生產單位能證明所生產化學品的理化性質、純度、重要雜質成分及含量均與國內同類化學品一致時，可先進行急性毒性實驗和一項致突變實驗。如實驗成果與國內同類化學品一致，可不繼續(xù)進行實驗。6.8凡將兩種以上的化學品混配成新的制劑時，除必須按對應規(guī)定對其成分分別進行實驗外，還應進行急性聯(lián)合毒性實驗，如有明顯的協(xié)同作用，則根據(jù)具體狀況對該制劑進行必要的其它毒性實驗。6.9致突變實驗的選擇原則6.9.1進行3項致突變實驗的化學品，如2項或3項實驗成果為陽性，應進行致癌實驗。如僅1項實驗成果為陽性，應增做另一項同類型的致突變實驗，如成果仍為陽性，應進行致癌實驗；如成果為陰性，可不繼續(xù)進行實驗。如3項成果均為陰性，可不繼續(xù)進行實驗。6.9.2進行2項致突變實驗的化學品，如2項實驗成果為陽性，應進行第三階段和第四階段的對應實驗。如僅1項實驗成果為陽性，應增做另一項同類型的致突變實驗。如成果仍為陽性，應進行第三階段和第四階段的對應實驗；如成果為陰性，可不繼續(xù)進行實驗。如2項成果均為陰性，可不繼續(xù)進行實驗。6.9.3進行1項致突變實驗的化學品，如實驗成果為陽性，應增做另一項同類型的致突變實驗。如成果仍為陽性，應進行第三階段和第四階段的對應實驗。如成果為陰性，可不繼續(xù)進行實驗。7受試樣品的規(guī)定7.1受試樣品必須是按照既定的生產工藝和配方進行規(guī)范化生產的產品，其成分和濃度與實際生產、經營和使用的產品相似。7.2提供與受試樣品毒性有關的物理、化學性質資料7.2.1化學名稱、CAS編號、構造式7.2.2測定辦法、純度、所含重要雜質、光譜圖7.2.3性狀、氣味、穩(wěn)定性（熱、空氣、光）7.2.4密度、熔點（℃）、沸點（℃）、閃點、蒸氣壓（Pa℃）、表面張力（N/M℃）、水中溶解度（mg/L℃）、脂溶性（mg/100g℃，闡明溶劑種類）、脂水分派系數(shù)（闡明溶劑種類）、膨脹系數(shù)、爆炸極限、pH值、一定pH值下的水解狀況7.3提供原料來源、生產工藝、人的可能攝入量、使用闡明書等有關資料7.4對受試樣品的解決7.4.1受試樣品應新鮮配制。除非有資料表明以溶液（或乳濁液、懸濁液等）保存含有穩(wěn)定性。固體受試樣品應溶于或懸于適宜的賦形劑（溶劑或載體）中，并進行稀釋。液體受試樣品可直接使用或稀釋后使用。根據(jù)受試樣品的理化性質（水溶性和/或脂溶性）擬定受試樣品所用的賦形劑。所用賦形劑在使用劑量水平對實驗動物、菌株或細胞應不產生毒作用，且不與受試樣品發(fā)生任何化學反映，并能保持受試樣品的穩(wěn)定性。普通用蒸餾水、等滲鹽水、植物油、食用淀粉、羧甲基纖維素等。如不是慣用賦形劑，應有參考資料闡明其成分。7.4.2對膨脹系數(shù)較高的化學品應考慮膨脹系數(shù)對實驗成果的影響，急性經口毒性實驗中的最高劑量應為實驗動物能夠耐受的最大染毒劑量，并根據(jù)實驗成果擬定其它實驗的劑量設計，如最大染毒劑量未觀察到明顯毒性效應，則體內致突變實驗、亞急性毒性實驗、亞慢性毒性實驗的最高劑量均應達成實驗動物能夠耐受的最大染毒劑量。7.4.3如果將受試樣品摻入飼料或溶于飲水中進行染毒，受試樣品在飼料或飲水中的含量應恒定并進行穩(wěn)定性監(jiān)測。受試樣品的添加量不能破壞飼料中的營養(yǎng)平衡。實驗動物應單籠喂養(yǎng)，必須用減重法稱量每七天的食物攝入量（如果受試樣品是加入飲水中染毒的，也應測量水的攝入量），并通過食物或飲水的消耗狀況計算動物對受試樣品的攝入量。8應客觀評價動物實驗的成果，將其外推到人的意義是有限的。盡量結合人群觀察資料，作出科學的綜合性評價。8.1在使用NOAEL或LOAEL等對化學品的安全性進行評價時，可根據(jù)狀況調節(jié)安全系數(shù)（例如對于在實驗或流行病學調查中發(fā)現(xiàn)有致癌或致畸作用的化學品，安全系數(shù)可增大至100～1000。在制訂工作場合空氣中化學品職業(yè)接觸限值（OEL）時，應更重視流行病學調查資料，參考動物實驗數(shù)據(jù)，普通以動物實驗的NOAEL或LOAEL為基準，安全系數(shù)能夠不大于20。可按下列公式計算得出多個衛(wèi)生限值。式中SF1×SF2×SF3……×SFn代表從各個角度考慮的安全系數(shù)，在計算ADI時普通以100作為安全系數(shù)（SF=10(種屬差別)×10(個體差別)）。8.2在應用致突變實驗成果篩選致癌物時，應用下列計算式計算致突變性陽性成果預期致癌性的概率：式1合用于對同一種致突變實驗成果的推算，式中＋和－為致突變實驗成果的陽性數(shù)和陰性數(shù)；C＋和C－為致癌性的有和無。式2合用于對多個致突變實驗成果的推算，規(guī)定各致突變實驗是互相獨立的，普通認為反映不同遺傳學終點的實驗基本互相獨立，如多個實驗的檢測終點為同一遺傳學終點，只能將其中一種實驗的成果納入推算，如檢測終點相似的實驗辦法的成果現(xiàn)有陽性又有陰性，則將呈陽性的實驗辦法的成果納入推算。設陽性成果有K個，對應的敏捷度為a1，a2…aK(a=1-P(M/C))，對應的特異度為a1,a2…aK(a=1-P同時設陰性成果有N個，對應的敏捷度為d1，d2…dK(d=1-P(M/C))，對應的特異度為d1,d2…dK(d=1-P式中PK（M+/C+）=a1×a2…×aKPK（M+/C-）=（1-a1）×（1-a2）…×（1-aK）PN（M-/C-）=d1×d2…×dKPN（M-/C+）=（1-d1）×（1-d2）…×（1-dK）當估算成果≥0.5時應考慮進行動物致癌實驗，概率越高，進行動物致癌實驗的必要性越大。當P（C+/M+）≤0.03時，如沒有理由認為該化學品屬于非遺傳致癌物，可暫不考慮進行動物致癌實驗。8.3在對化學品的致畸性進行評價時，我國慣用致畸指數(shù)（雌鼠LD50/最小致畸劑量）和致畸危害指數(shù)（最大不致畸劑量/最大可能攝入量），并按照計算成果進行分級，但由于不同化學品的急性致死劑量-反映關系曲線的狀況不一，因此，可換用LD1、LD5或以雌鼠體重減少（與對照組相比減少一定的比例）的劑量，現(xiàn)在推薦以BMD和安全系數(shù)對化學品的致畸性進行評價。8.4由于誘癌作用無閾值，因此，在對化學品的致癌危險度進行評定時采用實際安全劑量，即化學品引發(fā)致癌率有99%的把握低于10-6的劑量水平。9對化學品毒性鑒定機構的規(guī)定從事化學品毒性鑒定的機構應符合《化學品毒性鑒定管理規(guī)范》中“化學品毒性鑒定實驗室條件及工作準則（GLP）”的各項規(guī)定，并根據(jù)獲得資質的等級從事對應項目的化學品毒性鑒定工作。10對實驗動物及動物實驗室的規(guī)定10.1對實驗動物的規(guī)定10.1.1實驗動物的基本選擇原則10.1.1.1必須使用品有合格證的實驗動物（尚未實施等級管理的動物種屬除外）。10.1.1.2應盡量選用各項實驗的首選動物，如選擇其它種屬應闡明因素并擬定該種屬對所檢測的毒性作用敏感。10.1.2動物實驗的普通規(guī)定（某些實驗對實驗動物有特殊規(guī)定，則以實驗辦法中所列的規(guī)定為準）：10.1.2.1用于同一項實驗的同性別動物，在進行實驗前個體之間的體重相差最多不超出20%。10.1.2.2雌性動物普通應為未交配過的。10.1.2.3實驗動物在實驗環(huán)境中需適應最少3～5天后才干開始染毒。10.1.2.4在同一次實驗中需多次進行經口染毒時，最少每七天對受試動物進行稱重并根據(jù)體重調節(jié)每只動物的染毒體積。10.1.3動物福利規(guī)定應盡量減少實驗動物的使用量，同時為實驗動物提供足夠的空間，以供動物采用正常的適應姿勢，并且能夠有適宜的移動自由；應提供足夠的合格飼料和飲水；在實驗過程中應盡量減輕動物的痛苦，不得虐待動物。10.2進行各項動物實驗的動物實驗室應符合國家法律法規(guī)的有關規(guī)定并獲得主管部門頒發(fā)的合格證。10.3用于動物實驗的飼料、飲水、墊料、籠具等應符合國家法律法規(guī)的有關規(guī)定（飼料應含有主管部門頒發(fā)的合格證）。10.4實驗動物管理及從事動物實驗的人員，必須經培訓、考核，持證上崗。11鑒定報告內容11.1受試樣品名稱、理化性狀、配制辦法、所用濃度、經口染毒需注明染毒體積。11.2體內實驗需注明：實驗動物的種屬、品系和來源（注明合格證號和動物級別）、性別、體重范疇（周齡）、單籠喂養(yǎng)還是群飼；實驗動物喂養(yǎng)環(huán)境，涉及飼料來源（如非原則飼料，應注明飼料的配方）、室溫、相對濕度，動物實驗室和飼料的合格證號；劑量設計和動物分組辦法，每組所用動物性別、數(shù)量及初始體重范疇。11.3體外實驗需注明：使用的菌株或細胞種類、使用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)濃度、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、代謝活化系統(tǒng)；劑量水平、對照組設立、陽性物種類和劑量。11.4重要操作環(huán)節(jié)（如為吸入染毒應注明染毒設備中的氣流速度等參數(shù)）。11.5各項檢測指標的測定辦法及重要檢測儀器的名稱和型號。11.6檢測成果數(shù)據(jù)統(tǒng)計學解決辦法以及各項參數(shù)的計算辦法。11.7體內實驗需描述染毒后動物中毒體現(xiàn)及出現(xiàn)時間和恢復狀況、死亡時間、大致解剖和尸檢所見，進行病理組織學檢查的需描述觀察成果。11.8列表報告各項指標測定成果（普通以的形式體現(xiàn)），并列出經計算所得的毒理學參數(shù)。11.9結論。

第一階段實驗

急性吸入毒性實驗AcuteInhalationToxicityTest1范疇本辦法規(guī)定了動物急性吸入毒性實驗的基本原則、技術和規(guī)定。本辦法合用于評價氣體、揮發(fā)性物質或氣溶膠/顆粒物等化學品的急性吸入毒性作用。2規(guī)范性引用文獻OECDGuidelineforTestingofChemicals(No.403.Feb.1981)OECDGuidelineforTestingofChemicals(No.433.Feb.)3實驗目的3.1檢測化學品對實驗動物的急性吸入毒性作用和強度。3.2為亞急(慢)性等吸入毒性實驗提供劑量選擇的根據(jù)。4定義4.1急性吸入毒性(AcuteInhalationToxicity):實驗動物短時間（24h內）持續(xù)吸入一種可吸入性受試樣品后，在短期內出現(xiàn)的健康損害效應。指在內經呼吸道吸入受試樣品引發(fā)受試動物發(fā)生死亡的概率為50%的濃度。以單位體積空氣中受試樣品的質量(mg/m3)來表達。劑量-反映關系(Dose-responseRelationship)：表達化學毒物的劑量與某一群體中質效應的發(fā)生率之間的關系。5實驗基本原則各實驗組動物在一定時間內吸入不同濃度的受試樣品，染毒濃度的選擇可通過預實驗擬定。染毒后觀察動物的毒性反映和死亡狀況。實驗期間死亡的動物要進行尸檢，實驗結束時仍存活的動物要處死并進行大致解剖。6實驗辦法6.1實驗動物首選健康成年小鼠(18g～22g)和大鼠(180g～220g)，也可選用其它敏感動物。同性別各劑量組個體間體重相差不得超出平均體重的20%。實驗前動物要在實驗環(huán)境中最少適應3～5d時間。6.2劑量設計根據(jù)所選辦法的規(guī)定，原則上應設4～5個劑量組，每組動物普通為10只，雌雄各半。各劑量組間距大小以兼顧產生毒性大小和死亡為宜，普通以較大組距和較少量動物進行預試。如果受試樣品毒性很低，也可采用一次限量法，即用20只動物（雌雄各半），10000mg/m3吸入2h或5000mg/m3吸入4h，如未引發(fā)動物死亡，則不再進行多個劑量的急性吸入毒性實驗。6.3染毒染毒可采用靜式染毒法或動式染毒法。6.3.1受試樣品并使其揮發(fā)，造成實驗需要的受試樣品濃度的空氣，一次吸入性染毒2h。6.3.1.1染毒柜的容積以每只染毒小鼠每小時不少于3L空氣計，每只大鼠每小時不少于30L計。6.3.1.2～次，求其平均濃度。在無適宜測試辦法時?？捎孟率接嬎闳径緷舛菴=(a×d/v)×106式中： C--染毒濃度(mg/m3) a--加入受試樣品的量(ml) d--化學品密度 v--染毒柜容積(L)6.3.2動式染毒法動式染毒是采用機械通風裝置，持續(xù)不停地將含有一定濃度受試樣品的空氣均勻不停地送入染毒柜，空氣交換量大概為12～15次/h，并排出等量的染毒氣體，維持相對穩(wěn)定的染毒濃度（對通過染毒柜的流動氣體應不間斷地進行監(jiān)測，并最少統(tǒng)計2次）。一次吸入性染毒2h。當受試化合物需要特殊規(guī)定時，應用其它的氣流速率。染毒時，染毒柜內應確保最少有19%的氧含量和均衡分派的染毒氣體。普通狀況下，為確保染毒柜內空氣穩(wěn)定，實驗動物的體積不應超出染毒柜體積的5%。且染毒柜內應維持微弱的負壓，以防受試樣品泄露污染周邊環(huán)境。同時，應注意避免受試樣品爆炸。6.3.2.1受試樣品氣化（霧化）和輸入的慣用辦法6.3.2.1.1氣體受試樣品，經流量計與空氣混合成一定濃度后，直接輸人染毒柜。6.3.2.1.2易揮發(fā)液體受試樣品，通過空氣鼓泡或適宜加熱促使揮發(fā)后輸人染毒柜。6.3.2.1.3若受試樣品現(xiàn)場使用時采用噴霧法時，可采用噴霧器或超聲霧化器使其霧化后輸入染毒柜。6.3.2.2染毒濃度計算染毒濃度普通應采用動物呼吸帶實際測定濃度，每半小時一次，取其平均值。各測定濃度值應在其平均值的25%以內。若無適宜的測試辦法，也可采用下列公式計算染毒濃度：C=[a×d/(v1+v2)]×106式中：C--染毒濃度(mg/m3)a--氣化或霧化受試樣品的量(ml)d--受試樣品密度v1--輸入染毒柜風量(L)v2--染毒柜容積(L)6.5實驗成果評價評價實驗成果時，應將LC50與觀察到的毒性效應和尸檢所見相結合考慮，LC50值是受試樣品急性毒性分級和標簽標記以及鑒定受試樣品經呼吸道吸入后引發(fā)動物死亡可能性大小的根據(jù)。引用LC50值時一定要注明所用實驗動物的種屬、性別、染毒方式及時間長短、觀察期限等。評價應涉及動物接觸受試樣品與動物異常體現(xiàn)（涉及行為和臨床變化、大致?lián)p傷、體重變化、致死效應及其它毒性作用）的發(fā)生率和嚴重程度之間的關系。急性吸入毒性分級見附錄1-C。7鑒定報告 鑒定報告應涉及以下內容：7.1受試樣品名稱、理化性狀、配制辦法、所用濃度；7.2動式染毒設備中的氣流速度；7.3實驗動物的種屬、品系和來源（注明合格證號和動物級別）;7.4實驗動物喂養(yǎng)環(huán)境，涉及飼料來源、室溫、相對濕度、動物實驗室合格證號；7.5所用染毒濃度和動物分組，每組所用動物性別、數(shù)量及體重范疇；7.6計算LC50的辦法；7.7染毒后動物中毒體現(xiàn)及出現(xiàn)時間和恢復狀況、死亡時間、大致解剖所見；7.8列表報告成果（建議的表格形式見附錄1-D），計算的LC50及其95%可信區(qū)間；7.9結論。8實驗成果的解釋通過LC50的測定，可評價受試樣品的急性吸入毒性及其毒性分級(見附錄1-C),但其成果外推到人類的有效性是有限的。

急性經皮毒性實驗AcuteDermalToxicityTest1范疇本辦法規(guī)定了動物急性經皮毒性實驗的基本原則、技術和規(guī)定。本辦法合用于評價化學品的急性經皮毒性。2規(guī)范性引用文獻OECDGUIDELINEFORTESTINGCHENICALS（No.402.1995）USEPAOPPTISHealthEffects(Series870.1200June1996)3實驗目的擬定受試樣品能否經皮膚吸取和短期經皮染毒所產生的毒性作用和強度，并為擬定亞急（慢）性經皮毒性及其它實驗的劑量設計提供實驗根據(jù)。4定義4.1急性經皮毒性(AcuteDermalToxicity):受試樣品一次或在24h內多次經皮膚染毒所產生的健康損害效應。4.2經皮半數(shù)致死劑量（DermalMedianLethalDose）:一次或在24h內多次經皮膚染毒受試樣品引發(fā)50%實驗動物死亡的劑量，以mg/kgbw表達。劑量-反映關系(Dose-responseRelationship)：表達化學毒物的劑量與某一群體中質效應的發(fā)生率之間的關系。5實驗基本原則在實驗前，先去除實驗動物受試部位的被毛。將實驗動物分成若干劑量組，每組涂布不同劑量的受試樣品，而后觀察實驗動物中毒反映和死亡狀況，計算LD50。對實驗中死亡的動物做大致解剖和病理學檢查，對實驗結束時的存活動物也應做大致解剖。注意排除受試樣品引發(fā)的皮膚局部刺激或腐蝕作用所致的全身效應。6實驗辦法6.1受試樣品配制固體受試樣品應研磨，過100目篩。用適量無毒無刺激性賦形劑混勻，以確保受試樣品與皮膚良好的接觸。慣用的賦形劑有水、植物油、凡士林、羊毛脂等。液體受試樣品普通不必稀釋，可直接用原液實驗。6.2實驗動物首選大鼠，也可選用豚鼠或家兔。實驗動物體重規(guī)定范疇分別為：大鼠200～300g，豚鼠350～450g，家兔～3000g。實驗期間，為避免實驗動物互相抓撓，應采用單籠喂養(yǎng)。實驗前24h，在動物背部正中線兩側剪毛或剃毛，認真檢查皮膚，規(guī)定完整無損，以免變化皮膚的通透性。去毛面積不應少于實驗動物體表面積的10%。各類動物體表面積的數(shù)值和計算辦法見附錄1-E。6.3劑量和分組實驗動物隨機分為4～5個劑量組。若使用水、植物油、凡士林、羊毛脂外的賦形劑，則需設賦形劑對照組。豚鼠或大鼠每一劑量組（單性別）不少于5只；家兔每一劑量組（單性別）不少于4只。各劑量組間要有適宜的組距，可按等比或等差級設立劑量，以使各劑量組實驗動物產生的毒性反映和死亡率呈現(xiàn)劑量-反映（效應）關系。普通狀況下，如果劑量達成mg/kgbw仍不出現(xiàn)實驗動物死亡時，則不需要再進行高劑量實驗。6.4實驗環(huán)節(jié)選擇適宜辦法固定好實驗動物，將受試樣品均勻涂布于實驗動物的去毛區(qū)，并用油紙和兩層紗布覆蓋，再用無刺激性膠布或繃帶加以固定，以確保受試樣品和皮膚的親密接觸，避免脫落和動物舔食受試樣品。涂布4h后取下固定物和覆蓋物，用溫水或適宜的溶劑洗去皮膚上殘留的受試樣品。6.5全方面觀察中毒的發(fā)生、發(fā)展過程和規(guī)律以及中毒特點和毒作用的靶器官，7實驗成果評價按附錄1-B計算LD50，按附錄1-C進行急性經皮毒性分級。8鑒定報告鑒定報告應涉及下列內容：8.1實驗動物種屬品系、來源、喂養(yǎng)環(huán)境、飼料和飲水；8.2按劑量組列表(見附表1-D)闡明每組動物數(shù)、性別狀況、出現(xiàn)毒效應的動物數(shù)、死亡動物數(shù)；8.3染毒時間、染毒持續(xù)時間、染毒后動物中毒的重要體現(xiàn)；8.4LD50計算辦法；8.5LD50值及其95%可信區(qū)間（涉及雌、雄實驗動物各自的LD50）；8.6病理組織學檢查成果；8.7結論。9實驗成果的解釋經皮LD50是評價化學物急性毒性的重要參數(shù)之一，也是急性毒性分級的根據(jù)。但LD50僅表達受試樣品經皮吸取引發(fā)實驗動物死亡50%的劑量，并不能全方面反映受試樣品經皮吸取的全部急性毒性特性，因此，評價一受試樣品經皮急性毒性既要考慮其對某一品系實驗動物的經皮LD50值，又要考慮其中毒癥狀體現(xiàn)及反映出現(xiàn)的早晚和持續(xù)時間的長短，并結合體重變化與病理學檢查成果等，經綜合分析才干得出經皮急性毒性較為全方面的評價。

急性經口毒性實驗AcuteOralToxicityTest1范疇本辦法規(guī)定了動物急性經口毒性實驗的基本原則、技術和規(guī)定。本辦法合用于評價化學品的急性毒性作用。2規(guī)范性引用文獻OECDGuidelineforTestingofChemicals(No.401.Feb.1987)OECDGuidelineforTestingofChemicals(No.425.Feb.)USEPAOPPTISHealthEffectsGuideline(Series870.1100June1996)3實驗目的3.1檢測化學品對實驗動物的急性毒性作用和強度。3.2為亞急(慢)性等毒性實驗提供劑量選擇的根據(jù)。3.3實驗成果可作為化學品急性毒性分級和標簽標記。４定義4.1急性經口毒性(AcuteOralToxicity):一次或在24h內多次經口予以實驗動物受試樣品后，動物在短期內出現(xiàn)的健康損害效應。體中半數(shù)死亡的毒物的統(tǒng)計學劑量。以單位體重接受受試樣品的質量(mg/kgbw或g/kgbw)來表達。劑量-反映關系(Dose-responseRelationship)：表達化學毒物的劑量與某一群體中質效應的發(fā)生率之間的關系。5實驗基本原則以經口灌胃法予以各實驗組動物不同劑量的受試樣品，每組用一種劑量，染毒劑量的選擇可通過預實驗擬定。染毒后觀察動物的毒性反映和死亡狀況。實驗期間死亡的動物要進行尸檢，實驗結束時仍存活的動物要處死并進行大致解剖。本辦法重要合用于嚙齒類動物的研究，但也可用于非嚙齒類動物的研究。6實驗辦法6.1受試樣品的解決受試樣品應溶解或懸浮于適宜的賦形劑中，（不溶性固體或顆粒狀物質研磨、過100目篩）建議首選水或食用植物油（如玉米油）作溶劑，也可考慮使用其它賦形劑（如羧甲基纖維素、明膠、淀粉等）等配成混懸液；不能配制成混懸液時，可配制成其它形式(如糊狀物等)，但不能采用品有明顯毒性的有機化學溶劑。如采用有毒性的溶劑應單設溶劑對照組觀察。6.2實驗動物首選健康成年小鼠(18g～22g)和大鼠(180g～220g)，也可選用其