水中微生物的測定

實驗

水中細(xì)菌總數(shù)的測定實驗?zāi)康恼莆账畼拥牟扇》椒?。掌握水樣?xì)菌總數(shù)測定的方法；了解水源水的平板菌落計數(shù)的原則。學(xué)習(xí)檢測水中大腸菌群的原理和方法。了解大腸菌群數(shù)量與水質(zhì)狀況的關(guān)系。了解大腸菌群的數(shù)量在飲水中的重要性。實驗原理飲用水是否合乎標(biāo)準(zhǔn)，通常通過水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)來確定。細(xì)菌總數(shù)是指1毫升水樣在一定的培養(yǎng)基平板（普通瓊脂培養(yǎng)基）中，37℃24小時培養(yǎng)后所生長的菌落數(shù)，此值僅是一種近似值。一般規(guī)定，1毫升自來水的總菌數(shù)不得超過100個。如果水源被糞便污染，則有可能也被腸道病原菌污染而引起傷寒、痢疾、霍亂等腸道病的流行，但腸道病原菌在水中數(shù)量較少，又易變異與死亡，故從水中特別是自來水中分離出病原菌，常常有困難。而大腸菌群是腸道好氧菌中最普遍和數(shù)量最多的一種，所以常將其作為糞便污染的標(biāo)志，即根據(jù)水中大腸菌群的數(shù)目來判斷水源是否被糞便所污染，并間接推測水源受腸道病原菌污染的可能性。一般規(guī)定每1000毫升自來水中大腸菌群不超過三個。實驗材料普通瓊脂培養(yǎng)基；乳糖蛋白胨發(fā)酵管；3倍濃縮乳糖蛋白胨發(fā)酵管，復(fù)紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基。無菌空瓶；滅菌水；滅菌培養(yǎng)皿、吸管、試管。自來水、池水、河水或湖水實驗步驟水樣的采取自來水：先將自來水龍頭用火焰灼燒3min，再開放水龍頭水流5min，以滅菌三角燒瓶接取水樣。池水、河水或湖水：取距水面10-15cm的深層水樣，將具塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，盛滿后將瓶塞蓋好再從水中取出。細(xì)菌總數(shù)測定

1）自來水

吸取1ml水樣與平皿內(nèi)冷卻至45℃的培養(yǎng)基混勻，于37℃下培養(yǎng)24h計數(shù)，共兩皿。同時做不接水樣的空白皿對照試驗。

2）

池水、河水或湖水

采用平板菌落計數(shù)法：一般中等污穢水樣，取10－1、10－2、10－3三個稀釋度，污穢嚴(yán)重的取10－2、10－3、10－4三個稀釋度。

最后三個稀釋度的稀釋水樣重復(fù)上述自來水的細(xì)菌測定試驗。水樣稀釋過程示意圖菌落計數(shù)方法

（1）計算相同稀釋度的平均菌落數(shù)

有較大片菌苔生長時，棄用；以無片菌苔生長的平皿計數(shù)。

若片菌苔大小不到培養(yǎng)皿的一半，其余一半分布均勻，將此一半計數(shù)×2

（2）選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的平板

只有一個符合此范圍時，以該平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)。

有兩個在30～300間時，按兩者菌落總數(shù)比值決定：比值小于2，取平均；比值大于2，取較小的菌落總數(shù)。

（3）所有菌落數(shù)均大于300，取稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)。

（4）

所有菌落數(shù)均小于30，取稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)。

（5）

所有菌落數(shù)均不在30～300之間，以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘稀釋倍數(shù)。計算菌數(shù)落總數(shù)方法舉例

例次不同稀釋的平均菌落數(shù)兩個稀釋度菌落數(shù)之比菌落總烽（個/ml）10-110-210-31136516420--16400或1.6×10422760295461.637750或3.8×10432890271602.227100或2.7×1044無法計數(shù)1650513--513000或5.1×10552