阜油1號(hào)薄荷莖尖離體培養(yǎng)技術(shù)研究

阜油1號(hào)薄荷莖尖離體培養(yǎng)技術(shù)研究

采用莖尖離體培養(yǎng)技術(shù)，對(duì)阜油1號(hào)的生態(tài)效益進(jìn)行了示范，原油產(chǎn)量超過(guò)30%，油品質(zhì)也顯著提高。1998年筆者對(duì)影響組培苗生長(zhǎng)和生產(chǎn)成本的幾項(xiàng)培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)方法進(jìn)行了試驗(yàn)研究,總結(jié)出了繁殖速度快、培養(yǎng)基簡(jiǎn)化、成本低廉的實(shí)用技術(shù),現(xiàn)報(bào)告如下。1材料和方法1.1培養(yǎng)條件及光照試驗(yàn)取材:“阜油1號(hào)”薄荷莖尖試管苗。培養(yǎng)條件:溫度為27±1℃;光強(qiáng)為3000~4000lx;每天14h連續(xù)光照;培養(yǎng)容器為125ml廣口瓶。1.2測(cè)試方法1.2.1薄荷苗的制備設(shè)置4個(gè)處理的培養(yǎng)基濃度:1/2MS、2/3MS、3/4MS和全量MS。采用固體培養(yǎng)基,瓊脂7g/L、蔗糖30g/L、pH5.8。薄荷試管苗按每段2個(gè)葉節(jié)截取,垂直插于培養(yǎng)基中,每瓶5段。調(diào)查記載各處理的發(fā)根時(shí)間、繁殖系數(shù)、根莖葉的生長(zhǎng)狀況等。1.2.2葉節(jié)和莖段的垂直分布采用固體2/3MS培養(yǎng)基,將試管苗分別截成含1個(gè)葉節(jié)、2個(gè)葉節(jié)和3個(gè)葉節(jié)的莖段。1個(gè)葉節(jié)的莖段垂直置于培養(yǎng)基中,深度以葉節(jié)接觸培養(yǎng)基為宜。2個(gè)葉節(jié)和3個(gè)葉節(jié)的莖段分垂直和水平2種放置方式。每瓶5個(gè)莖段,觀察記載生長(zhǎng)狀況。1.2.3比較甘蔗和普通糖的過(guò)程2/3MS固體培養(yǎng)基中,分別加入30g/L蔗糖和普通食用白糖30g/L,培養(yǎng)基其他成分相同,觀察對(duì)比生長(zhǎng)狀況。1.2.4控制培養(yǎng)基的制備采用2/3MS培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)加入瓊脂7g/L;液體淺層培養(yǎng)不加瓊脂,培養(yǎng)基不需熬煮,定容調(diào)酸后立即分裝,每瓶10ml培養(yǎng)基(固體為25ml)。滅菌等其他操作相同,培養(yǎng)物均為2個(gè)葉節(jié)的莖段,水平放置。2結(jié)果與分析2.1生長(zhǎng)狀況的分析試驗(yàn)結(jié)果表明,在各種濃度的培養(yǎng)基中,培養(yǎng)物均能發(fā)根生長(zhǎng)。隨著濃度的增加,發(fā)根速度和繁殖系數(shù)均略有下降,但隨著營(yíng)養(yǎng)物的增加,莖葉生長(zhǎng)狀況逐漸改善。培養(yǎng)物在1/2MS培養(yǎng)基中發(fā)根快,腋芽25d左右可長(zhǎng)成高8cm左右、具有8~10個(gè)葉節(jié)的組培苗,但苗勢(shì)弱,30d后中下部葉片開(kāi)始變黃。在MS培養(yǎng)基中,培養(yǎng)物發(fā)根、腋芽伸長(zhǎng)較1/2MS培養(yǎng)基中的晚2~3d,每瓶莖數(shù)少2個(gè)左右,但莖葉生長(zhǎng)明顯健壯,節(jié)間短粗;30d左右可長(zhǎng)成高8cm左右、具有9個(gè)以上葉節(jié)的組培苗;50d仍無(wú)黃葉。2/3MS、3/4MS培養(yǎng)基中,培養(yǎng)物的生長(zhǎng)狀況介于1/2MS和MS之間(見(jiàn)表1)。從生產(chǎn)成本和擴(kuò)繁要求兩方面考慮,薄荷組培苗微繁采用2/3MS培養(yǎng)基最為適宜。2.2雙葉節(jié)和3葉節(jié)莖段的生長(zhǎng)單葉節(jié)莖段的生長(zhǎng)發(fā)育較雙葉節(jié)、3葉節(jié)的晚3~5d,但幾乎每個(gè)葉節(jié)的2個(gè)腋芽均能伸長(zhǎng)、成苗,繁殖系數(shù)反較雙葉節(jié)的高。3葉節(jié)莖段的腋芽前期生長(zhǎng)較快,25d后由于伸長(zhǎng)的腋芽較多,光照、營(yíng)養(yǎng)條件差,下部葉片開(kāi)始變黃(見(jiàn)表2)。雙葉節(jié)和3葉節(jié)的莖段水平放置于培養(yǎng)基中,每個(gè)葉節(jié)既能發(fā)根又能長(zhǎng)芽,同等條件下與垂直放置的相比,每瓶多長(zhǎng)出3~4個(gè)莖,繁殖系數(shù)明顯提高。因此,一般情況下,薄荷組培苗的微繁采用雙葉節(jié)莖段水平放置較為適宜。2.3組培苗的生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明,同等條件下,蔗糖和普通食用白糖對(duì)組培苗生長(zhǎng)的影響,30d內(nèi)無(wú)明顯差異;35d后,采用普通食用白糖的組培苗,下部葉片較采用蔗糖的先變黃。因此,在薄荷組培苗的微繁中,完全可用普通食用白糖替代蔗糖。2.4增加數(shù)增加23條試驗(yàn)顯示,液體淺層培養(yǎng)較固體培養(yǎng)莖段發(fā)根提早1d左右,每段的根數(shù)增加2~3條;初期苗生長(zhǎng)速度不及固體培養(yǎng)的生長(zhǎng)速度,12d后生長(zhǎng)速度明顯加快,25d左右生長(zhǎng)量趕上固體培養(yǎng)的生長(zhǎng)量;而后由于液體培養(yǎng)基養(yǎng)分消耗殆盡,生長(zhǎng)速度趨緩,下部葉片開(kāi)始變黃(見(jiàn)表3)。3組培苗的繁殖、培養(yǎng)(1)薄荷組培苗微繁的培養(yǎng)基濃度、莖段大小應(yīng)根據(jù)具體情況而定。一般情況下,采用2/3MS培養(yǎng)基、雙葉節(jié)莖段水平放置較為適宜;保苗階段,試管苗需保存較長(zhǎng)時(shí)間,應(yīng)采用MS培養(yǎng)基;若材料較少,需迅速擴(kuò)繁,則采用1/2~2/3MS培養(yǎng)基、單葉節(jié)繁殖較好。(2)液體淺層培養(yǎng)中,培養(yǎng)基的液面不宜太深,以常規(guī)固體培養(yǎng)基的1/2~1/3為宜。過(guò)深,培養(yǎng)物完全沉入瓶底,易窒息而死,成苗率低。同時(shí),組培苗要及時(shí)繼代培養(yǎng),以免因營(yíng)養(yǎng)耗盡而枯死。(3)組織培養(yǎng)所需藥品的價(jià)格較高,瓊脂價(jià)格昂貴,蔗糖價(jià)格也不斷上揚(yáng),因此,降低成本成為組培苗工廠化生