組織切片流程

常規(guī)石蠟包埋社團(tuán)切片(常規(guī)切片)制備的操作流程及要求㈠社團(tuán)塊依序進(jìn)行：①水洗，②脫水，③透明，④浸蠟，⑤包埋和⑥切片。㈡社團(tuán)切片制備及其HE染色過程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蠟等為易燃、有毒物，必須專人管理，2m以內(nèi)不患上有有焰的火，局部環(huán)境應(yīng)有良好的透風(fēng)和救火設(shè)施。㈢常規(guī)切片的手工操作(步驟次序和各步驟的持續(xù)時(shí)間)1．水洗：用水流沖洗已經(jīng)固定的社團(tuán)塊 30min。2．脫水(常溫下)(1)乙醇－甲醛(AF)液固定60~120min(2)80%乙醇60~120min95%乙醇I60~120min95%乙醇n60~120min(5)無水乙醇I60~120min(6)無水乙醇n60~120min(7)無水乙醇川60min［注意事項(xiàng)］①未經(jīng)充分固定的社團(tuán)不患上進(jìn)入脫水程序。②用于脫水的試劑容積應(yīng)為社團(tuán)塊總體積的5?10倍以上。③自低濃度乙醇向高濃度乙醇逐級(jí)移進(jìn)脫水。 ④脫水試劑應(yīng)及時(shí)過濾、更換(500ml乙醇可用于500個(gè)社團(tuán)塊脫水；加入硫酸銅的無水乙醇變藍(lán)時(shí)，提示需要更換)。⑤較大社團(tuán)塊的脫水時(shí)間長(zhǎng)于較小者，應(yīng)將兩者分隔進(jìn)行脫水。⑥社團(tuán)置于無水乙醇內(nèi)的時(shí)間不宜過長(zhǎng)(以免硬化) 。⑦丙酮脫水性能強(qiáng)，會(huì)使社團(tuán)塊過縮、硬脆，不宜用以替換無水乙醇。3．透明二甲苯I20min二甲苯n20min(3)二甲苯川20min［注意事項(xiàng)］①二甲苯的容積應(yīng)為社團(tuán)塊總體積的5?10倍以上。②社團(tuán)塊在二甲苯中透明的時(shí)間不宜過長(zhǎng)(以防社團(tuán)硬、脆)，并依不同品類社團(tuán)及其大小而異；社團(tuán)出現(xiàn)棕黃或暗紅色透明即可。③二甲苯應(yīng)及時(shí)過濾、更換。④社團(tuán)經(jīng)二甲苯程度適當(dāng)處理后不顯透明時(shí)，常提示該社團(tuán)的固定或脫水不充分，應(yīng)查找原因并妥帖處理。4．浸蠟石蠟I(45~50C)60min石蠟n(56~58C)60min石蠟川(56~58C)60min［注意事項(xiàng)］①熔化石蠟必須有專人負(fù)責(zé)，必須在熔蠟箱內(nèi)或水浴中( 70C)進(jìn)行，不患上用有焰的火加溫。②熔蠟的容積應(yīng)為社團(tuán)塊總體積的 5?10倍以上。③社團(tuán)塊經(jīng)二甲苯程度適當(dāng)透明后方可轉(zhuǎn)入浸蠟過程，應(yīng)盡可能削減將透明后社團(tuán)塊表面的二甲苯帶入熔蠟中。④浸蠟時(shí)間相宜，過短時(shí)浸蠟不充分(社團(tuán)過軟) ，過長(zhǎng)時(shí)社團(tuán)硬脆。⑤熔蠟應(yīng)及時(shí)過濾、更換。5．包埋先將熔化的石蠟傾入包埋生產(chǎn)模型中，再用加熱的彎曲鈍頭鑷子輕輕夾取已經(jīng)過浸蠟的社團(tuán)塊，使社團(tuán)塊的最大面或被特別指定處的社團(tuán)面向下埋入熔蠟中；應(yīng)將社團(tuán)塊平正地置放于包埋生產(chǎn)模型底面的中央處；包埋于同一蠟塊內(nèi)的多塊細(xì)小社團(tuán)應(yīng)彼此靠近并位于同一最簡(jiǎn)單的面上；腔壁、皮膚和黏膜社團(tuán)必須垂直包埋(立埋) 。將與社團(tuán)塊相關(guān)的病理號(hào)小條置入包埋生產(chǎn)模型內(nèi)熔蠟的一側(cè)。待包埋生產(chǎn)模型內(nèi)的熔蠟表面凝固后，即將生產(chǎn)模型移入冷水中加速凝固。（4）從包埋生產(chǎn)模型中掏出凝固的包埋蠟塊 （簡(jiǎn)稱蠟快），用刀片去除社團(tuán)塊周圍的過多石蠟（社團(tuán)塊周圍保留1~2mm石蠟為宜）。將包埋蠟塊修整成為規(guī)則的正方形或長(zhǎng)方形。（5）將病理號(hào)小條安穩(wěn)地烙貼在蠟塊一側(cè)（編號(hào)應(yīng)清晰可見） 。（6）把修整好的蠟塊烙貼在撐持器上，以備切片。（7）使用包埋機(jī)的要領(lǐng)按有關(guān)廠商的說明書操作。（8）注意事項(xiàng)應(yīng)將社團(tuán)塊嚴(yán)格分件包埋。包埋時(shí)一定要首先認(rèn)真核對(duì)社團(tuán)塊的病理號(hào)（包括亞號(hào)） 、塊數(shù)和取材醫(yī)師對(duì)包埋面的要求，準(zhǔn)確地包入相應(yīng)的病理號(hào)小條。發(fā)生包埋差錯(cuò)時(shí)，必須立即與取材醫(yī)師和病理科當(dāng)班負(fù)責(zé)人取患上聯(lián)系，及時(shí)處置。必須嚴(yán)防各類異物污染，勿將無關(guān)社團(tuán)（包括縫線、紙屑或其他異物（尤其是硬質(zhì)異物）埋入蠟塊內(nèi)。包埋過程要操作迅速，以免社團(tuán)塊尚未埋妥前熔蠟?zāi)?。包埋用的熔蠟?yīng)純凈，熔點(diǎn)相宜。浸蠟I用軟蠟（熔點(diǎn)為 45~50C）,浸蠟n、川和包埋用蠟均用硬蠟（熔點(diǎn)為56~58C）。包埋用熔蠟使用前應(yīng)將先靜置沉淀、過濾。熔蠟時(shí)不患上使用有焰的火，以防燃燒現(xiàn)象。包埋用熔蠟的溫度應(yīng) <65C;包埋用的鑷子不可加溫太高，以免燙傷社團(tuán)。6．切片（1）切片刀或一次性切片刀片必須鋒利。使用切片刀時(shí)，必須精心磨備（在低倍目鏡下確認(rèn)刀刃完好口）;使用一次性切片刀片時(shí)，應(yīng)及時(shí)更新。（2）載玻片必須潔凈、光明。（3）將切片刀或刀片安裝在持刀座上（以 15°為宜）。（4）將蠟塊固定于持撐持器上，并調(diào)整蠟塊和刀刃至適當(dāng)位置（刀刃與蠟塊表面呈5°夾角）。（5）細(xì)心移動(dòng)刀座或蠟塊撐持器，使蠟塊與刀刃接觸，旋緊刀座和蠟塊撐持器。（6）修塊（粗切）：用右手勻速旋轉(zhuǎn)切片機(jī)輪，修切蠟塊表面至包埋此中的社團(tuán)塊完備地全數(shù)切到。修塊粗切片的厚度為15?20叩。［注意：對(duì)于醫(yī)囑再次深切片（特別是在原切片中發(fā)現(xiàn)了有意義病變而進(jìn)行的深切片），應(yīng)盡量少修塊，以盡量好地獲患上有關(guān)病變的連續(xù)性。］（7）調(diào)節(jié)切片厚度調(diào)節(jié)器（一般為 4~6^m）,進(jìn)行切片，切出的蠟片應(yīng)連續(xù)成帶，完備完好，厚度相宜（3?5^m）、均勻，無刀痕、顫痕、皺折、開裂、缺損、松解等。（8、以專用小鑷子輕輕夾取完備、無刀痕、厚薄均勻的蠟片，放入伸展器的溫水中（ 45C左右），使切片全面展開。［注意：必須水溫相宜、潔凈（尤其是水面）;每切完一個(gè)蠟塊后，必須認(rèn)真清理水面，不患上遺留其它病例的社團(tuán)碎片，以免污染。 ］（9）將蠟片附貼于涂有蛋白甘油或經(jīng)3－氨丙基－三乙氧基硅烷 （3-aminopropyltriethoxysilane,APES）處理過的載玻片上（HE染色時(shí)酌情使用，可省略，須要時(shí)） 。蠟片應(yīng)置放在載玻片右（或左）2/3處的中央，留出載玻片左（或右）1/3的位置用于貼附標(biāo)簽。蠟片與載玻片之間無氣泡。（10）必須立即在置放了蠟片的載玻片一端（待貼標(biāo)簽的一端） ,用優(yōu)質(zhì)記號(hào)筆或刻號(hào)筆準(zhǔn)確、清楚標(biāo)記其相應(yīng)的病理號(hào)（包括亞號(hào)）。［注意：必須確保載玻片上的病理號(hào)與相關(guān)社團(tuán)石蠟包埋塊的病理號(hào)完全一致,不患上錯(cuò)寫或漏寫病理號(hào)。］（11、將置放了蠟片的載玻片呈 45C角斜置片刻；待載玻片上的水分流下后，將其置于烤箱中烘烤（60?62C,30?60min）,然后即可進(jìn)行染色。（12）注意事項(xiàng)社團(tuán)塊固定、脫水、透明和浸蠟的質(zhì)量直接影響切片制備。切片過程中碰到的困難首先應(yīng)注意從切片前的上述各環(huán)節(jié)中尋找原因。切片機(jī)的質(zhì)量是制備優(yōu)質(zhì)切片的重要前提。要使用質(zhì)量好的切片機(jī)，規(guī)范地切片，精心維護(hù)切片機(jī)。經(jīng)由內(nèi)窺鏡、穿刺等獲取的細(xì)小社團(tuán)，應(yīng)間斷性連續(xù)切片多面（一般至少制備 6張蠟片，須要時(shí)制備更多張）。需作特殊染色、免疫組化染色等的病例，可預(yù)制蠟片備用。切片人員應(yīng)細(xì)心操作，防范被切片刀具割傷。㈣常規(guī)切片的自動(dòng)社團(tuán)處理機(jī)操作（步驟次序和各步驟的持續(xù)時(shí)間，累計(jì)需要 14小時(shí)）乙醇一甲醛（AF）固定液2WOmin95%乙醇I2WOmin95%乙醇n2WOmin無水乙醇I60min無水乙醇n60min二甲苯I30min二甲苯n30min&石蠟I30min石蠟n60min石蠟川90min11.包埋（1）手工常規(guī)包埋：拜見上述的“㈠手工操作”項(xiàng)。（2）用社團(tuán)包埋機(jī)時(shí)，按有關(guān)廠商說明書的規(guī)定操作。切片：拜見上述的“㈠手工操作”項(xiàng)。注意事項(xiàng)（1）必須按有關(guān)說明書的規(guī)定，使用和維護(hù)自動(dòng)社團(tuán)處理機(jī)、包埋機(jī)、磨刀機(jī)、封蓋玻片機(jī)等儀器等。（2） 要嚴(yán)防因停電、機(jī)械故障等造成的社團(tuán)塊損壞。一旦發(fā)生此類事故，必須及時(shí)向科主任報(bào)告，盡快采