毛細(xì)管電泳法分離消旋體藥物

毛細(xì)管電泳法分離消旋體藥物

甲溴后馬托英是一種抗膽紅素藥物，常用于眼科檢查和成像。氧氟沙星是氟喹諾酮類廣譜抗菌藥。酮康唑?yàn)檫溥蝾惪拐婢?用于治療淺表和深部真菌病。利阿唑是維甲酸代謝阻斷劑,臨床用于治療前列腺癌、乳腺癌和慢性斑塊型銀屑病等疾病?？ňS地洛是一個新型的非選擇性β受體阻斷劑,它能擴(kuò)張血管起到抗高血壓的作用。手性藥物的對映異構(gòu)體一般存在藥理學(xué)、藥效學(xué)和藥動學(xué)的差異,因此其分離分析在藥物質(zhì)量控制等方面具有重要意義。環(huán)糊精及其衍生物在毛細(xì)管電泳法(CE)分離手性藥物對映體中得到了廣泛的應(yīng)用。有文獻(xiàn)報(bào)道,用阿米卡星在CE中對后馬托品進(jìn)行手性拆分,用三甲基-β-環(huán)糊精作為手性選擇劑拆分氧氟沙星對映體,用硫酸化-β-環(huán)糊精拆分酮康唑?qū)τ丑w,用β-環(huán)糊精拆分卡維地洛對映體。尚未見文獻(xiàn)報(bào)道利用毛細(xì)管電泳法對利阿唑進(jìn)行對映體分離。作者首次以2-甲基-β-環(huán)糊精(2-O-M-β-CD)為手性選擇劑,利用高效毛細(xì)管電泳法對上述5種手性藥物進(jìn)行了對映體分離研究?？疾炝吮尘半娊赓|(zhì)溶液pH值、手性選擇劑濃度和緩沖鹽濃度對分離的影響,并對分離機(jī)理進(jìn)行了探討。5種藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1。1河北東南角光導(dǎo)纖維廠CL1030高效毛細(xì)管電泳儀、HW-2000色譜工作站(北京彩陸科學(xué)儀器有限公司),未涂層熔融石英毛細(xì)管柱(河北永年光導(dǎo)纖維廠)。2-甲基-β-環(huán)糊精(2-O-M-β-CD,平均取代度為3,山東濱州智源生物科技有限公司),甲溴后馬托品、氧氟沙星、酮康唑、利阿唑、卡維地洛對照品(中國藥品生物制品檢定所),三羥甲基氨基甲烷(Tris)、磷酸(分析純,天津康科德科技有限公司),甲醇(色譜純,天津康科德科技有限公司),水為二次蒸餾水(自制)。2實(shí)驗(yàn)條件及藥物毛細(xì)管柱:石英毛細(xì)管(49cm×50μm,有效長度40cm);進(jìn)樣方式:重力進(jìn)樣,高度差10cm;進(jìn)樣時間:5s;分離電壓:20kV;正極模式進(jìn)樣;甲溴后馬托品、氧氟沙星、酮康唑、利阿唑、卡維地洛的檢測波長分別為220、293、240、254、285nm;溫度:室溫。新毛細(xì)管柱用水沖洗5min,充滿1.0mol·L-1NaOH溶液后放置2h進(jìn)行活化,然后用水沖洗5min。實(shí)驗(yàn)開始前,依次用0.1mol·L-1NaOH溶液、水、背景電解質(zhì)溶液沖洗10min。每2次運(yùn)行之間用背景電解質(zhì)溶液沖洗2min。背景電解質(zhì)溶液的配制:稱取Tris適量,用二次重蒸水溶解,用H3PO4調(diào)節(jié)至所需pH值,配成緩沖溶液。用緩沖溶液溶解適量2-O-M-β-CD即得背景電解質(zhì)溶液。背景電解質(zhì)溶液在使用前,經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾,超聲。消旋體藥物的配制:分別精密稱取各藥物對照品適量,用少量甲醇溶解后,用水稀釋成質(zhì)量濃度約為1g·L-1儲備液,冷藏備用。使用前量取該儲備液適量,用背景電解質(zhì)溶液稀釋制成質(zhì)量濃度約為0.5g·L-1溶液,經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾后進(jìn)樣。3結(jié)果3.1緩沖液ph值的影響背景電解質(zhì)溶液的pH值對分離度的影響是很復(fù)雜的,主要體現(xiàn)在不僅可以改變毛細(xì)管內(nèi)表面硅羥基的解離程度從而影響電滲流的大小,也可以決定分析物的荷電情況,進(jìn)而影響分析物的遷移行為。以30mmol·L-1Tris-H3PO4緩沖液(含30mmol·L-12-O-M-β-CD)為背景電解質(zhì)溶液,在電壓為20kV,室溫的條件下,考察了緩沖液pH值在2.0～8.0內(nèi)變化對分離度的影響。由于甲溴后馬托品的pKa值為9.88,氧氟沙星的pKa值為7.60,酮康唑的pKa1值為6.50、pKa2值為2.90,利阿唑的pKa值為8.90,卡維地洛的pKa值為7.91,其電離程度及相應(yīng)的電泳速度隨pH值的降低而升高;但是,電滲流隨pH值的降低而減小。分析物的表觀遷移速度等于電滲流的速度與分析物自身的電泳速度之和。當(dāng)二者和最小時,分析物的遷移時間最大,此時分析物的分離度達(dá)到最大。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,甲溴后馬托品和卡維地洛的最佳pH值為3.0,氧氟沙星、酮康唑和利阿唑的最佳pH值為2.0。結(jié)果見表1。3.22cd柔性的影響手性選擇劑的種類和濃度是影響手性分離的重要因素。在分析物各自適宜的pH值條件下,分別考察了2-O-M-β-CD的濃度對分離度的影響。與β-CD相比,2-O-M-β-CD分子的口徑和深度較大,且衍生化后的CD柔性增加,使主客體分子之間的相互作用點(diǎn)增加,作用力增強(qiáng),更易與手性中心相連的原子發(fā)生相互作用。結(jié)果表明,在20～100mmol·L-1內(nèi),隨著2-O-M-β-CD濃度的增加,手性藥物的分離度先增大后減小。手性選擇劑濃度太小,手性選擇劑因不能與分析物形成有效的包合物而不能達(dá)到最佳分離效果;濃度太大時,由于手性選擇劑對分析物兩個單一異構(gòu)體的作用差別減小,也不能達(dá)到最佳的拆分效果。2-O-M-β-CD的濃度為80mmol·L-1時,氧氟沙星的分離度最大;2-O-M-β-CD濃度為50mmol·L-1時,甲溴后馬托品、酮康唑、利阿唑、卡維地洛的分離效果最佳。結(jié)果見圖2。3.3緩沖溶液濃度在分析物各自的最佳pH值和最佳環(huán)糊精濃度的條件下,繼續(xù)考察緩沖鹽濃度對分離的影響。分離度隨緩沖鹽濃度增大先升高后降低。原因是緩沖溶液濃度的增大導(dǎo)致電滲流降低和溶液黏度的增大,使分析物遷移速度降低,與2-O-M-β-CD作用的時間也相應(yīng)增加,所以分離度升高。但是,緩沖溶液濃度過大,會造成背景電解質(zhì)溶液的離子強(qiáng)度過大,焦耳效應(yīng)增大,分離度反而下降。因此,緩沖鹽濃度為40mmol·L-1時,甲溴后馬托品的分離效果最佳,其余4種分析物在緩沖鹽濃度為70mmol·L-1時,達(dá)到滿意分離。5種藥物對映體分離的CE圖譜見圖3。3.4-o-m--cd分離苯環(huán)的能力CD環(huán)狀分子中有特殊的空腔,可與相應(yīng)立體大小的對映體形成包合物。在CE中,藥物對映體與CD結(jié)合能力不同,導(dǎo)致所形成的包合物的淌度不同而分離。Armstrong等研究表明,CD對含有苯環(huán)的化合物尤其是手性碳附近含有苯環(huán)的化合物具有特異的對映體識別能力。在本文研究的5個化合物中,除卡維地洛外,其余4個化合物手性碳原子附近均含有苯環(huán);因此,2-O-M-β-CD對甲溴后馬托品、氧氟沙星、酮康唑、利阿唑4種化合物均表現(xiàn)出較好的分離能力。此外,藥物手性中心附近含有羰基、羥基、胺基等官能團(tuán),它們能與CD分子中的羥基形成氫鍵,也對藥物對映體分離起到重要作用。4對映射體分離以電中性環(huán)糊精衍生物2-O-M-β-CD為手性選擇劑,對5種手性藥物