鹽酸小堿與環(huán)孢素a合用對小鼠肝微粒體cyp450、erd、adm和gs的影響

鹽酸小堿與環(huán)孢素a合用對小鼠肝微粒體cyp450、erd、adm和gs的影響

小黃堿（berberin）具有抗微生物、抗心力衰竭、抗高血壓、降血糖和抗高血壓作用。環(huán)孢素A(cyclosporine,CsA)是器官移植受者普遍應(yīng)用的免疫抑制劑之一,我們在臨床工作中首次發(fā)現(xiàn),合并應(yīng)用鹽酸小檗堿(berberinehydrochloride,BBH)可使CsA的血濃度顯著提高。為了闡明BBH和CsA相互作用的機制,我們研究了BBH和CsA對小鼠肝臟細胞色素P450酶(cytochromeP450,CYP450)系的影響。1實驗動物及藥物1.1藥品與試劑:BBH為上海天平制藥廠產(chǎn)品,批號990801;CsA為華北制藥集團有限責(zé)任公司生產(chǎn),批號960801;酮康唑為西安楊森制藥有限公司產(chǎn)品,批號000222565;硝苯地平注射液為武漢濱湖制藥廠生產(chǎn),批號961218;地塞米松注射液為江蘇板橋藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號9910221;紅霉素(erythromycin)、氨基比林(aminopyrine)、6-磷酸葡萄糖二鈉、6-磷酸葡萄糖脫氫酶、1-氯-2,4-二硝基苯(1-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)、還原型谷胱甘肽(GSH)均為Sigma公司產(chǎn)品。牛血清白蛋白(BSA)、氧化型輔酶Ⅱ(NADP)、甲醛、乙酰丙酮、甲醇等為國產(chǎn)分析純試劑。1.2分組及給藥:昆明種雄性小鼠,體重20～24g,由本院實驗動物中心提供,隨機分為陰性對照組、陽性對照組(酶誘導(dǎo)劑采用地塞米松,酶抑制劑采用硝苯地平或酮康唑)、BBH組、CsA組和BBH與CsA合用組。BBH、CsA、酮康唑ig給藥,硝苯地平、地塞米松ip給藥,陰性對照組以相同途徑給予等容量的溶媒,分別給藥3,6d后處死動物,取肝臟制備微粒體。1.3儀器:分光光度法采用UV-3000分光光度計(日本島津)及HTS7000多孔板分析儀(美國PE公司)。1.4微粒體制備:采用鈣沉淀法制備肝臟微粒體,-40℃保存?zhèn)溆谩?.5藥物代謝酶測定:細胞色素P450含量測定采用Omura方法,紅霉素N-脫甲基酶(aminopyrenceN-demethylase,ADM)活性測定用分光光度法,氨基比林和紅霉素的終濃度分別為0.4,8mmol/L。谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(glutathioneStransferees,GST)活性測定參照文獻。蛋白含量測定采用folin酚試劑法。1.6統(tǒng)計方法;結(jié)果以ˉx±s表示,并用組間t檢驗分析差異的顯著性。2結(jié)果2.1小鼠肝微粒體cyp450酶活性檢測合用3d對小鼠肝微粒體細胞色素P450酶的影響:見表1。酶誘導(dǎo)劑地塞米松組明顯增加小鼠肝微粒體CYP450酶的含量,誘導(dǎo)率為189.3%,與對照組相比差異非常顯著(P<0.01)。酶抑制劑硝苯吡啶陽性對照組可使小鼠肝微粒體CYP450酶活性明顯降低(P<0.05)。BBH(200mg/kg)、CsA(45mg/kg)組CYP450酶活性與對照組比較雖有下降,但統(tǒng)計學(xué)上并無明顯差異(P>0.05)。而BBH和CsA合用3d后P450酶活性即明顯降低(P<0.01)。2.2erd酶活性測定合用對小鼠肝微粒體ERD酶活性的影響:見表2。給藥3d后,酮康唑陽性對照組可使小鼠肝微粒體ERD酶活性明顯降低(P<0.05)。BBH(200mg/kg)、CsA(45mg/kg)組ERD酶活性與對照組比較雖有下降,但統(tǒng)計學(xué)上無明顯差異(P>0.05)。而BBH合用CsA組ERD活性明顯降低(P<0.05)。給藥6d后,各用藥組肝微粒體ERD酶活性進一步降低,尤以BBH合用CsA組降低最為明顯(P<0.05)。2.3各給藥后各時間點adm酶活性的比較合用對小鼠肝微粒體ADM酶活性的影響:見表3。給藥3d時,BBH、CsA及兩藥合用組小鼠肝微粒體ADM酶活性與對照組比較均無明顯差異(P>0.05)。給藥6d時,BBH組和CsA組ADM酶明顯受到抑制(P<0.05),而兩藥合用組的抑制作用則更加明顯(P<0.01),抑制率達73.86%。酮康唑組給藥3d時的ADM酶活性與對照組無明顯差異,在給藥6d時則表現(xiàn)出明顯的誘導(dǎo)作用。2.4表1:表4:表4合用對小鼠肝微粒體GST酶活性的影響:見表4。給藥3或6d時,BBH、CsA、BBH+CsA組對GST酶活性均有明顯抑制作用(P<0.05)。3cch和csa的相互作用藥物間相互作用最重要的機制是藥物對CYP450酶活性的影響,本研究對小鼠肝微粒體CYP450酶測定結(jié)果表明:BBH和CsA對該酶雖都有不同程度的抑制,但與對照組沒有顯著差異。但是兩者相加,抑制作用似也相加,其抑制率(38.33%)比陽性對照硝苯吡啶(30.0%)還高,說明BBH與CsA合用對CYP450酶活性確有抑制作用。CPY3A是參與口服藥物首過效應(yīng)的主要酶系,也是造成藥物間相互作用的重要原因。CsA是公認(rèn)的CYP3A4底物,主要代謝途徑為羥化和N-去甲基化。CsA的血濃度可因合用CYP3A抑制劑如酮康唑、紅霉素、硫氮酮、硝苯吡啶、西米替丁等而升高。亦可因合用CYP3A誘導(dǎo)劑如糖皮質(zhì)激素、苯巴比妥、卡馬西平、利福平和苯妥英鈉而下降。紅霉素脫甲基酶是一種細胞色素P450同功酶,測定此酶主要反映了CYP3A的活性。本研究結(jié)果表明CsA是CYP3A抑制劑,且給藥6d比3d時抑制作用更強,這與其在臨床治療中表現(xiàn)出的自身抑制現(xiàn)象相符;BBH在3d時抑制作用不明顯,但在給藥6d時抑制率也達到35.83%;BBH和CsA都表現(xiàn)出時效關(guān)系。BBH與CsA合用抑制效應(yīng)明顯加強,3和6d的抑制率均在60%以上,比陽性對照藥酮康唑的抑制率還高許多。氨基比林N-脫甲基酶主要反映了CYP1A、2B1、2C11的活性,本研究結(jié)果表明,在給藥3d時,BBH、CsA和兩藥合用組均與對照組沒有顯著差異,但在給藥6d時,BBH和CsA均表現(xiàn)出明顯的抑制作用,而BBH與CsA合用組尤其顯著,抑制率高達73.86%,時效作用明顯,其機制是否與競爭性結(jié)合有關(guān)尚需進一步探討。GST是一組參與機體解毒功能的同功酶,其主要作用是催化還原型GSH與親電性化合物結(jié)合,形成無毒的結(jié)合物排出體外。GST本身也可以與親電性化合物結(jié)合,促進藥物及外源性物質(zhì)的代謝和清除。本研究結(jié)果表明無論是給藥3d還是6d,BBH、CsA和兩藥合用組均對該酶有抑制作用,但時效關(guān)系不明顯,且BBH與CsA合用組也并不比單藥的兩組抑制作用更強。CsA與BBH的相互作用以及BBH對CYP450的影響國內(nèi)外均未見文獻報道。本研究表明,BBH與CsA的組合是藥物代謝酶CYP450、ERD(CYP