煙草組織培養(yǎng)研究

煙草組織培養(yǎng)研究

草屬植物，屬于茄子科。它是一種含有咖啡因的堿性草本植物。它對昆蟲沒有傷害，但它會刺激人類的神經興奮，對神經也有很強的選擇性。一些雜草也可以用來制作殺蟲劑、煙堿、蘋果酸、檸檬酸等。目前,煙草一般采用有性繁殖,但繁殖的煙苗不均衡,易發(fā)生變異,而且易感病菌,造成多種病害發(fā)生,品質退化,從而影響經濟收入.而通過組織培養(yǎng)技術,可以保持煙草優(yōu)良品種的優(yōu)良性狀,減少病蟲害,從而達到高產優(yōu)質的目的.有關煙草組織培養(yǎng)已有不少報道,主要體現(xiàn)在以煙草葉片作為外殖體,近幾年研究重屬對煙草中片組織培養(yǎng)的影響也有部分報道.本研究以煙草幼嫩葉片、莖段以及帶有葉片的莖段等為外植體,對其組織培養(yǎng)技術進行更全面、系統(tǒng)的研究,以期為煙草的大規(guī)模生產和新優(yōu)品種的快速推廣奠定基礎.1材料和方法1.1材料表面取烤煙品種K326的幼嫩葉片、莖段和帶有葉片的莖段作為外植體.1.2方法1.2.1%水沖洗滅菌流程:外植體→流水沖洗30min→洗滌劑溶液浸泡10min→流水沖洗30min→(以下工作在超凈工作臺完成)75%酒精浸泡30s→無菌水沖洗2次(1min1次)→0.1%HgCl浸泡8min→無菌水沖洗6次(2min1次).1.2.2b.2.2細胞培養(yǎng)液的制備取九個錐形瓶分別編號為A.1,A.2,A.3,B.1,B.2,B.3,C.1,C.2,C.3,向其中各加入50mlMS培養(yǎng)基和0.8%~0.9%瓊脂,全部用封口膜封好,滅菌與消毒后備用.1.2.3激素種類的選擇、接種及觀察待錐形瓶冷卻到熱但不燙手時,按照下表,向錐形瓶中分別加入激素.待錐形瓶完全冷卻,瓊脂凝固時,按照表1所述,植入外植體,保證外植體的斷口插入瓊脂內.更換激素種類時,要先打掉移液槍的槍頭.接種完畢后,要使錐形瓶的瓶口在酒精燈的外焰上燎灼數(shù)秒,燎灼時要旋轉,避免燒壞.再把封口膜的內側迅速通過酒精燈外焰,蓋好封口膜.每隔一星期觀察記錄各組生長發(fā)育情況,統(tǒng)計葉片接種后面積變化、煙草莖+葉接種后再分化新葉數(shù)以及莖段接種后形成的愈傷組織橫截面積變化,以確定不同類型培養(yǎng)基對煙草外殖體分化的影響.2結果與分析2.1葉片剝削率隨日期推移,葉片在不斷長大.同時,葉片基部與培養(yǎng)基接觸的部分逐漸脫分化,顏色變黃再變白,不斷變淺,逐漸變得半透明.基部脫分化形成的愈傷組織生長較快,導致上邊葉片卷曲.在第三周,A.1組再分化出根,培養(yǎng)基中的根長8mm,在培養(yǎng)基外的根生出大量根毛(圖1);第四周,A.1組的根進一步伸長,暴露在空氣中的根更長.對于A.1組,B.1組,C.1組接種后的變化記錄如表2:2.2第4組.2組.4代.4和5.2組.8.2.3和10.2%.前葉的生成帶有莖的葉片脫分化、再分化速度較快,基部膨大變得透明,脫分化形成大的愈傷組織,頂部生長迅速,很快生出大量新葉塊.在第四周,A.2組再分化出根,暴露在空氣中的根生出大量根毛(圖2).原有的老葉變黃枯萎,逐漸死亡,大量新葉展開.對于A.2組,B.2組,C.2組生出的新葉片數(shù)目(原有的一片老葉不計)記錄如表3:2.3葉片的分化煙草莖段接種后,生長趨勢較弱,基部膨大,脫分化形成愈傷組織,逐漸再分化出葉片.剛分化出的葉片黃綠色,半透明,逐漸展開后綠色(圖3).對于A.3組,B.3組,C.3組的愈傷組織的生長記錄如表4:對于A.3,B.3,C.3組的愈傷組織橫截面積記錄如表5:3分析與討論3.1激素對根分離的影響把煙草的葉片、莖+葉片、莖段分別接種到生長素和細胞分裂素含量比例不同的MS培養(yǎng)基上,誘導分化.只在0.5mg·L-1NAA+0.1mg·L-16-BA的激素條件下先再分化出葉,隨后再分化出根,在0.1mg·L-1NAA+0.5mg·L-16-BA和0.5mg·L-1NAA+0.5mg·L-16-BA的激素條件下,只能分化出莖和葉.實驗表明,NAA濃度高于6-BA濃度時,有利于根的分化;NAA濃度低于6-BA濃度時,有利于芽的分化,抑制根的分化.NAA濃度同為0.5mg·L-1的兩組中,6-BA濃度為0.1mg·L-1時,有根分化形成,在6-BA濃度為0.5mg·L-1時不能分化形成根,表明高濃度的6-BA抑制根的分化.在實驗濃度范圍內NAA濃度變化對莖和葉的再分化作用不顯著,高濃度的6-BA有利于促進莖和葉的分化.3.2形態(tài)不穩(wěn)定因素:細胞成熟程度為小在相同的培養(yǎng)基中分別接種煙草的葉片、莖+葉片、莖段,實驗結果表明,帶有葉片的莖最容易誘導脫分化、再分化,僅有莖的外植體脫分化較容易,僅有葉的外植體的生長較快,但脫分化再分化較緩慢.導致這一結果的可能