五子衍宗丸對(duì)小鼠耐力和免疫功能的影響

五子衍宗丸對(duì)小鼠耐力和免疫功能的影響

五子衍宗丸是中醫(yī)補(bǔ)腎益精的傳統(tǒng)方劑，由枸杞、兔蠶絲籽、覆盆子、五味子和香蕉籽組成。臨床上主要用于治療腎虛腰痛,遺精早泄,陽(yáng)痿不育等男性性功能疾病,療效卓著。近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道從中醫(yī)補(bǔ)腎生髓益智的理論出發(fā),將該藥用于健忘、輕度認(rèn)知障礙的干預(yù)上療效明顯,并能提高機(jī)體免疫功能和抗應(yīng)激能力等。本文對(duì)其進(jìn)行相關(guān)藥效學(xué)研究。1材料表面1.1北京部分科學(xué)研究進(jìn)展五子衍宗丸,1g·g-1生藥干粉,批號(hào)20080909,北京同仁堂股份有限公司科學(xué)研究所提供;男寶膠囊,0.3g/粒,批號(hào)1001074,山西康威制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn);鹽酸左旋咪唑片,批號(hào)060719,山東省莒南制藥廠生產(chǎn)。1.2圓形水池、圖像自動(dòng)采集和處理系統(tǒng)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所),由圓形水池、圖像自動(dòng)采集和處理系統(tǒng)組成。紫外分光光度計(jì)SHMADZUUV-120-02(日本產(chǎn));電子天平DENVERINSTRUMENT(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。1.3化學(xué)試劑及試劑炭黑墨汁(生物染色),批號(hào)20081128,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn);2,4-二硝基氟苯(DNFB),批號(hào)080702,中國(guó)醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn);丙酮,批號(hào)20081017,北京世紀(jì)紅星化工有限責(zé)任公司生產(chǎn);橄欖油,批號(hào)F20080219,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn);鈉石灰,批號(hào)20080315,上海五四化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。1.4syxk-ss選用ICR雄性小鼠,體重18~22g,動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(京)2007-0001;由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。在中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng),二級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)施,合格證號(hào)SYXK(京)2009-0001。室溫22~25℃,相對(duì)濕度45%~60%。2方法2.1動(dòng)物ig小鼠實(shí)驗(yàn)將小鼠隨機(jī)分為5組,10只/組。即:正常對(duì)照組、男寶組(0.5g·kg-1)、五子衍宗丸高、中、低劑量組(2.4,1.2,0.6g生藥·kg-1)。(五子衍宗丸臨床用量按生藥計(jì)為9.47g/人,按70kg/人計(jì)算為0.135g.kg-1,小鼠等效劑量為1.23g·kg-1)。所有動(dòng)物ig給藥,正常對(duì)照組ig等體積蒸餾水。1次/d,連續(xù)2周,訓(xùn)練4d后進(jìn)行水迷路實(shí)驗(yàn)(訓(xùn)練期間繼續(xù)ig給藥)。第5天藥后1h,進(jìn)行水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)。通過(guò)觀察和記錄小鼠尋找并爬上平臺(tái)的路線圖及所需時(shí)間,分析和推斷小鼠的學(xué)習(xí)、記憶和空間認(rèn)知等方面的能力。Morris水迷宮圖像自動(dòng)采集和處理系統(tǒng)能自動(dòng)地采集動(dòng)物的入水位置、游泳的速度、搜索目標(biāo)的所需時(shí)間、運(yùn)行軌跡和搜索策略等參數(shù),并可對(duì)所采集的各種數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。2.2尾靜脈激光血藥向血樣采集將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為6組,左旋咪唑組(25mg·kg-1),其他組別同實(shí)驗(yàn)2.1。各組按劑量連續(xù)ig給藥,正常對(duì)照組ig等體積蒸餾水。1次/d,連續(xù)給藥1周。末次給藥后1h,尾靜脈注射10%炭黑墨汁(0.2mL/只)。分別于2min和10min,從眼眶靜脈取血20μL,加入4mL蒸餾水中搖勻。用分光光度計(jì)在600nm下比色,測(cè)吸收度(A),計(jì)算廓清指數(shù)K值。2.3小鼠耳片稱質(zhì)量檢測(cè)將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為7組,模型組,左旋咪唑組(25mg·kg-1),其他組別同實(shí)驗(yàn)2.1。各組按劑量ig給藥,1日/次,連續(xù)給藥3d后,除正常對(duì)照組外,每鼠腹部電推去毛,范圍約2cm×2cm大小。將新鮮配制的1%DNFB溶液50μL均勻涂抹于小鼠腹部(致敏)。致敏后第5天,將新鮮配制的1%DNFB溶液20μL均勻涂抹于各組小鼠右耳兩面(攻擊)。在致敏和攻擊期間各組繼續(xù)ig給藥,24h后,頸椎脫臼處死小鼠剪下左右耳殼,用打孔器取下直徑8mm的耳片稱質(zhì)量。左右耳片質(zhì)量之差為腫脹度(FPR)。2.4藥,2次/d,連續(xù)1周實(shí)驗(yàn)分組、給藥劑量同實(shí)驗(yàn)2.1。各組按劑量ig給藥,1次/d,連續(xù)1周。末次藥后1h,將小鼠迅速放入裝有鈉石灰(10g/瓶)的250mL廣口瓶中,用凡士林密封瓶蓋,秒表記錄小鼠缺氧死亡時(shí)間。2.5量ig給藥方案實(shí)驗(yàn)分組、給藥劑量同實(shí)驗(yàn)2.1。各組按劑量ig給藥,1次/d,連續(xù)1周。末次給藥后1h,將小鼠迅速放入常溫水中(水深20㎝),用秒表計(jì)算自小鼠落水至溺死所需時(shí)間。2.6統(tǒng)計(jì)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以u(píng)e0af±s表示,采用SPSS11.5forWindows軟件進(jìn)行方差分析,以P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果3.1小鼠尋找并安裝上平臺(tái)所需時(shí)間及總路由的情況實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。經(jīng)過(guò)4d的訓(xùn)練,五子衍宗丸各劑量組及男寶組小鼠尋找并爬上平臺(tái)所需時(shí)間及總路程明顯縮短,與正常對(duì)照組比較具有非常顯著性差異(P<0.05或0.01);但小鼠游泳的速度各組間無(wú)明顯差異。3.2影響小鼠的非特異性免疫功能實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。五子衍宗丸高劑量組廓清指數(shù)K值明顯增加,與正常對(duì)照組比較具有非常顯著性差異(P<0.01)。3.3造模成功的分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。實(shí)驗(yàn)小鼠各組耳腫脹度明顯增加,與正常對(duì)照組比較具有極顯著性差異(P<0.001),說(shuō)明造模成功;左旋咪唑組腫脹度明顯增加與模型組比較具有顯著性差異(P<0.05),五子衍宗丸各劑量組及男寶組與模型組比較無(wú)明顯差異,且保持在正常水平上。3.4影響小鼠的抗缺氧能力實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表4。五子衍宗丸高、中劑量組及男寶組與正常對(duì)照組比較,耐缺氧時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.05或0.01)。3.5強(qiáng)光養(yǎng)血藥,增強(qiáng)對(duì)小鼠腦神經(jīng)遞質(zhì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。五子衍宗丸高劑量組及男寶組與對(duì)照組比較,常溫游泳時(shí)間有所延長(zhǎng),具有顯著性差異(P<0.05)。中醫(yī)認(rèn)為“腎為先天之本,生命之根”、“腎主智”,腎虛髓空是智不足之根本。人體的正常生長(zhǎng)、發(fā)育、衰老與腎密切相關(guān),腎中精氣決定著人的生、老、病、死等生命活動(dòng)的條件。近年來(lái)有實(shí)驗(yàn)及臨床研究報(bào)導(dǎo),腎虛者多記憶力下降,神經(jīng)遞質(zhì)含量及受體數(shù)量下降。中醫(yī)又有“正氣存內(nèi),邪不可干。邪之所湊,其氣必虛”的論述,指出“正氣”與機(jī)體對(duì)疾病抵抗力的內(nèi)在聯(lián)系,所以,中醫(yī)“虛證”與免疫功能有關(guān);抗應(yīng)激作用是機(jī)體處于各種不利的內(nèi)外環(huán)境條件下所進(jìn)行的一系列反應(yīng)。補(bǔ)腎壯陽(yáng)藥多能增強(qiáng)機(jī)體對(duì)各種有害刺激的抵抗能力,糾正腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的改變,使機(jī)體在惡劣條件下延長(zhǎng)生存時(shí)間、提高生存率。五子衍宗丸是傳統(tǒng)